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竹根七中具有血管生成抑制作用有效成分的筛选
目的 研究竹根七中对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)生长有抑制作用的有效成分.方法 用溶剂提取法将竹根七分为不同药用部位,以抗血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体为对照,用人脐静脉内皮细胞膜色谱模型筛选,并对筛选结果用MTT实验进行分析,以初步确定其中的有效成分.结果 竹根七的分离成分(ZGQ-C)在其浓度分别为0.625、1.25、2.50、5.00、10.0 μg/mL时,对ECV304的增殖抑制率分别为40.51%、51.11%、63.54%、74.32%、81.26%.半数抑制率在1.00～1.25 μg/mL范围内;同时在显微镜下观察到细胞的形态有明显的改变.结论 ZGQ-C是对ECV304有一定抑制作用的有效成分;人脐静脉内皮细胞膜色谱模型的筛选结果与MTT实验结果之间有较好的相关性.
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4种川芎化学成分与心肌细胞膜受体作用的研究
目的:研究川芎化学成分与心肌细胞膜受体的作用.方法:通过4 种川芎化学成分(川芎嗪、香兰素、大黄酚和阿魏酸)在心肌细胞膜固定相色谱柱上的保留特性,研究其与心肌细胞膜受体的作用;进一步将这些保留特性与心肌细胞膜上已知受体拮抗剂和激动剂的色谱保留特性比较以研究作用的受体类型.结果:川芎嗪、香兰素、大黄酚在心肌细胞膜固定相色谱柱上有保留特性,阿魏酸无保留;川芎嗪的保留特性与α受体拮抗剂和α受体激动剂相近,香兰素的保留特性与β1受体激动剂相近.结论:川芎嗪、香兰素、大黄酚均可作用于心肌细胞膜受体,阿魏酸不与心肌细胞膜上的受体作用;川芎嗪有可能作用于α受体,香兰素有可能作用于β1受体.
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细胞膜色谱法筛选川芎-白芷中5-HT受体激动剂的研究
偏头痛是临床的常见病和多发病,研究表明,5-羟色胺(5-HT)受体在偏头痛的发病中起重要作用.实验通过大鼠纹状体组织制备得到色谱固定相,并利用细胞膜色谱与液相色谱的离线联用来特异性地识别川芎-白芷药对中可与固定相上受体相互作用的配体,发现了欧前胡素是其中潜在的活性成分.以不同浓度(2.42×10-8～4.84×10-7 mol·L-1)的5-HT1D受体激动剂舒马普坦为模型药物,记录样品在模型中的容量因子,测得欧前胡素与5-HT1D受体作用的平衡解离常数为(4.59±0.33)×10-6 mol·L-1,并采用硝酸甘油致大鼠偏头痛模型验证其药理活性.该研究为体外快速有效地研究药物与受体之间的相互作用提供了一种新方法.
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白川降压胶囊HPLC指纹图谱定性与定量分析方法研究
白川降压胶囊是在经典中药方剂"都梁丸"[1,2]的基础上,应用细胞膜色谱筛选技术[3-5]结合现代药理学实验研究,由白芷和川芎有效提取物组成的现代复方中药,用于治疗高血压病.本研究建立了白川降压胶囊的RP-HPLC指纹图谱定性分析方法,并结合有效成分[6]定量分析方法,通过对10个不同批次的白川降压胶囊进行分析检测,表明本方法有较好的准确性和重复性,可以较全面地控制本品的质量.
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亲和色谱应用于天然活性成分筛选的研究进展
亲和色谱法(affinity chromatography)是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法.利用化合物和固定相表面之间的某种特异性亲和力,将目标化合物从大量无亲和活性的化合物中分离出来.该方法可同时进行色谱分离和活性筛选,作为一种高通量筛选方法广泛应用于各种活性药物的筛选.该文主要针对亲和色谱的发展历史、筛选技术类型及其在天然活性成分筛选中的应用进行了综述.并就其应用前景进行讨论,以期更好地发挥亲和色谱在药物筛选中的应用.
