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没食子酸通过拮抗脂多糖诱导的TLR4/NF-κB活化抑制RAW264.7巨噬细胞炎性反应
目的 观察没食子酸对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路的影响.方法 将巨噬细胞分为空白对照组、LPS组、LPS联合没食子酸组、LPS联合NF-κB抑制剂吡咯二硫代甲酸(PDTC)组和LPS联合地塞米松(DM)组.处理后的细胞培养24h,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平,实时定量PCR检测ⅡLR4、NF-κB mNRA水平,Western blot法检测p65、p-p65、TLR4、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白表达水平.结果 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞后TNF-α、IL-1、IL-6水平升高,没食子酸可降低LPS诱导引起的TNF-α、IL-1和IL-6表达水平升高.LPS刺激后TLR4 mRNA及蛋白表达增加,NF-κB活化,没食子酸可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化.结论 没食子酸可通过TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应.
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Toll样受体4和单核细胞趋化蛋白1与急性冠脉综合征的关系研究
目的：探讨Toll样受体4（TLR4）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）与急性冠脉综合征的关系。方法选择2015年1月～2016年3月西安市第一医院行冠状动脉造影确诊为冠心病患者60例，其中急性冠脉综合征（ACS）组39例，稳定性心绞痛（SA）组21例，ACS组又分为急性心肌梗死（AMI）组21例和不稳定性心绞痛（UAP）组18例。另选取30例造影正常者为对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清 MCP-1含量，用流式细胞仪检测TLR4的表达。采用全自动生化分析仪检测各组患者空腹血糖、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平。结果 ACS组及SA组TLR4水平明显高于对照组（t＝4.455，P＝0.021）。ACS组患者血清MCP-1水平明显高于 SA组（t＝3.220，P＝0.002）和对照组（t＝6.197，P＝0.000）。SA组 MCP-1水平高于对照组（t＝2.306，P＝0.025）。经 Spearman相关性检验，ACS组外周血单核细胞中 TLR4水平与血清 MCP-1水平呈正相关（r＝2.389，P＝0.025）。结论 MCP-1和TLR4可判定冠心病的病变程度，MCP-1与TRL4的联合检测对ACS的早期诊断、治疗有一定的临床价值。
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人正常及炎症牙髓中炎症信号受体TLR4表达的研究
目的:研究人正常及炎症牙髓组织中炎症信号受体TLR4的表达特点,探讨其在牙髓和根尖周组织炎症中的可能作用.方法:采用激光共聚焦扫描显微镜和免疫荧光技术,检测正常及炎症牙髓TLR4的表达情况.结果:正常牙髓组织中未发现TLR4免疫阳性细胞,炎症牙髓组织病灶处TLR4表达强阳性.正常组平均荧光强度为28.80±2.57,炎症组为258.12±24.51(P<0.001).结论:与正常牙髓组织相比,炎症牙髓组织TLR4表达显著增强,提示其可能参与牙髓组织炎症过程.
关键词： 牙髓炎 Toll样受体4(TLR4) 激光共聚焦扫描显微镜 -
Toll样受体4对牙周膜细胞增殖的影响
目的：了解Toll样受体4对人牙周膜细胞增殖的影响。方法：以改良组织块法体外获得人牙周膜细胞，取生长良好的第3代细胞随机分为3组：空白对照组、NC对照组（NC－shRNA转染组）和TLR4－shRNA转染组，并于转染48 h 后用倒置荧光显微镜观察转染效果、用荧光实时定量 PCR检测各组细胞中TLR4mRNA的表达水平；后将3组细胞分别接种于96孔细胞培养板进行培养，分别于培养24、48、72 h用MTT法检测各组细胞的增殖能力。结果：TLR4－shRNA可明显降低人牙周膜细胞的TLR4mRNA表达水平（P＜0．05）；MTT检测结果显示，TLR4－shRNA转染组在常规培养48、72 h的OD值均明显低于空白对照组和NC对照组（P＜0．05），而NC对照组的OD值在72 h时明显低于空白对照组（P＜0．05）。结论：TLR4对牙周膜细胞的增殖有一定调控作用，转染慢病毒后该作用增强。
关键词： shRNA Toll样受体4(TLR4) MTT法 增殖 -
高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4与哮喘气道炎症的关系及维生素D的作用
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)与气道炎症的关系及维生素D的作用.方法 BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和1,25-(OH)2D3干预组(每组8只).采用HE染色观察小鼠肺组织病理学变化并应用计算机图像系统测定支气管壁厚度,采用免疫组化法观察肺组织HMGB1和TLR4表达,同时收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血,将BALF进行细胞学检测,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF和外周血中HMGB1、TLR-4、白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)含量.结果 哮喘组小鼠肺组织HMGB1和TLR4表达较强,干预组表达较弱.哮喘组BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞比例明显升高,单核/巨噬细胞比例明显下降(均为P＜0.05);干预组BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞比例明显下降,单核/巨噬细胞比例明显上升(均为P＜0.05).哮喘组BALF和外周血中HMGB1、TLR4和IL-4含量均明显高于对照组,IFN-γ含量均明显低于对照组(均为P＜0.05);干预组BALF和外周血中HMGB1、TLR4和IL-4含量均明显低于哮喘组,IFN-γ含量明显高于哮喘组(均为P＜0.05).BALF中HMGB1和TLR4含量分别与细胞总数和IL-4浓度均呈正相关(r1为0.796、0.730;r2为0.695、0.648;均为P＜0.05).结论 HMGB1和TLR4与气道炎症和免疫紊乱有关;适量1,25-(OH)2D3可减轻气道炎症,可能与调节Th1/Th2细胞平衡有关.
