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大剂量岷县当归预处理对心肌缺血再灌注大鼠NO、NF－κB 的影响
目的：观察大剂量岷县当归水煎液预处理对缺血－再灌注大鼠心肌组织NO、NOS含量及心肌细胞NF－κB、IκB－α表达的影响作用。方法：以不同大剂量岷县当归水煎液灌胃6周后，取大鼠心脏进行离体灌注，复制当归缺血预适应模型，以化学法测定上清液中NO、NOS含量，SP免疫组化检测心肌细胞NF－κB、IκB－α的表达。结果：与缺血预适应组对比，中、高剂量岷县当归水煎液预处理组NO、NOS含量均显著增高，差别有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01），且呈剂量－效应关系。与缺血预适应组对比，中、高剂量当归水煎液预处理组NF－κB在胞浆和胞核中的表达均有不同程度减少，IκB－α表达相应增加，差别有统计学意义（ P＜0．05或P＜0．01）。结论：大剂量岷县当归水煎液预处理可通过提高缺血－再灌注大鼠心肌组织NO含量、抑制NF－κB表达来保护缺血－再灌注大鼠的心肌细胞。
关键词： 岷县当归水煎液/药效学 缺血-再灌注/药物作用 细胞凋亡 NO NOS NF-κB IκB-α 动物模型 大鼠 -
麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞作用的实验研究
目的 研究麦考酚酸(mycophenolic acid,MPA)对翼状胬肉成纤维细胞(pterygium fibroblasts,PFB)活性的影响,并对其相关机制进行探讨.方法 体外培养PFB,MTT比色法、Brdu掺入法观察MPA对PFB增殖的抑制作用,Western blot检测PFB内核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)P65及IκB-α蛋白的表达.结果 MTT比色法发现不同浓度的MPA和丝裂霉素C对PFB增殖均有抑制作用,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且呈时间、剂量依赖性,半数抑制浓度下48 h抑制率分别为(31.918 5±1.277 6)％、(31.123 5±1.582 6)％,72 h抑制率分别为(50.292 9±2.457 4)％、(47.972 9±0.614 2)％.Brdu掺入法发现不同浓度MPA组积分光密度值与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),进一步证实MPA可抑制PFB的增殖；Western blot显示,MPA可抑制PFB胞核内P65表达(与空白对照组表达量1.542 9±0.142 7相比,MPA组表达量仅为0.886 4±0.072 8),并能增加胞浆IκB-α的表达(空白对照组为1.559 2±0.267 6,MPA组为2.142 5±0.305 2).结论 MPA对PFB增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与其抑制PFB的NF-κB通路有关.
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复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者结肠粘膜IκB-α表达的作用
目的 观察复方苦参结肠溶对溃疡性结肠炎(UC)患者(湿热内蕴证)结肠粘膜IκB-α蛋白表达的作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法 经结肠镜及病理证实的24例UC患者,随机分为中药组和西药组,中药组16例用复方苦参结肠溶治疗,西药组8例用美沙拉嗪治疗,共治疗8周.采用免疫组化法检测两组治疗前后IκB-α蛋白的阳性细胞表达率 .结果 治疗前全部结肠粘膜IκB-α蛋白阳性细胞表达率明显高于治疗后(P＜0.01),治疗后复方苦参结肠溶组结肠粘膜IκB-α蛋白阳性细胞表达率与美沙拉嗪组无明显统计学意义(P＞0.05 ).结论 复方苦参结肠溶组使UC患者结肠粘膜IκB-α蛋白阳性细胞表达率明显降低,这可能是其治疗UC的作用机理之一 .
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曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用.方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化.结果:①荧光显微镜观察:分别作用45 min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA+TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白.免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA+TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA+TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P＜0.05);免疫印迹结果也显示,作用45 min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA+TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2 h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性.结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活.TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用.
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黑水缬草对老年痴呆模型大鼠脑内iNOS、 COX-2和IκB-α表达的影响
目的:探讨黑水缬草提取物对老年痴呆大鼠大脑皮质神经元和海马神经元炎性反应的影响.方法:利用多因素造成大鼠老年痴呆病理复合模型,采用免疫组化法观察老年痴呆大鼠大脑皮质神经元和海马神经元一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)及核因子NF-κB(IκB-α)表达的变化.结果:黑水缬草各剂量及阳性对照药均显示出一定的疗效,效果显著优于模型组和对照组(P<0.05),其中50%乙醇树脂洗脱高剂量组效果尤为显著(P<0.05或P<0.01),且作用呈量效关系.结论:黑水缬草50%乙醇树脂洗脱高剂量能有效抑制痴呆大鼠脑内神经元炎性反应,其作用机制可能足通过减轻iNOS过表达,抑制COX-2活性及减少对核因子NF-κB的激活来实现的.
