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半夏试管块茎银染mRNA差异显示条件的建立及优化
目的:建立半夏试管小块茎DDRT-PCR反应佳体系,为进一步研究半夏试管小块茎相关基因表达提供技术参考.方法:以半夏试管苗的叶柄、试管小块茎为材料,利用正交试验设计,研究模板.Mg2+,dNTPs,引物和DNA聚合酶等因素,对DDRT-PCR反应体系的影响.结果与结论:20μL的反应体系中含有dNTPs 150 pznol·L-1,Taq酶0.6 U,锚定引物2μmol·L-1,随机引物1μmol·L-1,Mg2+2.5 mmol·L-1,2μL10×buffer和2.5鹇的cDNA模板.各因素影响程度依次为raq酶＞cDNA模板＞dNTPs＞Mg2+＞引物.
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艾叶油乳-水凝胶贴膏剂的制备与透皮研究
目的制备艾叶油乳-水凝胶贴膏剂,并优化其处方和评价其体外透皮性能.方法以初黏力、持黏力、1 80°剥离强度、内聚力和渗透度为评价指标,选择水凝胶贴膏剂骨架材料聚丙烯酸钠NP-700、交联剂甘羟铝、交联调节剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和保湿剂甘油,开展正交优化试验.采用GC法测定样品液中桉油精、樟脑、龙脑的量,考察其体外透皮情况.结果 影响贴膏剂成型的因素顺序为甘油＞甘羟铝＞ EDTA＞聚丙烯酸钠NP-700,佳组合为30％甘油、5％聚丙烯酸钠NP-700、o.3％甘羟铝、0.03％ EDTA.3种成分的稳态渗透速率分别为85.216、4.442、3.941 μg/(cm2·h).结论 艾叶油乳-水凝胶贴膏剂符合质量要求,透皮释药具有零级释放特点.
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离子注入选育灵芝多糖高产菌株及发酵条件优化
以美国大灵芝为出发菌株,利用N+离子注入技术选育出一株遗传性状稳定的灵芝多糖高产菌株.结果表明:在20 KeV、2×1016ions/cm2的注入条件下灵芝菌株G13的胞外多糖的产量为2.71 g/L,比对照菌株提高了15.32%.采用单因素法和正交实验法得到的培养基组分质量浓度优化组合为:葡萄糖45g/L,玉米粉40g/L,黄豆粉10g/L,酵母膏0.5g/L,VBl 25 μg/L,KH2PO4 0.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.1g/L.进行分批发酵实验,发酵120 h灵芝胞外多糖的产量达到3.38g/L.
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杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定的样品处理方法优化
目的:建立一个快捷的杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定的样品处理方法.方法:以正交设计方法确定样品制备的佳条件,采用HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量.结果:采用优化后的样品处理方法(药材粉碎过80目筛,控制超声频率60 kHz,于45℃下提取20 min)制备供试液,并用改良的色谱条件进行杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量测定,所得结果与采用现行中国药典法(2005年版一部)测得的松脂醇二葡萄糖苷含量接近;含量测定中所采用的流动相为乙腈-水(15:85).获得了对称性良好的色谱峰和理想的分离度.结论:新建方法样品处理过程简便、迅速,含量测定结果准确可靠、分离效果好、稳定性好,可以快速并准确测定多批样品.
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载有蜂毒素的磷酸钙纳米粒的制备、表征和体外抑瘤活性研究
目的:采用吸附法制备载有蜂毒素的磷酸钙纳米粒(MLT-CAP-NP),优化制备工艺,并对其进行表征和体外抗癌活性考察.方法:以包封率、载药量和粒径为指标,对MLT-CAP-NP制备过程中温度、pH值、药载比、载体浓度、钙离子的加入和吸附时间等进行单因素考察,并在此基础上,采用正交实验优化制备工艺.采用透析法对MLT-CAP-NP进行体外释放实验,并采用MTT法考察MLT-CAP-NP对HepG2细胞的抑制作用.结果:MLT-CAP-NP的佳制备工艺包括:常温下,系统pH为8左右,CAP载体浓度为6 mmol·L(-1),药载比为4%,吸附时间不少于0.5 h.在高离子强度和低pH值的释放介质中,MLT-CAP-NP释放度更大.MLT-CAP-NP的抑瘤活性分别为MLT水溶液和脂质体的1.77和1.45倍.结论:采用吸附法制备MLT-CAP-NP,切实可行.MLT-CAP-NP的释放机制可能是离子交换,其释放行为具有酸敏性特点,其缓释作用提高了其抑瘤活性.
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丹芩颗粒提取工艺研究
目的 优选丹芩颗粒的佳提取工艺.方法 正交试验法L9(34),对影响丹芩颗粒提取工艺的因素进行了研究.结果 优选出丹芩颗粒的制备工艺.取仙鹤草、黄芩等,加入10倍量50%乙醇提取3次,1.5 h/次;取丹参、柘树根等9味药加10倍量水,煎煮3次,1.5 h/次,药液滤过,滤液减压浓缩至相对密度1.18～1.22(50～60 ℃),加药用酒精使含醇量达60%,搅匀,静置12 h.结论 该提取工艺合理可行.
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党参热风干燥工艺优化
目的 优化党参热风干燥工艺.方法 采用热风干燥技术,选择热风干燥温度、切片厚度、载样量为因素,,以党参的浸出物含量及党参炔苷含量为指标,用先单因素试验,再进行正交优化试验.结果 党参佳热风干燥工艺参数为:热风干燥温度50℃、切片厚度5mm、载样量10kg/m2.结论 按优化后工艺操作可得到高品质的党参干制品,为工业化应用提供可靠的加工方法.
