首页 > 文献资料
-
家蚕醇提物对MIN6细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究不同浓度的家蚕醇提物(Silkworm alcohol Extract,SA)对胰岛MIN6细胞的增殖活性、细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度的SA(0、0.25、0.5、1 mg/mL)干预MIN6细胞12h,采用CCK-8法检测对正常MIN6细胞的增殖活性,不同浓度H2O2诱导MIN6细胞的存活率;流式细胞术结合PI荧光染色检测细胞凋亡.结果 与对照组(0mg/mL)比较,0.5 mg/mL和1mg/mL SA组MIN6细胞增殖活性升高(P＜0.05);440μmol/L H2O2诱导细胞损伤12h,细胞存活率为60％,为佳造模浓度;0.5 mg/mL和1 mg/mL SA组对H2O2诱导MIN6细胞存活率增高(P＜0.05);0.5 mg/mL和1 mg/mL SA组MIN6细胞凋亡率有下降趋势(P＜0.05).结论 不同浓度SA对正常MIN6细胞增殖活性升高、对H2O2损伤MIN6细胞存活率升高,细胞凋亡率下降.
-
小干扰质粒干扰肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响
目的 探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A (MafA)对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响. 方法 采用RT-PCR和Western blot分别测MafA mRNA 和蛋白的表达,筛选佳小干扰质粒(siRNA),分为转染对照组(Cy3组)、阴性对照组(Scramble组)、阳性对照组(siβ-actin组)及实验组(即siMafA-1、siMafA-2和siMafA-3组).按不同葡萄糖浓度分为5.6 mmol/L、10 mmol/L、25 mmol/L.根据不同葡萄糖浓度是否加入siRNA分为未加siRNA的对照组:A0组5.6 mmol/L、B0组10 mmol/L、C0组25 mmol/L;加入siRNA的实验组:A1组5.6 mmol/L、B1组10 mmol/L、C1组25 mmol/L.测MafA基因沉默后MIN6细胞增殖、胰岛素(Insulin)-1和Insulin-2 mRNA表达、MafA蛋白表达及上清液胰岛素浓度的变化. 结果 siMafA-2组干扰效果好.C1组MafA蛋白表达较C0组下降(P<0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度均降低(P<0.05).A1组与A0组比较,MafA蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05).不同糖浓度各亚组与对照组Insulin-1 mRNA表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05). 结论 siRNA-2组是理想的siRNA.MafA下调可抑制小鼠胰岛β细胞增殖.MafA下调可抑制小鼠Insulin2 mRNA表达和胰岛素分泌.
关键词： MIN6细胞 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A 胰岛素基因 -
荧光共振能量转移技术在检测环磷酸腺苷信号通路对于MIN6细胞胰岛素分泌机制中的作用
目的 探讨不同浓度的胰升血糖素(Gig)在无糖、低糖、高糖的环境下通过环磷酸腺苷(cAMP)信号通路对胰岛素分泌的直接调控作用及机制,基于荧光共振能量转移(FRET)的生物传感器技术可作为一种用来在活细胞上实时定量检测第二信使cAMP水平的方法.方法 体外培养MIN6细胞,在葡萄糖0、2.8、16.7 mmol/L下予Glg 0、100、500、1000 ng/L干预处理,ELISA检测不同处理下MIN6胞内cAMP量和胰岛素释放量;电转染法将质粒ICUE3转染进入MIN6细胞,用FRET技术检测细胞内cAMP水平.结果 ELISA与FRET技术检测的cAMP含量结果基本相同,印证了FRET检测cAMP的可行性;无糖、低糖及高糖环境下,cAMP含量及胰岛素的分泌量为1000 ng/L组高于500、100、0 ng/L组,500 ng/L组高于100 ng/L和0 ng/L组;在低糖及高糖环境下,100 ng/L组高于0 ng/L组(P＜o.05),且葡萄糖浓度越高趋势越明显.Pearson相关性分析结果显示,MIN6细胞内cAMP含量与胰岛素分泌量呈正相关(R2 =0.559,P＜0.01).结论 基于FRET的生物传感器技术可以作为一种用来在活细胞上实时定量检测第二信使cAMP水平的方法.Glg可能以浓度梯度的形式通过上调胰岛β细胞胞内cAMP浓度来促进Ins分泌,有一定的葡萄糖依赖性.