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细胞膜色谱技术在中药质量评价中的应用与思考
细胞膜色谱法作为一种生物色谱技术,将色谱分离与活性成分筛选结合,可在体外实现药物体内过程的动态模拟,适用于中药等复杂体系物质基础的研究,其作为一种新兴技术在新药发现、药物分析等领域发展迅速,应用愈加广泛.本文着重对细胞膜色谱技术在中药有效成分辨识中的应用及方法学研究进展情况进行简要综述,并结合作者在复杂物质体系成分解析、细胞膜色谱和薄层色谱-生物自显影技术用于中药质量研究的一些心得和思考,探讨将以细胞膜色谱为代表的生物色谱技术(发现)与中药多维多息指纹图谱(整体表征)和多指标成分含量测定(局部刻画)结合,基于整体观,以中药活性成分的定性定量表征为指标评价中药质量的策略和思路.
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细胞膜色谱法筛选噻唑烷酸酯类化合物活性
目的 应用细胞膜色谱法(cell membrane chromatography,CMC)对实验室合成的10种取代噻唑烷酸酯类化合物进行活性筛选.方法 细胞膜色谱筛选条件:心肌细胞膜色谱柱(2 mm×50 mm);流动相为25 mmol·L-1磷酸盐缓冲液,pH 7.4;柱温37℃;流速0.3 mL·min-1,不同波长下检测,以容量因子、保留时间等为指标,卡托普利(captopril)为阳性对照,根据化合物在细胞膜色谱柱上的保留特性判断其亲和活性的大小.并通过大鼠降压实验测定了化合物的降压作用.结果 10种噻唑烷酸酯类化合物除2-(4-氯苯基)-噻唑烷-4-酸乙酯外,均在心肌细胞膜色谱柱上有特异性吸附,说明这些化合物均具有一定生理活性.进一步降压实验表明,除2-(4-二甲氨基苯基)-噻唑烷-4-羧酸乙酯、2-(3-硝基苯基)-噻唑烷-4-羧酸乙酯、2-(4-氯苯基)-噻唑烷-4-酸乙酯外均具有显著的降压作用(P＜0.05).结论 细胞膜色谱法可作为一种定性的、初步筛选化合物的快速方法.部分取代噻唑烷酸酯类化合物能吸附于心肌细胞膜表面,并具有降压作用.
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用细胞膜色谱法筛选研究红毛七中的有效成分
目的筛选天然植物红毛七中对主动脉血管有舒张作用的有效成分.方法采用兔血管细胞膜色谱(cell membranechromatography,CMC)模型筛选,液-固柱层色谱法分离,并结合离体药理实验确定红毛七中的有效成分.结果红毛七正丁醇部位(HMQ-4)是红毛七中对血管有舒张作用的有效部位,而由红毛七正丁醇部位中分离得到的成分(HMQ-44)则是其有效成分.结论血管CMC模型基本可以反映活性成分与细胞膜及膜受体的相互作用,而且活性成分在CMC体系中的保留特性与其离体药理作用有显著的相关性.
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用细胞膜色谱法筛选当归中的有效成分
目的:筛选当归中对主动脉血管有舒张作用的有效成分.方法:采用细胞膜色谱法(CMC)筛选,薄层层析法分离,并结合离体药理实验确定当归中的有效成分.结果与结论:血管CMC模型基本可以反映化合物与细胞膜及膜蛋白(包括受体)的相互作用;化合物在CMC体系中的保留特性和其药理作用有显著的相关性;DG-2是当归中对血管有舒张作用的有效部位,而DG-21则是其有效成分.
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细胞膜色谱技术用于中药活性成分筛选的研究进展
细胞膜色谱技术是生物色谱法在中药活性成分研究中的一个热点,适用于中药及天然药物药效物质基础的筛选研究.简要综述了细胞膜色谱技术在中药活性成分筛选方面的研究进展,并探讨了细胞膜色谱技术在其发展中所面临的问题及对策.
