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TIMP-1水平在IgA肾病患者血清中的变化及意义
目的 观察不同病理类型的IgA肾病患者和由原发性肾小球肾炎发展至肾衰竭的患者血清中金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloprotei-nase-1,TIMP-1)水平的变化.方法 将经肾活检确诊的原发性IgA肾病患者分组,并设立慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)患者组和正常对照(normal control,NC)组,观察各组间TIMP-1水平的表达情况,数据用(x±s)表示,用方差分析进行统计学处理,P<0.05为有统计学意义.结果 肾衰竭组、IgA肾病重度病理改变组及中度病理改变组血清中TIMP-1水平较正常对照组明显增高(P<0.05),且肾衰竭组和IgA肾病重度病理改变组血清中TIMP-1水平又较中度病理改变组显著增高(P均＜0.01),而IgA肾病轻度病理改变组患者血清中TIMP-1水平与正常对照组相比无统计学意义.结论 TIMP-1在肾衰竭组、IgA肾病重度病理改变组及中度病理改变组血清中水平明显增高,提示TIMP-1与细胞外基质((extracelluar matrix,ECM)的增加以及肾脏的纤维化密切相关,它可能通过抑制肾小球细胞外基质的降解过程而导致ECM积聚,从而导致基质纤维化和肾小球硬化.
关键词： IgA肾病 金属蛋白酶组织抑制物-1 ELISA双抗体夹心法 -
紫癜性肾炎患者血清金属蛋白酶组织抑制物-1水平变化和临床意义
目的：观察不同分期过敏性紫癜性肾炎（Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN）患者和健康人血清中金属蛋白酶组织抑制物-1（tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1）水平的变化，初步探讨TIMP-1在HSPN不同阶段中的作用及其与肾损害程度的关系，通过相关药物阻断TIMP-1的表达或抑制其活性，可能为预防、治疗肾脏纤维化提供一个新方法，以期达到理想治疗效果。方法：将过敏性紫癜性肾炎患者42例（试验组）按病理类型分组，并设立健康对照组。抽取两组的外周静脉血5 mL，分离血清，应用ELISA双抗体夹心法分别对其进行检测，观察各组TIMP-1水平的表达情况。结果：试验组Ⅱ~Ⅵ级组血清中TIMP-1水平较健康对照组显著增高（P<0.05），Ⅲ~Ⅵ级组血清中TIMP-1水平较Ⅱ级组显著增高（P<0.01），Ⅰ级组血清中TIMP-1水平与健康对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：通过检测TIMP-1水平，再结合其他化验指标和临床表现，有助于对该疾病的治疗效果或者预后给予判断，对减少肾功能衰竭发生率具有指导意义。
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生殖支原体细胞培养法分离及ELISA法的建立
[目的]用细胞培养法分离培养临床标本中的生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg),探讨天津地区性传播疾病(STD)门诊患者中是否存在Mg感染.并建立双抗体夹心ELISA法检测临床标本中的Mg抗原.[方法]采用SID门诊患者生殖泌尿道分泌物,接种于Vero细胞,进行分离培养,并用SP-4培养基传代,对符合Mg生物学特性的阳性培养物用套式PCR、电镜观察、代谢抑制试验等方法进行鉴定.利用制备的抗Mg多克隆抗体,标记酶结合物,建立用于检测Mg抗原的双抗体夹心ELISA法.[结果]在214例STD患者中分离培养出11株Mg,分离率为2.73%.双抗体夹心ELISA法可测到5 μg,/ml蛋白浓度,除与Mg有交叉反应外与其他支原体和细菌无交叉反应,100例STD患者分泌物ELISA检测阳性率为12%.[结论]在国内首次应用细胞培养法从临床标本中分离培养到Mg菌株,从病原学证实天津地区STD患者中存在Mg感染.双抗体夹心ELISA法具有一定的灵敏度和特异性、快速、简便,适用于检测泌尿生殖道标本中的Mg抗原.
关键词： 生殖支原体 Vero细胞 分离 培养 ELISA双抗体夹心法 -
原发性肾病综合征患者血清中金属蛋白酶组织抑制物-1水平的变化及意义
目的:观察不同病理类型的原发性肾病综合征患者和由原发性肾病综合征而发展至肾衰竭的患者血清中金属蛋白酶组织抑制物-1水平的变化(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1).方法:将原发性肾病综合征患者40例按病理类型的分组,并设立正常对照(NC)组和原发性肾病综合征肾衰竭(CRF)组.抽取入选患者和正常健康者外周静脉血5 ml,分离血清,应用ELISA双抗体夹心法分别对其进行检测,观察各组间TIMP-1水平的表达情况.结果:肾衰竭组、膜增生性肾炎组以及系膜增生性肾小球肾炎组血清中TIMP-1水平较正常对照组显著增高(P＜0.01),且肾衰竭组和膜增生性肾炎组血清中TIMP-1水平又较系膜增生性肾炎组显著增高(P＜0.01),而微小病变性肾小球肾炎组患者血清中TIMP-1水平与正常对照组相比无统计学意义.结论:TIMP-1在系膜增生性肾炎、膜增生性肾炎及肾衰竭患者血清中水平显著增高.提示在病理过程中,随着系膜细胞和系膜基质的增加,肾脏固有细胞分泌MMP-9和TIMP-1增加,但两者的分泌水平失衡,从而使肾小球基底膜Ⅳ型胶原降解减少,肾小球基底膜网络状结构破坏,导致肾小球基底膜重塑.