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灯盏花注射液通过抑制IκB-α/NF-κB/ICAM-1通路减轻大鼠肠缺血再灌注损伤
目的 探讨灯盏花注射液在肠缺血再灌注早期小肠损伤中的作用及其机制.方法 48只8周龄健康雄性SD大鼠随机分为假手术对照(Sham)组,肠I/R损伤(IIR)组,灯盏花注射液处理组(EB+IIR)组,IκB-α抑制剂TPCA-1处理(TP+IIR)组.EB+IIR组在术前7 d每天经腹腔注射给予灯盏花注射液20 mg/(kg·d),TP+IIR组在术前30 min尾静脉给予TPCA-1(12 mg/kg),另两组注入等量生理盐水.采用夹闭SD大鼠肠系膜前动脉45 min后再灌注6h的方法造成肠缺血再灌注损伤模型.处死大鼠取小肠标本,HE染色观察肠组织病理学改变,ELISA检测肠粘膜组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平;蛋白印迹法检测肠粘膜组织IκB-α、NF-κB、ICAM-1蛋白表达水平.结果 肠缺血再灌注导致明显小肠损伤,肠组织炎症指标明显增高,表现为TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显升高(与假手术组比较P<0.05),IκB-α/NF-κB/ICAM-1通路活化;灯盏花注射液预处理可抑制小肠组织IκB-α/NF-κB/ICAM-1活化,减轻小肠缺血再灌注引起的早期肠道损伤,并下调小肠组织TNF-α、IL-1β和IL-6含量(与缺血再灌注组比较P<0.05),同样,应用IκB-α磷酸化抑制剂TPCA-1处理后,IκB-α/NF-κB/ICAM-1通路受到抑制,小肠损伤程度得到减轻.结论 灯盏花注射液预处理通过抑制IκB-α/NF-κB/ICAM-1通路减轻大鼠肠缺血再灌注损伤.
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电磁辐射急性暴露对小鼠IL-12表达的影响及其机制
目的 观察电磁辐射对昆明种小鼠白细胞介素-12 (IL-12)表达的影响并探讨其机制.方法 使用平均功率密度为90 mW/cm2 900 MHz电磁辐射对昆明种小鼠及原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)进行急性辐照.辐照后,ELISA检测IL-12表达量、RT-PCR检测IL-12p40亚基mRNA表达水平、Western blot检测Mφ细胞质IkB水平以及EMSA检测MφNF-kB转录活性的变化,观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)对电磁辐射影响IL-12表达的干预作用.结果 急性辐照后第5天,小鼠脾脏组织IL-12p40 mRNA表达水平以及小鼠血清中IL-12p70含量达到峰值,增幅分别为9.32％、259.76％,与正常组相比差异有显著性(P＜0.05),辐照后第11天恢复至正常水平.辐照后8h,小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)细胞质中IkB-α含量降到低,降幅为27.97％;辐照后12 h,小鼠腹腔巨噬细胞IL-12p40mRNA表达水平及培养上清中IL-12p70含量达到峰值,与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.01).急性辐照后,各时相点均出现明显的NF-κB-探针结合带,辐照后8h为显著,正常对照组则检测不出明显的结合带.PDTC能够抑制电磁辐射急性暴露导致的IL-12高表达,抑制率为(83.43±7.58)％.结论 900 MHz电磁辐射急性暴露通过增加NF-κB活性,导致IL-12表达量增高.
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严重烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB、IκB-α、TNF-α的变化及调控
目的观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-κB抑制剂PDTC后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB活性、IκB-α的表达及TNF-α的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制.方法以15%体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型,收集腹腔巨噬细胞,采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,改良的ELISA及Western Blotting法测IκB-α的表达,反转录-PCR测TNF-αmRNA的表达.结果烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12 h达到高峰.NF-κB伤后明显活化,于2 h达到了高峰,早于TNF-α的增多,IκB-α的表达先降低,后升高.予PDTC后NF-wκB活性及TNF-α mRNA表达量均下降.结论烫伤后NF-κB活性及TNF-α表达明显增强,IκB-α对NF-κB在高水平上维持着一种制约关系.烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB途径参与TNF-α表达的调控.
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兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB抑制蛋白的影响
目的:观察兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎(uc)大鼠结肠组织中核因子-kB(nuclear factor-kappa B,NF-kB)及其抑制蛋白(inhibitor of kB,IkB)表达的影响,探讨该方治疗UC的可能作用机制.方法:将60只wistar大鼠,随机分成5组:正常组、模型组、柳氮磺吡啶组、兰茵凤扬化浊解毒方高剂量组、兰茵凤扬化浊解毒方低剂量组,每组12只.除正常组外,其余四组大鼠采用三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene-sulfonic acid,TNFs)/乙醇联合造模法诱导uc动物模型.造模后第3天,正常组及模型组用生理盐水灌胃,各治疗组予以药液灌胃,连续治疗14天,观察大鼠活动、体重、大便性状等一般情况变化;采用免疫组化法检测大鼠结肠粘膜IkB-а、NF-lB的表达水平.结果:中药高剂量组、柳氮磺吡啶组与中药低剂量组结肠组织IkB-а与NF-KB蛋白阳性细胞表达率分别为(11.41±1.46)%与(9.12±1.36)%、(13.13±1.67)%与(10.35±0.95)%、(13.28±1.55)%与(10.50±1.02)%.均低于模型组(20.05±1.77)%与(19.42±1.24)%(P<0.05),中药高剂量组与柳氮磺吡啶组相比,差异有统计学意义(P<0.05),中药高剂量组与正常组比较,无统计学意义(P>0.05),结论:兰茵凤扬化浊解毒方治疗UC的作用机理可能与下调IkB-а及NF-kB的表达水平有关.