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Toll样受体4信号通路过度激活在大鼠激素性股骨头坏死中的作用
目的 建立大鼠激素性股骨头坏死模型并研究Toll样受体4(TLR4)信号通路在激素性股骨头坏死中的作用机制.方法 成年雄性SD大鼠随机分为模型组、干预组,每组各24只,按照甲强龙20 mg/kg的剂量给予双侧臀大肌交替肌注造模,1周1次,共8周.其中干预组在每次激素注射后,同时给予10 mg/kg TAK242药物静脉注射;另12只大鼠设为对照组,仅在同等条件下给予生理盐水肌注.在激素注射后的8、10、12周时分别以过量麻醉法处死各组动物,采用ELISA测定血清中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量,并对股骨头进行组织病理学观察和TRAP特异性染色观察.分别提取各组大鼠股骨头总mRNA和总蛋白,采用RT PCR和Western blot技术检测TLR4、髓样细胞分化因子88(MyD88)、NF-κB p65和单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的mRNA及蛋白的表达.结果 模型组股骨头坏死的组织病理学表现明显,其中血清TRAP含量、TRAP特异性染色面积、各因子的mRNA和蛋白含量表达均较其他两组有统计学差异(P＜0.05).干预组与空白对照组的各指标检测结果差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 大剂量激素的使用可以引起TLR4信号通路过度激活从而介导激素性股骨头坏死的发生.
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TAK242干预早期LPS诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征的机制研究
目的 探究Toll样受体4信号抑制剂TAK242对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠的治疗干预机制.方法 采用LPS诱导建立小鼠ARDS模型,HE染色观察小鼠肺组织形态结构改变,取45只小鼠随机分成对照组、ARDS组及TAK242+ ARDS组,每组15只.采用荧光定量PCR检测及Western blot检测各组小鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA及蛋白表达变化.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠肺灌洗液中TNF-α、IL-6含量变化.结果 与对照组小鼠相比,ARDS小鼠肺泡及间质组织发生病变,组织炎症浸润明显,小鼠肺组织TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05),肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6含量明显升高.给予TAK242治疗后,肺组织中TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达及肺泡灌洗液中含量均较ARDS组小鼠明显降低(P＜0.05).结论 TAK242诱导小鼠肺组织中TLR4表达下降,并抑制相关炎症因子表达,可能成为TAK242抑制LPS诱导ARDS小鼠的机制之一.
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Toll样受体4通过调节性T细胞引起不明原因复发性流产的机制研究进展
母-胎界面免疫耐受状态异常是致不明原因复发性流产(URM)的重要原因之一,但其机制目前尚不明确.调节性T(regulatory T,Treg)细胞在维持母-胎界面免疫耐受中发挥重要作用.新研究发现Toll样受体可能是调节Treg细胞增殖、分化和功能的关键.母-胎界面Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)参与调控Treg细胞抑制活性,参与诱导滋养细胞凋亡和影响Treg/Th17平衡,可影响免疫耐受状态致不明原因复发性流产(URM)发生.本文就蜕膜TLR4调节Treg细胞对URM发生的作用机制作一综述.
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早产儿窒息后Toll样受体4及髓样分化因子88表达变化在多器官功能障碍综合征中的意义
目的 探讨Toll样受体4与髓样分化因子88表达变化与早产儿窒息后多器官功能障碍综合征之间的关系.方法 选取我院在2017年7月-2018年7月期间收治的20例健康足月早产儿及窒息后24h内入院的40例窒息早产儿作为研究对象,对Toll样受体4与髓样分化因子88表达水平采用免疫组化方式予以检测.结果 窒息早产儿TLR4与MyD88表达在窒息后第1d增强,差异具有统计学意义(P＜0.05);第7d恢复至正常水平,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR4与MyD88能够作为早产儿窒息后多器官功能障碍综合征的早期诊断及预后评估指标之一.
