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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎β淀粉样前体蛋白的影响
目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内轴突病变标记物β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中APP蛋白含量.结果: APP蛋白表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01),模型组与中药组比较有极显著性差异(P值均<0.01),与激素组比较有显著性差异(P<0.05),激素组与中药组比较有显著性差异(P<0.05).结论:EAE小鼠APP表达升高,提示存在轴索损害.醋酸泼尼松、益肾达络饮均降低EAE小鼠中枢神经组织内APP的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松.益肾达络饮自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调APP、抑制轴突变性有一定关系.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎IFN-γ、IL-4的影响
采用ELISA方法,观察益肾达络饮对PLP139-151诱导的高敏感品系SJL小鼠自身免疫性脑脊髓炎的症状、中枢神经系统内细胞因子IFN-γ、IL-4的影响.结果发现益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与抑制局部炎症,促进Th1/Th2比例平衡,有一定关系.
关键词： 自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 益肾达络饮 γ-干扰素(IFN-γ) IL-4 -
口服髓鞘碱性蛋白诱导免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究
目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型,探讨口服自身抗原诱导免疫耐受对大鼠EAE的防治作用.方法 在普通Wistar大鼠经1次足跖真皮内注射完全弗氏佐剂-豚鼠全脊髓匀浆或完全弗氏佐剂-髓鞘碱性蛋白乳剂加百日咳疫苗诱发EAE疾病;另在大鼠致炎前及发病后口服髓鞘碱性蛋白(MBP),观察其对EAE的防治作用.结果 在Wistar大鼠成功地诱发了EAE,发病率将近90%.大鼠在致炎前口服MBP,可明显推迟EAE发病时间,降低EAE发病率,使神经组织病理改变明显改善.大鼠发生EAE后给予MBP,可明显控制发病动物的病情,使病程缩短及减轻患鼠神经组织的炎症程度.另外,在耐受鼠由MBP引起的迟发型超敏反应(DTH)以及体外针对MBP的淋巴细胞增殖反应也明显受到抑制.结论 口服MBP可引起特异性的免疫耐受,从而产生对实验性自身免疫性脑脊髓炎的防治作用.
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骨髓间充质干细胞治疗EAE的实验研究
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果.方法 MOG35-55免疫C57BL/6小鼠制备EAE模型、BMSCs进行ELISA法检测各组淋巴细胞培养上清液中细胞因子INF-γ、IL-17、IL-10的水平.结果 BMSCs能够显著抑制INF-γ和IL-17的分泌(P＜0.05),促进IL-10的分泌(P＜0.05).结论 BMSCs能有效抑制小鼠EAE.
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神经营养因子-3基因修饰的嗅鞘细胞移植治疗自身免疫性脑脊髓炎的实验研究
目的 研究神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的髓鞘及轴突的修复作用.方法 用逆转录病毒介导神经营养因子-3(NT-3)基因转染嗅鞘细胞(OEC),将其移植入EAE侧脑室,荧光标记后观察其在体内的迁徙、分布特点;运用皮质体感诱发电位监测(CSEP)、超微结构观察、功能评分;RT-PCR方法检测NT-3mRNA转录水平,并与对照组、OEC移植组相比较等方法对髓鞘及轴突修复进行评价.结果 (1)OEC-NT-3在EAE体内存活,可广泛迁徙至病灶远端且至少可以持续存活4周.(2)超微结构发现转基因治疗组4周后,轴索结构完整,周围髓鞘板层结构清楚,明显优于另外二组.(3)4周后,转基因组CSEP潜伏期明显缩短,波幅增加,明显优于其他二组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)转基因组NT-3mRNA转录水平为(212.32±16.14)×10-2,明显高于OEC组(1.23±0.13)×10-2及对照组(1.98±0.19)×10-2,差异有统计学意义(P<0.01).结论 NT-3基因修饰的OEC在持续表达神经营养因子,且可促进EAE的神经修复.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎MCP-1的影响
[目的]研究益肾达络饮对髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP139-151)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子(MCP-1)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.[方法]采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术,测定各组小鼠中枢神经组织中MCP-1蛋白和MCP-1 mRNA的含量.[结果]正常组与模型组、激素组、中药组MCP-1蛋白、MCP-1 mRNA含量相比较均有极显著性差异(P＜0.01),中药组、激素组与模型组MCP-1蛋白、MCP-1 mRNA含量相比较均有极显著性差异(P＜0.01);中药组、激素组相比较有显著性差异(P＜0.05).[结论]益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低MCP-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调MCP-1,抑制单个核细胞的趋化性,减轻炎性浸润,抑制局部炎症有一定关系.
