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半夏人工种子贮藏技术的研究
目的:研究半夏人工种子的贮藏技术.方法:通过正交实验设计,研究不同浓度的保鲜剂、植物生长物质和防腐剂等因素对半夏人工种子在常温和低温下贮藏后的萌发率影响.结果与结论:以3%海藻酸钠为种皮基质,添加0.1 mg·L-1GA3,0.2%苯甲酸钠,1%多菌灵,0.1%Cl2O以及0.2%壳聚糖制成人工种子,在25℃条件下贮藏30 d后,可获得65%的萌发率.以3%海藻酸钠为种皮基质,添加0.1 mg·L-1GA3,0.2%苯甲酸钠,1%多菌灵,0.2%Cl2O以及0.1%壳聚糖制成人工种子,在4℃条件下贮藏30 d后,可获得80%的萌发率.
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半夏块茎高质量总RNA提取的一种有效方法
目的:探讨一种有效提取半夏块茎总RNA方法.方法:以半夏试管苗的叶片、叶柄和块茎为试验材料,将常规的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法做了改进,在RNA提取缓冲液中加入高浓度的β-巯基乙醇以除去酚类物质,用酸酚/氯仿抽提去除蛋白质污染,以及利用异丙醇和醋酸钠联合沉淀多糖等手段,建立了一种简单实用的从富含多酚类和多糖等物质的植物材料中提取总RNA的方法.结果:该方法所提RNA的A260/A230均大于2.0,A260/A280的值为1.7～2.0,电泳条带清晰,RNA完整性好.结论:利用本方法提取的半夏试管小块茎总RNA具有很高的质量和纯度,且得率很高,完全满足后续的DDRT-PCR和反向Northern blotting等分子生物学研究,而且简单经济、实验结果稳定,重复性好,适合富含多酚类和多糖等物质的药用植物组织总RNA的提取.
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钾盐对半夏试管块茎诱导的影响
目的:研究不同浓度钾盐对半夏直接诱导形成试管块茎的影响.方法:选用半夏试管苗的叶片、叶柄和块茎为试验材料,接种到附加不同浓度、不同种类钾盐的培养基中.结果与结论:钾浓度不超过4.02mmol·L-1时对半夏试管块茎形成有促进作用,浓度在12.06mmol·L-1时则产生抑制.
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多种因素对半夏外植体直接诱导形成试管小块茎的影响
目的:研究一些植物生长物质种类和浓度、水解酪蛋白(CH)、活性碳(AC)、聚乙二醇(PEG4000)、蔗糖含量以及葡萄糖含量对半夏外植体直接诱导形成小块茎的影响.方法:采用正交试验方法,选用半夏的叶片、叶柄和块茎为试验材料,接种于各种不同培养基中.结果与结论:叶片直接诱导小块茎的适宜培养基有:MS+MET 0.5 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1+3%蔗糖和MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IAA 0.5 mg·L-1+3%葡萄糖;块茎直接诱导形成小块茎的适宜培养基有:MS+ 6-BA 1.0 mgL-1+5% PEG+5%蔗糖和MS+CH 500 mg·L-1+ MET 0.5 mg·L-1+ 6-BA 1.0 mg·L-1+0.5% AC+5%蔗糖;适宜植株生长的培养基有:MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IAA 0.5 mg·L-1+ AC 0.5%+5%蔗糖和MS+MET0.5 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1+3%蔗糖.
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半夏试管小块茎发育过程中相关基因差异表达的研究
目的:分析半夏试管块茎形成过程中总mRNA差异表达的变化规律,为研究半夏试管块茎形成的分子机制提供了信息.方法:利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR),分离和克隆半夏试管小块茎发育的相关基因片段.结果和结论:分离到了15个半夏试管小块茎发育过程中特异表达的cDNA片段,在GenBank中进行同源性比较发现6个没有同源序列与之匹配,推测为新的cDNA片断;3个片段推导的氨基酸序列分别与真核生物启动子,MADS-box蛋白和乙烯信号转导因子有高度同源性.半定量RT-PCR进一步证实它们存在,并在半夏块茎形成不同天数高度特异表达.
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半夏试管块茎银染mRNA差异显示条件的建立及优化
目的:建立半夏试管小块茎DDRT-PCR反应佳体系,为进一步研究半夏试管小块茎相关基因表达提供技术参考.方法:以半夏试管苗的叶柄、试管小块茎为材料,利用正交试验设计,研究模板.Mg2+,dNTPs,引物和DNA聚合酶等因素,对DDRT-PCR反应体系的影响.结果与结论:20μL的反应体系中含有dNTPs 150 pznol·L-1,Taq酶0.6 U,锚定引物2μmol·L-1,随机引物1μmol·L-1,Mg2+2.5 mmol·L-1,2μL10×buffer和2.5鹇的cDNA模板.各因素影响程度依次为raq酶＞cDNA模板＞dNTPs＞Mg2+＞引物.
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半夏的人工种子技术
目的:研究半夏人工种子技术.方法:以半夏试管小块茎为材料,海藻酸钠、壳聚糖等为种皮基质,添加适量的激素、抗生素、防腐剂、农药和金属离子等制成人工种子,在人工环境和自然环境培养.结果与结论:以3%海藻酸钠和2%壳聚糖为种皮基质,添加0.1 mg ·L-1GA3,0.3%多菌灵,0.2%苯甲酸钠以及0.05%CuCl2,0.05%CoCl2和0.05%NiCl等制成复合型人工种皮,可获95%的萌发率和90%的成苗率.
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半夏试管块茎形成过程中内源激素的变化
目的:通过分析5种内源激素IAA,GA_3,ABA,ZR,JA在半夏块茎形成过程中的动态变化,初步探讨了半夏试管块茎形成的生理生化机制.方法:将半夏叶柄正置人MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+5%蔗糖培养基中诱导形成块茎,取不同生长时期的小块茎和叶柄,对内源激素进行提取,采用EUSA法进行测定.结果:IAA,ABA,JA,ZR在块茎膨大时期迅速上升;GA_3的曲线呈倒S型.结论:在半夏试管块茎形成过程中,内源激素ABA,JA,IAA,ZR和GA_3起着重要的凋控作用.