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蚓激酶脂质体的制备及质量评价
目的 优选蚓激酶脂质体的制备工艺.方法 采用薄膜超声分散法制备蚓激酶脂质体,以包封率为指标通过正交试验法优选制备处方和工艺,并考察制备脂质体的包封率、形态、粒径分布、Zeta电位及在体外释放规律.结果 卵磷脂100mg、胆固醇20mg、蚓激酶1mg、PBS 15mL、pH6.6时包封率高,电子显微镜下为囊状小球,测得3批蚓激酶脂质体的平均包封率为30.5％,平均粒径424 nm,Zeta电位为-49.68 mV,体外释放符合一级动力学释放规律.结论 采用薄膜分散法制备蚓激酶脂质体工艺简单,包封率适宜,体外释放迅速.
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PELA疫苗微球载体的正交优化工艺研究
目的利用正交设计的数学方法进行实验设计,以牛白蛋白为包裹模型,寻求制备不同疫苗微球载体的佳条件.方法采用W/O/W法制备PELA微球,考察不同因素对疫苗微球平均粒径、成球率与蛋白包裹率(三指标)的影响.结果五因素对疫苗微球成球性影响的主次顺序为PVA浓度＞搅拌速度＞PELA浓度＞油外/外水相体积比＞内水相体积;而对粒径与蛋白包裹率的顺序则为PELA浓度＞PVA浓度＞搅拌速度＞油相/外水相体积比＞内水相体积和PELA浓度＞PVA浓度＞搅拌速度＞内水相体积＞油相/外水相体积比.结论控制工艺条件,可制备适于不同需求的疫苗微球载体.
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24孔板优化林肯链霉菌发酵培养基
目的 优化林肯链霉菌发酵培养基.方法 采用24孔板,对现有的两种发酵培养基中各因素进行考察,筛选出较优发酵培养基;在此发酵培养基基础上,采用L25(56)正交设计方法,对可溶性淀粉、葡萄糖、豆饼粉、硫酸铵、玉米浆和磷酸氢二钾这6个可能影响林可霉素发酵水平的因素进行效应评价.结果 得到佳发酵培养基(g/L):可溶性淀粉30,葡萄糖105,豆饼粉22.5,玉米浆1,氯化钠2.25,碳酸钙6,硫酸铵2.65,硝酸钾1,磷酸氢二钾0.5.结论 对优化后的发酵培养基进行孔板发酵验证,林可霉素的平均发酵产量达到2288μg/mL,比未优化组提高了42.03％.
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一株具有抗菌活性耐盐芽孢杆菌B-11的分离鉴定及发酵工艺优化
目的 旨在从盐碱土壤中分离获得一株耐盐细菌B-11,对其进行分类鉴定及抗菌活性优化及抗菌特性研究.方法 基于形态学分析和16S rRNA基因序列对菌株进行分类鉴定.以金黄色葡萄球菌为指示菌,采用双层平板法对菌株B-11发酵液特性进行研究,并通过发酵培养基的正交优化试验,获得菌株产抗菌活性物质佳的发酵培养条件.通过对菌株B-11基因组次级代谢产物合成基因的分析,研究其基因组上的功能基因.结果 结合形态学和分子鉴定表明该菌为Bacillus属成员,在0-4％的NaC1浓度范围内生长良好,为耐盐细菌.该细菌发酵上清液对蛋白酶K和链霉蛋白酶敏感,对pH、温度和紫外光具有良好的耐受性.通过正交优化得到菌株B-11适发酵条件为:可溶性淀粉15g/L,黄豆粉15g/L,NaCl 15g/L,pH为自然pH,接种量为1.5％,发酵温度为34℃或37℃,优化后发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径较优化前提高25.5％.利用基因组测序及次级代谢产物合成相关基因分析,发现Bacillus sp.B-11基因组中含有非核糖体肽合成酶(NRPS)基因,并结合该菌次级代谢产物对蛋白酶的敏感性,表明该菌具有产多肽类化合物的潜力.结论 盐碱土壤中的极端微生物资源可作为抗菌活性物质的潜在新来源.
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痛经灵颗粒提取工艺的正交优化
目的:优选痛经灵颗粒的佳提取工艺条件.方法以原儿茶醛、出膏率为评价指标,采用正交实验法对痛经灵颗粒的提取工艺进行优选.结果佳提取工艺条件为用10倍量水提取2次,每次1h.结论优选出的工艺科学合理.
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膝骨痹康袋泡熏洗剂提取工艺的优化
目的：优选用于膝骨关节炎的膝骨痹康袋泡熏洗剂的提取工艺。方法：采用L9（34）的正交试验法，利用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别测定柚皮苷和乌头碱的含量，并以干膏得率、柚皮苷含量和乌头碱含量的加权综合评分作为工艺筛选的评价指标，考察膝骨痹康袋泡熏洗剂制剂的水提取加水量、煎煮时间和提取次数对提取工艺的影响，确定膝骨痹康袋泡熏洗剂的优提取工艺。结果：膝骨痹康袋泡熏洗剂优提取工艺为15倍加水量，煎煮3次，每次1 h，验证3批所得样品平均的干膏得率、柚皮苷含量和乌头碱含量分别为20.73%、102.5 mg、22.4 mg，与正交试验结果相符，达到优化效果。结论：优选的提取工艺简便、稳定、重复性好，可用于膝骨痹康袋泡熏洗剂的工业化生产，为该制剂的进一步研究奠定良好的基础。