-
生长分化因子11对高糖诱导MIN6细胞损伤的保护作用及机制研究
目的 探讨生长分化因子11(GDF-11)对高糖诱导的小鼠胰岛素瘤细胞系MIN6细胞凋亡的影响及可能机制.方法 在体外不同葡萄糖浓度下培养MIN6细胞,分别加入重组GDF-11蛋白(rGDF-11)、转化生长因子β(TGF-β)受体Ⅰ抑制剂SB431542及磷脂酰肌醇?3?激酶(PI3K)抑制剂LY294002等干预因素.根据实验目的及干预因素不同将细胞随机分组为:正常对照组、正常对照组+GDF-11组、高糖组、高糖+GDF-11组、高糖+GDF-11+LY492002组、高糖+GDF-11+SB431542组.采用膜联蛋白V?异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞内B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶3(Cleaved-caspase3)等凋亡相关蛋白以及蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、叉头转录因子1(FoxO1)、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)、核糖体S6蛋白激酶1(S6k1)、磷酸化S6k1(p-S6k1)水平.免疫荧光染色法检测MIN6细胞磷酸化Smad2(p-Smad2)、磷酸化Smad3(p-Smad3)表达水平.多组间比较选用单因素方差分析,组间多重比较用小显著差异t检验.结果 高糖可明显降低Bcl-2/Bax比例,升高凋亡关键酶Cleaved-caspase3表达,细胞凋亡率增加(分别为0.39±0.03比3.82±0.26、0.83±0.04比0.17±0.02、26.1%±3.0%比7.9%±0.8%,t=23.12、-27.60、-10.11,均P<0.01).而重组GDF-11蛋白干预可上调Bcl-2/Bax比例,减少Cleaved-caspase3表达,抑制细胞凋亡(t=-44.110、19.530、6.535,P<0.01).SB431542或LY294002与MIN6细胞共培养后rGDF-11的抗凋亡作用均明显减弱(均P<0.05).高糖显著降低p-Smad2水平(荧光强度表示),升高p-Smad3水平(t=4.830、5.760,均P<0.01).rGDF-11预处理可恢复细胞内p-Smad2水平,而SB431542明显抑制rGDF-11诱导的MIN6细胞p-Smad2蛋白表达的增加(t=5.55、3.04,均P<0.05).高糖可明显减少p-Akt、p-S6k1、p-FoxO1水平,而rGDF-11预处理后p-Akt、p-FoxO1水平明显高于HG组(均P<0.01).加入LY492002后,显著抑制rGDF-11诱导的细胞内p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的增加(均P<0.05).结论 GDF-11可能通过激活TGF-β/Smad2及PI3K-Akt-FoxO1信号通路减少高糖诱导的β细胞凋亡.
-
罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2表达的影响
目的 研究罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2(CCl2)表达的影响与潜在机制.方法 细胞分为5组:正常对照组,正常MIN6细胞不做任何处理;模型组,用LPS 10 mg·L-1刺激MIN6细胞12 h;实验组,用罗格列酮20μmol·L-预处理12 h后,加LPS 10mg· L-1刺激MIN6细胞12 h;阴性对照组(siRNA-NC),MIN6细胞预先转染siRNA-NC,再用罗格列酮20 μmol·L-1预处理12 h后,加LPS10mg· L-1刺激细胞12 h;PPAR-γsiRNA组,MIN6细胞预先转染PPAR-γsiRNA,再用罗格列酮20 μmol·L-1预处理12 h后,加LPS10 mg·L-1刺激细胞12 h.以逆转录PCR法(RT-PCR)检测CCL2、胰岛素mRNA表达,以免疫印迹法检测CCL2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化κ基因结合核因子(p-NF-κB)蛋白表达.结果 经LPS刺激MIN6细胞后,正常对照组、模型组与实验组的CCL2 mRNA表达量分别是2.27±0.15,8.83±0.55,4.00±0.40,胰岛素mRNA表达量分别是2.47 ±0.12,0.63±0.03,1.63±0.24,正常对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.001);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.001).与siRNA-NC组相比较,PPAR-γsiRNA组PPAR-γ蛋白水平下降,而CCL2、p-ERK、p-NF-κB的蛋白水平增加.说明敲低PPAR-γ可促进p-ERK、p-NF-κB活性,增加MIN6细胞分泌CCL2.结论 罗格列酮可抑制LPS诱导胰岛MIN6细胞趋化因子CCL2表达,其可能与PPAR-γ信号通路有关.