关键词： 自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 益肾达络饮 髓鞘蛋白脂质蛋白多肽 -
柴胡对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症的干预作用
目的：探讨柴胡对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠干预作用,为临床应用柴胡治疗多发性硬化(MS)提供依据。方法C57雌性小鼠40只,随机分为空白对照组、EAE模型组、泼尼松组[7.8 mg/(kg· d)]和柴胡组[1.95 g/(kg· d)],每组10只。EAE模型组、泼尼松组和柴胡组6周龄时用 MOG3555多肽免疫建立 EAE模型,造模后第3天灌胃给予蒸馏水或药物至实验结束。自造模当天观察各组小鼠体重、行为学；造模后第16天(发病高峰期)取脊髓组织行 HE染色,观察炎性细胞浸润情况；采取尾静脉血,检测与多发性硬化主要相关炎症因子白细胞介素(IL)17E、γ干扰素(IFN γ)、IL 4、IL 21、IL 10、IL 23、IL 12(p70)、IL 17A、IL 17F 和肿瘤坏死因子(TNF)α水平。结果与空白对照组比较,EAE模型组小鼠发病高峰外周血中 IL 17E、IFN γ、IL 17F水平升高(P<0.05),IL 4水平降低(P<0.05)；与 EAE模型组比较,发病高峰期泼尼松组外周血中 IL 17E、IFN γ、IL 17F水平降低(P<0.05或P<0.01),柴胡组 IL 17E和 IFN γ水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论柴胡通过抗炎机制减轻 EAE小鼠的病情,可作为 MS治疗的参考。
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补阳还五汤对致脑炎性T细胞的免疫调节作用研究
目的:探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)致脑炎性T细胞的免疫调节作用.方法:C57BL/6雌性小鼠,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导建立EAE模型,免疫后第9天分离脾脏T淋巴细胞,并培养.设补阳还五汤组和PBS对照组(对照组).48 h后流式细胞术检测T细胞亚群的变化,检测CD4+CD25+、CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+的表达.ELISA法测定上清中IL-10、IL-1β、IL-17、TNF-α的水平;Western blot法检测T细胞CCL-20、MIP-1α、IFN-γ的表达.结果:与对照组比较,补阳还五汤组可以减少CD4+IFN-γ+T细胞,增加CD4+CD25+、CD4+IL-10+T细胞;抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-17、TNF-α、IFN-γ的释放,同时促进抗炎性细胞因子IL-10的释放,抑制化学趋化因子CCL-20、MIP-1α的表达.结论:补阳还五汤具有转化炎性Th1型为抗炎的Th2型及调节性T细胞,抑制炎性反应,降低T细胞趋化因子的表达,提示补阳还五汤具有治疗EAE的潜能.
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雷公藤多甙对实验性自身免疫性脑脊髓炎核因子-κB和IL-2的影响
目的 探讨雷公藤多甙(TWP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)Lewis大鼠核因子-κB(NF-κB P65)和IL-2的影响.方法 雄性Lewis大鼠随机分为正常对照组(n=10)、TWP治疗组(n=10)及模型组(n=10).用髓鞘蛋白(MBP)免疫雄性Lewis大鼠制作EAE模型.观察TWP对大鼠发病率、神经功能评分、发病时间和组织病理改变的影响,采用免疫组织化学法检测发病急性期脑组织NF-κB表达的情况,ELISA法检测血浆中IL-2的水平.结果 与EAE模型组相比,TWP治疗组神经功能评分降低(3.36±0.64 vs 2.10±0.43,P<0.05),但发病率无明显差异,平均发病时间推迟[(10.13±0.76)d vs (12.22±0.81)d,P<0.05],脑和脊髓的病灶数目也减少(26.21±0.72 vs 12.41±0.56,P<0.05),血清中IL-2的含量减少[(62.56±8.53)pg/ml vs(41.46±6.56)pg/ml,P<0.05],脑组织NF-κB P65阳性细胞数减少(72.46±2.41 vs 32.56±1.56,P<0.05).结论 TWP能有效干预Lewis大鼠EAE的发病,改善病理变化,其机制可能与下调NF-κB及IL-2表达有关.
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银杏提取物对自身免疫性脑脊髓炎小鼠脱髓鞘免疫炎性病变的影响
目的 探讨银杏提取物(GBE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脱髓鞘免疫炎症病变的影响.方法 将小鼠分为EAE模型组(腹腔注射生理盐水)和GBE组[腹腔注射GBE 70 mg/(kg·d)],应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(MOG33-55)配以完全弗氏佐剂(CFA)免疫小鼠,诱发EAE模型.通过神经功能评分、免疫组化染色以及酶联免疫吸附实验(ELISA),观察GBE对EAE小鼠的影响.结果 GBE组小鼠发病潜伏期[(12.5±0.64)d]较EAE组[(10.7±0.47)d]显著延长(P<0.05),并且GBE组发病高峰期(CFA免疫后第21天)神经功能评分较EAE组显著降低(P<0.05).海马伞矢状切片免疫组化染色结果证实GBE组CD4+T淋巴细胞较EAE组明显减少,仅可见CD4+T淋巴细胞散在分布.ELISA检测结果显示发病高峰期GBE组TNF-α含量较EAE组明显降低(P<0.05).结论 GBE可能通过抑制CD4+T淋巴细胞激活、减少炎症介质释放,从而保护延缓EAE小鼠脱髓鞘病变进程.