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两型TNF-α对单核细胞系U937细胞功能的影响
目的: 比较两型TNF-α对单核细胞系U937细胞功能的影响, 以探讨跨膜型TNF-α在炎症中的作用.方法: 通过吞噬、 RT-PCR、 Western blot及FACS等方法, 比较两型TNF-α对U937细胞生物学功能(包括吞噬、细胞因子mRNA、胞质IκB-α及ICAM-1表达等)的影响.结果: 分泌型TNF-α可明显促进U937细胞吞噬功能, 使TNF-α、IL-1β及IL-8 mRNA积累增加, 促进胞质IκB-α降解及提高黏附分子ICAM-1的表达; 而跨膜型TNF-α对上述U937细胞的生物学功能则无明显影响.当二者联用时, 跨膜型TNF-α与分泌型TNF-α亦无协同作用.结论: 分泌型TNF-α对U937细胞具有明显地激活作用; 而跨膜型TNF-α则无影响, 提示两型TNF-α在炎症过程中的作用不同.
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内毒素、地塞米松对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞中NF-κB活化的影响
目的探讨内毒素(LPS)和地塞米松(Dex)对体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中NF-κB活化的影响,以及AM中NF κB活化在急性肺损伤中的可能作用.方法通过建立大鼠AM体外培养技术,应用免疫组化染色法,观察LPS和Dex对AM中NF-κB P65,IκB-α、TNF-α和ICAM-1蛋白表达的动态变化.结果 LPS能使培养的AM中 NF-κB P-65,TNF-α和ICAM-1的表达增加,IκB-α的表达降低;Dex的作用与LPS恰相反.结论 LPS促进AM中的NF-κB活化,可能是急性肺损伤肺内炎症损害发生的启动及促进因素;Dex抑制NF-κB的活化,可能是其抗炎作用的重要机制之一.
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参附注射液对心肌缺血再灌注老年大鼠NF-κB 及IκB-α 表达的影响
目的:探讨参附注射液对心肌缺血再灌注(I/R)老年大鼠心肌组织NF-κB 及IκB-α 的影响.方法:健康Wistar老年大鼠30 只,18 月龄,随机分为假手术组、模型组、参附组,每组10 只.采用结扎左冠状动脉前降支法制备I/R 模型.运用免疫组化方法观察I/R后心肌组织细胞中NF-κB 及IκB-α 蛋白表达;通过电镜观察心肌组织细胞结构变化情况.结果:与假手术组比较,模型组NF-κB 表达明显增加(P＜0.05),IκB-α 表达明显下降(P＜0.05);与模型组相比,参附组NF-κB 表达明显下降(P＜0.05),IκB-α 表达明显增加(P＜0.05).电镜观察结果显示参附组心肌组织细胞结构受损明显减轻.结论:参附注射液可增加心肌组织中IκB-α 的水平,减弱其降解作用,通过抑制NF-κB 活性,从而阻断NF-κB调控的炎症反应及细胞凋亡,对I/R 后心肌组织损伤起防治作用.
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复方唇香草颗粒干预As斑块炎症反应信号通路的实验研究
目的：探讨以维吾尔药为主的复方唇香草颗粒对 Apo-E基因敲除小鼠动脉粥样硬化（As）斑块 IκK-β/IκB-α/NF-κB 信号通路的影响及其稳定 As斑块作用的可能机制。方法选择70只6～8周龄 Apo-E基因敲除小鼠，予高脂饮食喂养12 w后，随机处死10只，取主动脉根部，HE染色普通光镜下观察并确定As形成，其余小鼠随机分为模型组（生理盐水）、中药对照组（血脂康）、西药对照组（辛伐他汀）及复方唇香草颗粒高、中、低剂量组，每组10只，给药12 w后处死，采用原位杂交法检测小鼠斑块内 IκK-β、IκB-α和 NF-κB mRNA表达。结果与模型组比较，中药对照组、西药对照组及复方唇香草颗粒高、中、低剂量组 IκK-β和 NF-κB mRNA的表达降低（P ＜0．01），IκB-αmRNA的表达增高（P ＜0．05）；而西药对照组与复方唇香草颗粒高、中剂量组比较，差异均无统计学意义（P ＞0．05）。结论复方唇香草颗粒具有抗 As的作用，其机制可能与调控 IκK-β/IκB-α/NF-κB 信号通路的活动而抑制炎症反应有关。