关键词： 罗格列酮 MIN6细胞 趋化因子配体2 过氧化物酶体增殖物激活受体γ -
枸杞多糖对MIN6细胞增殖活性和凋亡的影响
目的 研究不同浓度枸杞多糖对小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞增殖活性和凋亡的影响.方法 培养MIN6细胞,分为对照组、不同浓度枸杞多糖干预组,分别给予0,100,200,400 mg/L枸杞多糖干预24 h.噻唑蓝(MTT)法检测MIN6细胞增殖活性,流式细胞术检测MIN6细胞凋亡率,Western印迹分析磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达.结果 与对照组相比,100、200 mg/L枸杞多糖干预组MIN6细胞增殖显著增加(P均＜0.01),MIN6细胞凋亡显著受抑制(P均＜0.01),而400 mg/L枸杞多糖干预组细胞增殖活性降低(P＜0.05),MIN6细胞凋亡增加(P＜0.01).Western印迹显示,与对照组相比,100,200,400 mg/L枸杞多糖干预组Bcl-2表达(F=65.26,P＜0.01)及磷酸化ERK水平(F=14.85,P＜0.01)均增加,而400 mg/L枸杞多糖干预组Bcl-2与磷酸化ERK表达下降(P均＜0.05),200 mg/L枸杞多糖干预组与400 mg/L枸杞多糖干预组相比,Bcl-2与磷酸化ERK水平差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 低浓度枸杞多糖可促进MIN6细胞增殖,减少MIN6细胞凋亡,而高浓度枸杞多糖作用相反,其机制可能与ERK信号通路有关.
-
荞麦花叶发酵提取物对MIN6细胞增值凋亡的影响
目的 观察荞麦花叶发酵提取物(Extract of fermented buckwheat flower and leaf,EFBFL)对MIN6细胞促增殖,抗凋亡作用,为荞麦花叶进一步开发研究提供实验依据.方法 以不同浓度EFBFL干预胰岛MIN6细胞,以高糖(含葡萄糖33.3 mmol/L)刺激作为诱导凋亡或抑制增殖因素.用cck-8试剂盒检测EFBFL对MIN6细胞增殖活性的影响;用流式细胞仪(Annexin V-FITC和PI双染法)检测EFBFL对胰岛细胞凋亡的影响.结果 EFBFL在16、32、64 μg/ml浓度下对高糖和非高糖刺激的胰岛MIN6细胞增殖活性均有促进.与高糖对照组比较,32和64 μg/ml的EFBFL对高糖诱导的胰岛细胞早期凋亡和晚期凋亡有明显抑制作用(P＜0.01),有浓度效应关系.结论 EFBFL具有良好的促进MIN6细胞增殖和抑制高糖诱导的胰岛MIN6细胞的凋亡作用.
-
应用全反射荧光显微镜对MIN6细胞分泌过程的动态研究
目的:通过追踪胰腺β细胞株MIN6细胞内单个分泌囊泡的运动轨迹研究胰岛素的动态分泌过程和影响因素.方法:应用吖啶橙转染MIN6细胞,通过全反射荧光显微镜观察细胞膜和靠近胞膜80 nm区域内的单个囊泡运动的动态过程.结果:在高浓度氯化钾刺激下,附着在细胞膜的分泌囊泡发生融合和释放,此分泌过程大约在1 min达到高峰,并可持续到4～5 min.在高浓度葡萄糖激发下,前1～2 min主要由原来附着在细胞膜的分泌囊泡融合和释放,5～6 min以后由新融合的囊泡分泌.结论:在高浓度氯化钾刺激下,主要引发第一相分泌,在高浓度葡萄糖的刺激下,可以表现为双相分泌.