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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠p38的变化及益肾达络饮的影响
目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内p38的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中p38蛋白含量.结果:p38表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01);与模型组比较,激素组有显著性差异(P<0.05),中药组有极显著性差异(P<0.01);激素组与中药组比较,有显著性差异(P<0.05).结论:EAE小鼠p38表达升高,提示EAE病变过程中可能激活p38MAPK信号转导通路.醋酸泼尼松、益肾达络饮均能降低EAE小鼠中枢神经组织内p38的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松.益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能通过下调p38,抑制p38MAPK活化,从而改善机体免疫紊乱.
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二次免疫诱导C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的建立
目的:探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的可能性及其发病特点.方法:使用小鼠脑脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)免疫C57BL/6J小鼠,完全福(氏)免疫佐荆为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型.结果:自制SCH免疫C57BL/6J 小鼠可见明显脱髓鞘改变.两次免疫法与一次免疫法相比,发病率较高(P＞0.05),神经功能评分较高(P＞0.05),发病时间延长(P＞0.05).结论:SCH免疫C57BL/6J小鼠的EKE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨.
关键词： 自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 C57BL/6J小鼠 -
左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中凋亡蛋白Fas、 Bax表达的影响
目的:观察左、右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE )大鼠脑组织中凋亡蛋白Fas、Bax表达的影响.方法:用髓鞘碱性蛋白(myelin basic proteir68-86,MBP68-86)免疫Lewis 大鼠建立EAE模型.观察各组大鼠体重体温变化,饮食和饮水变化,神经功能评分,发病率、死亡率、潜伏期及病程变化.取脑和脊髓,HE染色后进行病理观察；用免疫组化法检测大鼠脑组织中Fas、Bax的表达情况.结果:左归丸组和右归丸组明显减轻病灶区域的炎性细胞浸润,对Fas、Bax的表达均有一定的抑制作用,与激素组类似.结论:左、右归丸均有防治小鼠EAE的作用,其作用机制可能与调节细胞凋亡蛋白Fas、Bax的表达有关.
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不同剂量阿托伐他汀钙对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内核转录因子-κB表达及白细胞介素-2、-10水平的影响
目的 观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠不同发病阶段脊髓内核转录因子(NF)-κB表达及血清白细胞介素(IL)-2、IL-10的水平变化及不同剂量阿托伐他汀钙对其影响.方法 以50%豚鼠全脊髓匀浆诱导Wistar大鼠EAE致病模型,采用量化评分法,比较不同剂量阿托伐他汀钙对EAE大鼠脊髓中NF-κB表达及对血清IL-2、IL-10的影响.结果 高剂量阿托伐他汀钙可降低血清IL-2水平,升高IL-10水平,下调NF-κB在脊髓中的表达(P<0.05),延长EAE大鼠发病的潜伏期,降低EAE大鼠神经功能评分.结论 高剂量阿托伐他汀钙能显著改善EAE大鼠病情程度及调节血清IL-2、IL-10水平.
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神经生长因子对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用
目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型,探讨神经生长因子(hNGF)对豚鼠EAE的保护作用.方法豚鼠经一次足跖真皮内注射完全福氏佐剂-豚鼠全脊髓匀浆,诱发EAE疾病;在豚鼠致炎前注射hNGF,观察其对EAE临床症状、发病率及脊髓病变的影响.结果模型组豚鼠免疫注射后相继出现明显的EAE症状,发病率为9/10.豚鼠在致炎前注射hNGF,可明显控制病情,降低E AE发病率,明显改善脊髓的病理改变,且hNGF的作用呈剂量依赖性. 结论 hNGF对实验性自身免疫性脑脊髓炎有显著的保护作用.
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实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠Th1、Th2和Th17免疫反应检测
目的 探讨不同类型免疫反应在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用.方法 24只SD大鼠随机均分为EAE组和对照组,通过行为观测和大脑微观形态学确认免疫诱导的EAE模型,用ELISA法检测淋巴结和脾细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ和血清中IgG水平,流式细胞术检测淋巴结和脾细胞中IL-17及Foxp3细胞频数.结果 与对照组相比,EAE组IgG、IFN-γ、IL-17及IL-4水平均明显增高(P＜0.05或P＜0.01).结论 Th1、Th2和Th17免疫细胞在EAE的发病均起着重要的作用.