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活性整合指纹图谱技术在中药研究中的应用
中药活性整合指纹图谱技术把化学分析与药理活性评价进行了有效地结合,适合于中药活性成分的筛选,可阐释中医药多成分、多靶点的作用特点.近年来活性整合指纹图谱技术在中医药研究中受到高度重视,并得到广泛的应用.简要综述了常见的几种活性整合指纹图谱技术在中药活性成分筛选方面的研究进展,并探讨中药活性整合指纹图谱技术在其发展过程中存在的问题及对策,为其进一步广泛应用提供科学依据.
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细胞膜色谱固定相的制备条件优化研究
目的:对细胞膜色谱固定相的制备条件进行了优化,在此基础上提出了标准操作流程.方法:以兔红细胞为原材料,使用超声破碎法获取细胞膜,减压震荡法进行细胞膜固定化,通过BCA法测定细胞膜蛋白含量,研究细胞膜加入量、真空度、静置时间和载体材料对细胞膜色谱法的影响.结果:确定制备细胞膜色谱固定相的优条件是细胞膜蛋白加入量为80 μg(膜蛋白)/mg(硅胶),真空度为0.075 MPa,静置时间为14 h,并采用多孔硅胶.结论:通过试验考查出了细胞膜色谱固定相制备的优条件和标准操作流程.
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细胞膜色谱技术及其在中药活性成分筛选和安全性评价中的应用
细胞膜色谱法是一种可在体外模仿药物与靶点相互作用的生物色谱方法,目前已经广泛应用于活性成分的筛选中.通过概述细胞膜色谱技术的发展过程,详细总结了细胞膜色谱法用于中药活性成分筛选及安全性评价过程中所针对的疾病、靶点及涉及的细胞类型、中药和化学成分类型,并探讨其在应用过程中的局限性.
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用细胞膜色谱法和HPLC-TOF/MS研究附子中的有效成分
目的 通过细胞膜色谱技术和高效液相-飞行时间质谱( HPLC-TOF/MS)技术相结合,初步筛选和鉴定附子中的有效成分.方法 初步筛选采用自制的大鼠心肌细胞膜色谱柱,流动相为10 mmol/L磷酸盐缓冲溶液,流速为0.2 ml/min.色谱分离采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18柱,流动相为0.1％甲酸水溶液和乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min.质谱鉴定采用TOF/MS,正离子模式扫描.结果 确定了附子中8个可能的有效成分.结论 通过细胞膜色谱技术和HPLC-TOF/MS技术相结合,为从天然产物中快速寻找新的活性成分提供了途径.
关键词： 细胞膜色谱 高效液相-飞行时间质谱 附子 -
用SMMC-7721和Hep-G2全二维细胞膜-整体柱色谱联用技术筛选中药鸦胆子的抗癌活性物质
目的：筛选中药鸦胆子中的抗癌活性成分。方法同时使用全二维色谱技术和细胞膜色谱技术联用质谱技术。结果经初步分离筛选，得到了腺苷和鸦胆子苦素B两种潜在的抗癌活性成分。结论该方法对中药中活性成分的筛选，具有快速、高效和在线的特色和优点。
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生物色谱用于中药活性成分筛选
生物色谱是基于受体药理学、细胞生物学、液相色谱技术等原理,以生物活性材料为固定相配基的新型色谱技术,其特点在于能够反映待测物的生理学及药效学作用.该色谱技术用于中药活性成分筛选具有高通量、特异性较强、分离筛选相结合等优势,并为研究药物与受体相互作用、蛋白质的分离提纯及中药质量控制等提供了新的方法.本文介绍了固定化脂质体色谱、细胞膜色谱、分子生物色谱等在中药活性成分筛选领域中的应用.