-
铁皮石斛对小鼠和胰岛瘤细胞胰岛素抵抗的改善作用
目的:探讨铁皮石斛(DC)对MKR小鼠和MIN6细胞中胰岛素抵抗的作用,并阐明其作用机制.方法:9周龄MKR小鼠随机分为4组,分别灌胃给予10、20、40 g·kg-1·d-1 DC和生理盐水(空白对照组),连续给药6周,每2周检测小鼠的血糖,以确定DC降糖作用佳浓度.8周龄MKR雄鼠随机分为对照组、DC组、二甲双胍(Met)组和联合用药(Met+DC)组,灌胃给予生理盐水和相应药物8周,同时检测小鼠血糖,给药结束后对小鼠进行葡萄糖耐量实验(GTT)和胰岛素耐量实验(ITT),采用qPCR法检测小鼠肝脏和皮下脂肪组织中糖脂代谢相关基因表达水平.体外培养MIN6细胞,分为对照组、高浓度棕榈酸(H-PA)组、高浓度葡萄糖(H-Glu)组、H-PA+H-Glu组、H-PA+DC组、H-Glu+DC组和H-Glu+H-PA+DC组,进行葡萄糖刺激下胰岛素分泌能力实验(GSIS),采用MTT法和ELISA法检测各组细胞增殖活性和胰岛素分泌水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中PI3K/AKT通路蛋白表达水平.结果:在小鼠体内,DC降糖作用佳浓度为20 g·kg-1·d-1.与对照组比较,DC组、Met组和联合用药组小鼠血糖水平降低(P<0.05);与DC组和Met组比较,联合用药组小鼠血糖水平进一步降低(P<0.05).GTT和ITT实验,与DC组和Met组比较,联合用药组小鼠糖耐量和胰岛素敏感性明显提高,胰岛素抵抗情况明显改善.与对照组比较,联合用药组小鼠肝组织中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Pepck)mRNA表达水平明显降低(P<0.05),葡萄糖激酶(Gck)mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Met组和联合用药组小鼠皮下脂肪组织中氧化物酶增殖物激活受体γ(Ppar-γ)mRNA表达水平明显升高(P<0.05).在MIN6细胞中,经筛选,选择160μmol·L-1 H-PA和30 mmol·L-1 H-Glu诱导MIN6细胞胰岛素抵抗,以1.44 g·L-1 DC处理各组细胞.GSIS,分别与H-PA组、H-Glu组和H-PA+H-Glu组比较,加入DC后,H-PA+DC组、H-Glu+DC组和H-PA+H-Glu+DC组MIN6细胞胰岛素分泌水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率降低,磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS-1)、磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平明显升高(P<0.05);H-PA+H-Glu+DC组MIN6细胞磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:DC可以改善MKR小鼠的胰岛素抵抗,与Met联合用药后效果更加明显;在体外,DC可以通过PI3K/AKT信号通路改善H-PA和H-Glu诱导的MIN6细胞的胰岛素抵抗,并可增加胰岛素分泌水平,降低细胞凋亡率.
-
胰岛素对β细胞FoxO1胞质-胞核穿梭定位的影响
目的:通过激光扫描共聚焦显微镜对小鼠胰岛素瘤min6细胞免疫化学染色后观察外源性高胰岛素对FoxO1胞质-胞核穿梭定位的影响.方法:小鼠胰岛素瘤min6细胞用DMEM(low glucose)培养基(含有15％FBS、100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素)于25 mL培养瓶放置在37℃、5％ CO2浓度的细胞孵箱中培养.细胞爬片后给予100 μIU/mL浓度胰岛素分别刺激12、24和48小时.细胞免疫化学染色后激光扫描共聚焦显微镜观察FoxO1的表达位置变化,用Image pro plus软件对FoxO1荧光强度进行半定量分析.结果:与低糖孵育的对照组相比,胰岛素孵育12h、24h和48 h时胞质内FoxO1荧光强度逐渐增强,而细胞核FoxO1荧光强度减弱(P＜0.05).结论:高浓度胰岛素孵育min6细胞使FoxO1出细胞核转位至细胞质,并且具有时间依赖性,提示FoxO1是高胰岛素血症对β细胞功能影响的机制之一.