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火把花根片对EAE大鼠模型VCAM-1和L-选择素的影响
目的 探讨火把花根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型的治疗作用以及对VCAM-1和L-选择素的影响.方法 模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE模型;治疗组在模型组基础上予以火把花根(300mg.kg-1.d-1,每日2次),观察动物表现并评分,HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变,免疫组化技术测定脑和脊髓的VCAM-1和L-选择素(L-selectin)水平.结果 治疗组未出现临床症状,VCAM-1为(2.13±0.99),L-selectin为(1.88±0.64),与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少,髓鞘结构完整.结论 火把花根片对EAE有治疗作用,其作用机制与抑制VCAM-1及L-selectin表达有关.
关键词： 自身免疫性脑脊髓炎 火把花根 血管细胞粘附分子-1 L-选择素 -
血管活性肠肽对自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经保护作用及其机制
目的：探讨血管活性肠肽（ VIP）对自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）大鼠的神经保护作用及其相关作用机制。方法将60只健康雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、VIP低剂量组和VIP高剂量组，每组15只。另取10只豚鼠，断颈处死，迅速分离脊髓，研磨匀浆，加入完全弗氏佐剂制备抗原，除正常对照组外均诱导建立EAE模型。自造模当日起，每隔一日VIP低、高剂量组分别腹腔注射VIP 4、16 nmol／kg，正常对照组及模型对照组同期分别腹腔注射0．8 mL生理盐水，连续5次。自造模当日起，记录各组精神、行动等一般情况，EAE潜伏期和进展期，于发病高峰期行神经病残疾评分（ NDS）。于发病高峰期处死大鼠，未发病大鼠饲养8周处死，取脑组织。采用ELISA法检测脑组织匀浆IL-17A表达，采用免疫组化SP法检测胶质纤维酸性蛋白（ GFAP）阳性细胞的平均光密度值（以此作为GFAP表达）。结果正常对照组均未发病，模型对照组及VIP低、高剂量组均出现不同程度食量下降、精神萎靡、后肢无力、尾部拖地，且模型对照组症状重，VIP高剂量组症状轻。模型对照组及VIP低、高剂量组EAE潜伏期逐渐延长，进展期逐渐缩短；组间两两比较P＜0．05或＜0．01。模型对照组、VIP低剂量组高峰期NDS均高于VIP高剂量组（P均＜0．01）。与正常对照组比较，模型对照组及VIP低、高剂量组脑组织IL-17A及GFAP表达均升高（P均＜0．05）。模型对照组及VIP低、高剂量组脑组织IL-17A及GFAP表达均依次降低，组间两两比较P均＜0．05。结论 VIP对EAE大鼠具有神经保护作用，并呈一定浓度依赖性；降低脑组织IL-17A表达、抑制星形胶质细胞活化可能是其作用机制之一。
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髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG抗原肽的制备及免疫原性观察
目的 制备髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗原肽,并观察其免疫原性.方法 采用改进的Fmoc固相合成法制备MOG35～55抗原肽;以合成的MOG35～55抗原肽加完全弗氏佐剂(CFA)免疫C57BL/6小鼠,观察小鼠发病情况,并对小鼠脊髓和脑组织进行病理学检查.结果成功制备了MOG35～55抗原肽,精肽产率13.58%,纯度95%;MOG35～55抗原肽免疫后15 d起,小鼠开始陆续出现自身免疫性脑脊髓炎(EAE)临床症状,至第21天8只小鼠均发病,光镜下观察EAE小鼠脊髓和脑组织可见典型的炎性细胞浸润.结论 采用改进的Fmoc固相合成法可制备具有良好免疫原性的MOG35~～55抗原肽,用以制备C57BL/6小鼠EAE模型,发病率高,模型稳定.
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脂肪间充质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的效果
目的：观察脂肪间充质干细胞（ ADMSC）移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）小鼠的疗效。方法：实验第0、7天采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白作为抗原与完全弗氏佐剂免疫小鼠，ADMSC组（n＝14）小鼠于免疫后第14、21、28天尾静脉注射ADMSC（5．5×106个／只），EAE组（n＝13）注射同等体积的生理盐水；对照组（n＝12）不免疫，不给予ADMSC。实验过程中对小鼠进行神经功能缺损评分；第33天，取脊髓行病理观察，进行炎性细胞浸润评分和脱髓鞘评分；ELISA法检测小鼠外周血TNF-α、IL-17和IL-4水平；流式细胞术测定小鼠脾脏中CD4＋Foxp3＋T细胞（ Treg）的比例。结果：与EAE组相比，ADMSC组小鼠神经功能缺损评分、脊髓组织中炎性细胞浸润和脱髓鞘评分降低（P＜0．05）；外周血IL-4水平升高，而TNF-α和IL-17水平降低（P＜0．05）；脾脏中Treg细胞比例明显升高（P＜0．05），接近对照组水平。结论：ADMSC移植可显著改善EAE小鼠的神经功能。