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2-甲氧基雌二醇及其合成中间体的大鼠肺细胞膜色谱行为
目的:探讨实验室合成的2-甲氧基雌二醇(2-ME)及其合成中间体的大鼠肺细胞膜色谱行为.方法:经筛选,大鼠细胞膜色谱条件为自制大鼠肺细胞膜色谱柱(10 mm×2 mm),流动相为10 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4),柱温为37℃,流速为0.2 mL/min.以沙丁胺醇为阳性对照,以容量因子k′作为指标,考察2-ME及其合成中间体在大鼠肺细胞膜色谱柱上的保留特性.结果:2-ME及合成中间体1、2号化合物在大鼠肺细胞膜色谱柱上均有吸附,且k′依次为2号化合物>1号化合物>2-ME;合成中间体3及4号化合物未表现出吸附特性.2-ME与大鼠肺细胞膜色谱柱的亲和力大于纯硅胶色谱柱、大鼠心肌细胞膜色谱柱和肝细胞膜色谱柱.结论:2-ME在大鼠肺细胞膜上具有特异性亲和.
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生物活性跟踪分离法筛选当归挥发油中的有效成分
目的:筛选当归挥发油中对主动脉血管有舒张作用的有效成分.方法:采用细胞膜色谱法(CMC)筛选、高效液相色谱法分离,并结合离体药理实验确定当归挥发油中的有效成分.结果:在当归挥发油中分离出对主动脉血管有舒张作用的2种有效成分.结论:化合物在血管CMC模型上的保留特性和其药理作用有显著的相关性.
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基于细胞膜色谱法的新疆准噶尔乌头中抗EGFR活性成分筛选
目的:从准噶尔乌头中筛选抗EGFR作用的活性成分,并考察筛选成分对HEK293细胞和EGFR/HEK293高表达细胞株的抑制活性.方法:用高表达表皮生长因子受体细胞膜色谱(EGFR/CMC)通过十通切换阀与高效液相色谱(HPLC)构成二维在线联用色谱系统,将CMC上保留的组分进行接液,用离线MS来鉴定准噶尔乌头中抗EGFR活性成分;利用分子模拟对接实验分析活性成分与受体的相互作用方式;体外用MTT实验证实活性组分对HEK293细胞和EGFR/HEK293高表达细胞株的抑制作用.结果:乌头碱、12-表-欧乌碱、准噶尔乌头碱为作用于EGFR的有效成分,并具有与对照药物吉非替尼类似的色谱保留特性;分子模拟对接实验表明这些成分与EGFR的相互作用方式与阳性药吉非替尼相似;MTT实验证实在浓度为0.4 ~50 μmol·L-1范围内乌头碱,12-表-欧乌碱,准噶尔乌头碱对HEK293细胞增殖与EGFR高表达的体外抑制作用具有剂量依赖性.结论:筛选的结果与生物效应相一致;在线EGFR/CMC-HPLC-MS二维色谱系统在中药复杂体系中快速筛选发现活性物和药物先导物方面具有良好的应用前景,同时充分展现了细胞膜色谱法操作简便,快速,高效灵敏的优势.
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夏枯草中抗偏头痛组分的筛选研究
目的 采用细胞膜色谱法筛选夏枯草中抗偏头痛的活性成分.方法 通过大鼠纹状体组织制备得到细胞膜色谱固定相,建立离线的细胞膜色谱-高效液相色谱系统,特异性地识别夏枯草提取液中可与固定相上5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受体1D亚型(5-HT1D)发生作用的成分,并通过区带流出法研究药物与受体作用的平衡解离常数(KD).结果 通过紫外光谱及高效液相色谱分析,发现熊果酸是细胞膜色谱保留的主要成分,并测得熊果酸与5-HT1D受体作用的KD值为(6.79±0.41)×10-6mol·L-1.结论 经细胞膜色谱筛选发现,熊果酸是夏枯草中可与5-HTID作用的活性成分.