-
RIP140在H2O2诱导MIN6细胞损伤中的作用机制研究
MIN6细胞给予400 μmol/L H2O2处理分为正常对照组、正常加H2 O2组、Scramble siRNA(Small interfering RNA)组和RIP140 siRNA组,400 μmol/L H2O2能增加MIN6细胞的凋亡率(27.89％±1.91％对3.74％±0.55％,P＜0.01)和丙二醛含量[(35.17±6.26对20.07±1.86) nmol/mg,P＜0.05],明显减少MIN6细胞活力(24和48 h,均P＜0.01)、总超氧化合物歧化酶水平[SOD,(4.79±0.85对3.09±0.60) U/mg,P＜0.05].下调受体相互作用蛋白140(RIP140)表达能减少H2O2诱导的MIN6细胞凋亡率(11.45％ ±2.27％对30.39％±5.32％,P＜0.01)和丙二醛含量[(22.32±1.94对33.42±2.51)nmol/mg,P＜0.01],增加总SOD水平[(5.32±0.40对3.09 ±0.15)nmol/mg,P＜0.01)].
关键词： 受体相互作用蛋白140 过氧化氢 MIN6细胞 增殖 细胞凋亡 -
内脂素激活PI3K-Akt和MAPK-ERK1/2信号通路抑制MIN6细胞凋亡
探讨内脂素对胰岛β细胞株MIN6细胞信号通路和棕榈酸诱导细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制.人重组内脂素呈剂量和时间依赖性促进MIN6细胞细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化,抑制棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡(P<0.05或P<0.01).激活磷脂酰肌醇3激酶(PBK)-Akt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-ERK1/2信号通路是内脂素抑制MIN6细胞凋亡的分子机制之一.
关键词： 内脂素 蛋白激酶B 细胞外信号调节激酶1/2 MIN6细胞 细胞凋亡 -
胰高血糖素样肽-1抑制软脂酸诱导的MIN6细胞凋亡
目的 探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对软脂酸(PA)诱导的MIN6细胞凋亡及分泌胰岛素功能的影响.方法 传代培养处于对数生长期的胰岛β细胞MIN6细胞株分为三组.PA组:加入0.5 mmol/L PA孵育36 h;GLP-1+PA组:加入10 nmol/LGLP-1,12 h后再加入0.5 mmol/L PA继续孵育36 h,期间每12 h加1次相同浓度的GLP-1;对照组:未加GLP-1或PA,其他培养条件相同.MTT比色法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率;放射免疫分析法测定MIN6细胞胰岛素分泌量.结果 PA组MIN6细胞凋亡率为(39.41±10.16)%,细胞活力较对照组减少25.8%(P＜0.05);GLP-1+PA组MIN6细胞凋亡率为(32.80±8.06)%,细胞活力较PA组增强13.88%(P＜0.05),其高糖和低糖状态下胰岛素分泌均明显高于PA组(P＜0.01).结论 GLP-1可以抑制PA诱导的MIN6细胞凋亡,同时改善细胞胰岛素分泌功能.
-
马尾松花粉酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca2+]i的影响
探讨马尾松花粉硫酸酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca2+]i的作用.选取60％乙醇沉淀的马尾松花粉多糖(PPM60),氯磺酸-吡啶法得到硫酸酯化物(SPPM60)；检测PPM60及SPPM60刺激后MIN6细胞胰岛素分泌量和[Ca2+]i的变化.观察钙离子抑制剂维拉帕米和低分子肝素的影响.PPM60对MIN6细胞胰岛素分泌几乎没有影响,SPPM60能显著促进胰岛素的分泌和[Ca2+]i升高(P＜0.05).维拉帕米和低分子肝素钠均可以降低SPPM60引起的胰岛素分泌增加,但差异不显著.同样两者均可显著性降低SPPM60引起的[Ca2+]i的升高(P＜0.05).维拉帕米可以明显抑制3.6 mg/mL葡萄糖的促胰岛素分泌(P＜0.05)和升高[Ca2+]i的作用(P＜0.01).SPPM60可以单独促进胰岛素的分泌,其作用机制与葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)有一定相似性,但同时存在其他的信号通路.