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ITP患者三项PAIg测定的临床意义
目前,血小板相关抗体(PAlg)的定量检测已广泛应用于原发性血小板减少性紫癜(ITP)的诊断和疗效观察<'[1]>.2009-2010年我院应用ELISA双抗体夹心法对24例ITP患者和15例继发性血小板减少性紫癫(STP)患者进行了PAIg定量检测和分析,以探讨PAIg检测的临床意义.现报告如下.
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定量检测人超敏C-反应蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立及初步临床应用
目的:建立定量检测人超敏C-反应蛋白(CRP)双抗体夹心ELISA方法.方法:采用ProteinA亲和层析法纯化本室制备的抗CRP单克隆抗体(mAbs),并行SDS-PAGE和Western blotting对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗CRP mAbs进行标记HRP后行抗体配对实验:通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的适工作浓度;以纯化的CRP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法.初步对人血浆中的超敏CRP水平进行检测.结果:佳配对组合为抗CRP mAb 1C10和HRP标记的抗CRP mAb 2C11,适工作浓度分别为10 μg/mL和1:2000,该方法的批内、批间变异系数分别为3.1%～9.7%和3.6%～13.6%,灵敏度达8.3 ng/mL,回收率为90%～109%.用EusA法测定左右冠无明显狭窄者68例,狭窄小于50%者59例和狭窄大于50%患者67例的血浆hs-CRP水平,冠脉狭窄小于50%组(3.7±1.2)mg/L与冠脉无狭窄组(1.8±0.7)mg/L比较明显升高(P<0.05);狭窄大于50%组(8.9±3.3)mg/L与狭窄小于50%组比较明显升高(P<0.05).结论:建立了一种可用于检测人超敏CRP的双抗体夹心ELISA方法.
关键词： 定量检测 超敏C-反应蛋白 ELISA双抗体夹心法 -
重组人源细胞珠蛋白单抗制备及检测方法建立
目的 制备重组人源细胞珠蛋白(recombinant human Cytoglobin,rhCygb)单克隆抗体,并建立检测该蛋白双抗体夹心ELISA法,为下一步研究rhCygb药代动力学做准备.方法 用纯化的rhCygb免疫BALB/c小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法获得抗rhCygb的单克隆抗体杂交瘤细胞,间接ELISA法筛选制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法.结果 筛选获取了稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过抗原表位相加法实验获得5株表位不同的细胞株,Westem-blotting验证能与rhCygb特异性结合,间接ELISA法验证其不与本实验室制备的其它PET28a-BL21蛋白及BL21裂解液发生交叉反应.本方法 灵敏度为1.25ng/ml,在浓度为10～1250 ng/ml时,线性关系良好,相关性达0.9931,实验内和实验间平均变异系数分别为6.2%和10.92%.结论 成功建立了灵敏度好、特异性高的双抗体夹心法,为下一步研究rhCygb药代动力学奠定了基础.
关键词： 重组人源细胞珠蛋白 单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法 定量检测方法 -
检测瞬时受体电位通道6的ELISA双抗体夹心法的建立
目的 建立ELISA双抗夹心法以用于TRPC6蛋白的测定.方法 采用mAb相加法和配对实验,选择佳配对组合;并通过cELISA法测定mAb阻断率,以选亲和力较高的mAb进行HRP标记,终建立ELISA双抗体夹心法以用于大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白的测定.结果 mAb-A2与mAb-F11的AI＞50％,配对较佳;mAb-F 11亲和力较强,IC50为0.6 μg/ml;HRP标记mAb-F11的低工作浓度为1∶1 600;建立ELISA双抗夹心法可检测到大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白分别为(1.42±0.06) μg/ml和(0.88±0.04)μg/ml.检测线性范围0.625～10μg/ml,R2=0.992,组间变异系数小于10％.结论 所建立的ELISA双抗夹心法灵敏高,特异性强,重复性好,可用于脑组织中TRPC6蛋白的测定.
关键词： TRPC6 MAB ELISA双抗体夹心法 -
D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立
目的:建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法.方法:用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性(回收率)、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较.结果:包被抗体和捕获抗体的佳包被效价分别为1:4 000和1:5 000;检测的线性范围为(28～1180)μg/L,检测限为4.6μg/L.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%～105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性.结论:该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.
关键词： D2蛋白酶 ELISA双抗体夹心法 定量检测 -
抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用
目的 制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白(MYO)单克隆抗体(mAb),建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO.方法 用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO mAb的细胞株;制备腹水型mAb,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较.结果 共筛选出9株能稳定分泌mAb的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到(1.0～2.6) ×106(A.约为1.0时的抗体稀释倍数).抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体(2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7),其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为(25 ～ 1000) ng/mL,优于进口试剂盒的线性范围(25 ～ 500) ng/mL;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95％(19/20),阴性检出率为100％ (40/40).结论 获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO mAb,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础.
关键词： 人肌红蛋白 细胞融合 单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法