-
胰高血糖素对胰岛 β细胞胰岛素分泌的调节作用及机制
目的 观察胰高血糖素对胰岛 β细胞(MIN6)胰岛素(Ins)分泌的调节作用,并探讨其作用机制.方法 将培养好的MIN6细胞均转染对环磷酸腺苷(cAMP)敏感的荧光生物传感器DNA质粒ICUE3.转染48 h将细胞随机分为三部分,分别在无糖、低糖(葡萄糖2.8 mmol/L)、高糖(葡萄糖16.7 mmol/L)环境下培养400~600 s,之后各环境下的细胞随机分为四组:0、100、500、1000 ng/L组,分别用不同浓度(0、100、500、1000 ng/L)胰高血糖素处理350~600 s.采用荧光共振能量转移技术检测MIN6细胞中cAMP水平,ELISA法检测细胞Ins分泌量.结果 在无糖环境下,MIN6细胞内cAMP水平及Ins分泌量1000 ng/L组>500 ng/L组>100 ng/L组,各组两两比较差异有统计学意义(P均<0.05).在低糖、高糖环境下,MIN6细胞内cAMP水平及Ins分泌量1000 ng/L组>500 ng/L组>100 ng/L组>0 ng/L组,各组两两比较差异有统计学意义(P均<0.05);且高糖环境下以上差异更明显.结论 胰高血糖素可能以浓度梯度的形式通过升高胰岛 β细胞内cAMP水平来促进Ins分泌,且该作用有一定的葡萄糖依赖性.
-
Wnt3a对小鼠beta细胞株增殖的影响
目的 分析wnt3a蛋白对小鼠胰腺beta细胞株增殖的影响. 方法 培养MIN6细胞株,并用不同浓度的wnt3a蛋白或者相同浓度wnt3a蛋白在不同时间点刺激M1N6细胞,用Western blot的方法检测MIN6细胞内的信号分子.改变.培养MIN6细胞株,并用wnt3a蛋白刺激,分别在第0、1、2、3、4 d分裂并数细胞个数,比较有wnt3a刺激组与无wnt3a刺激组细胞个数有无区别. 结果不同浓度wnt3a刺激,对于MIN6细胞内beta-catenin以及Pitx2的表达有影响,当wnt3a浓度为1:8时,beta-catenin以及Pitx2的表达高.用1:8的wnt3a蛋白浓度刺激MIN6细胞,分别设置0 min、10 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h.结果 显示6 h时,beta-catenin表达量高.比较控制组与wnt3a刺激组细胞增殖的区别,wnt3a蛋白刺激组细胞增殖程度明显高于控制组. 结论 wnt3a可以促进胰腺beta细胞的增殖,表明wnt信号通路对于胰腺beta细胞有重要的调控作用.
-
高盐抑制Min6细胞胰岛素分泌功能及其机制研究
目的 研究高盐环境能否影响胰岛Min6细胞的分泌功能, 并探讨其可能机制.方法 以50mmol·L-1浓度高盐刺激Min6细胞, 用酶联免疫吸附测定 (ELISA) 法测定Min6细胞胰岛素分泌功能, 细胞活性检测试剂盒 (cck8) 检测Min6细胞增殖活性, Annexin V FITC/PI流式细胞术检测Min6细胞凋亡百分比, Western blot检测Min6细胞内B细胞淋巴瘤-2 (bcl-2) 蛋白的表达.结果 与同渗透压甘露醇 (100 mmol·L-1) 相比, 高盐环境 (50 mmol·L-1) 能抑制Min6细胞胰岛素的分泌, 降低Min6细胞增殖活性, 诱导Min6细胞凋亡, 抑制细胞内bcl-2蛋白的表达.结论 高盐环境减少胰岛Min6细胞胰岛素分泌, 作用机制可能与细胞增殖活性降低、凋亡增加有关.
-
Ang(1-7)减轻棕榈酸诱导的Min6细胞损伤
目的:观察血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对棕榈酸(PA)诱导小鼠胰岛β细胞株Min6功能受损的影响,并初步探讨Ang(1-7)对Min6细胞的保护作用与自噬的关系.方法:将对数生长期的Min6细胞随机分为对照(control)组、PA组、PA+Ang(1-7)组、PA+Ang(1-7)+A779组、PA+Ang(1-7)+rapamycin组、Ang(1-7)组和A779组.干预结束后用葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测Min6细胞的分泌功能,流式细胞术检测凋亡率,活性氧簇(ROS)试剂盒检测细胞内ROS的水平,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-I和LC3-II的表达.结果:与control组相比,PA组Min6细胞分泌功能明显受损,葡萄糖刺激后胰岛素分泌显著降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞内ROS水平和LC3-II/LC3-I比值明显增高(P<0.05);与PA组相比,PA+Ang(1-7)组细胞葡萄糖刺激后胰岛素分泌增加(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),细胞内ROS水平和LC3-II/LC3-I比值均明显下降(P<0.05).Ang(1-7)的这一保护作用可被A779和rapamycin部分阻断.结论:Ang(1-7)减轻PA诱导的Min6细胞损伤,其细胞保护机制可能与抑制细胞自噬活性有关.
关键词： 血管紧张素(1-7) MIN6细胞 自噬 活性氧簇 棕榈酸 -
胰高血糖素样肽-1对胰岛β细胞的作用
目的:探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对第三丁基过氧化氢(tBHP)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6凋亡作用的机制.方法:体外培养胰岛β细胞株MIN6,分为对照组、tBHP(25μmol/L)组、GLP-1(10nmol/L)组和GLP-I+tBHP组.Annexin V-F ITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率:Griess法检测各实验组细胞内NO水平.结果:25μmol/L tBHP作用1h可诱导MIN6细胞凋亡,并使细胞内NO含量明显增加.预先经过10nmol/L GLP-1作用24h后,tBHP诱导的MIN6细胞凋亡明显减少,同时细胞内NO含量亦显著降低.结论:GLP-1可以抑制tBHP诱导的胰岛β细胞株MIN6凋亡,其机制可能与GLP-1减少tBHP诱导的NO合成有关.
-
灵芝提取物及其含药血清对胰岛β细胞的影响
目的 研究灵芝提取物灵芝蛋白多糖(FYGL)对胰岛β细胞是否有保护作用.方法 (1)配置不同浓度的FYGL(0.01 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL),培养min6细胞株,接种于96孔版,细胞贴壁后加入上述不同剂量FYGL干预72 h,XTT法检测各组细胞活性;(2)中药血清药理学方法制备大鼠含药血清.15只健康SPF级Wistar雄性大鼠,随机分成五组,分别为对照组(磷酸盐缓冲液)、西格列汀2 mg/kg组、FYGL低剂量组(75 mg/kg)、FYGL中剂量组(250 mg/kg)、FYGL高剂量组(450 mg/kg),每组3只,连续10 d灌胃给药后处死取血清,同组3只血清合并备后续实验用;同上方法培养min6细胞株,加入含有10%上述含药血清的DMEM培养液干预72 h,XTT法检测各组细胞活性;(3)同上方法培养min6细胞株,加入不同浓度(50 μmol/L、100 μmol/L、250 μmol/L、500 μmol/L)棕榈酸(PA)作用72 h,XTT法检测各组细胞活性;(4)同上方法培养min6细胞株,加入400 μmol/L棕榈酸(PA)及10%上述含药血清的DMEM培养液共同干预72 h,XTT法检测各组细胞活性.结果 (1)与对照组[(100±5.62)%]相比,FYGL呈剂量依赖性促进min6细胞增殖[(131.14±12.53)%、(174.48±17.09)%、(259.28±9.51%)%],差异均有显著统计学意义(P<0.01);(2)与对照组[(100±10.14)%]相比,西格列汀及FYGL含药血清呈剂量依赖性促进min6细胞增殖[(119.27± 5.27)%、(112.5±24.15)%、(125.65±1.52)%、(133.98±9.95)%],西格列汀及中高剂量FYGL组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);(3)与对照组[(100±9.26)%]相比,250 μmol/L及500 μmol/L PA可诱导min6细胞凋亡[(75.64±7.74)%、(53.63±9.61)%],差异均有显著统计学意义(P<0.01);(4)与对照组相比,400 μmol/L PA可明显促进min6细胞凋亡[(100±5.76)% vs(56.89±1.86)%],差异有显著统计学意义(P<0.01);与PBS血清组相比,西格列汀含药血清组及FYGL含药血清组可抑制PA导致的min6细胞凋亡,且以FYGL 250 mg/kg作用显著[(56.89±1.86%)vs(88.53± 24.84)%],差异均有统计学意义(P<0.01).结论 灵芝提取物FYGL促进min6细胞增殖且能抑制PA诱导min6细胞凋亡作用,可能作为一种具有保护胰岛β细胞作用的潜在降糖药物.
