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电针对局灶性脑缺血大鼠脑细胞内Ca2+含量的影响
目的:研究电针对局灶性脑缺血大鼠脑细胞内Ca2+的调节作用.方法:利用激光共聚焦扫描显微镜观察缺血区活体脑片中脑细胞内Ca2+的变化.结果:缺血1h,皮质部细胞内Ca2+含量还未出现明显变化,而纹状体部细胞内Ca2+的含量明显升高;缺血3h,皮质部和纹状体细胞内Ca2+含量均出现显著的升高,且纹状体细胞内Ca2+含量明显高于皮质部;缺血3h并给予电针治疗30min后,则皮质部和纹状体细胞内Ca2+含量均出现明显的下降.结论:电针可迅速调节缺血区脑细胞内的Ca2+含量,抑制胞内Ca2+超载,从而保护脑缺血后继发神经元的损伤.
关键词： 电针 激光共聚焦扫描显微镜 局灶性脑缺血 钙离子 大鼠 -
超氧阴离子自由基对大鼠肝卵圆细胞胞内自由钙浓度的影响
采用激光共聚焦扫描显微镜,观察黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶反应系统(X/XO)生成不同浓度的超氧阴离子自由基()致培养的大鼠肝卵圆细胞(WB细胞)胞质内钙浓度的变化,结果发现:仅小剂量的(X:200mmol/L XO: 0.2mu/mL)引起胞质内钙浓度升高,约30s后达到峰值,60s后恢复正常.部分细胞观察到数次钙浓度间断升高、幅度逐渐下降的现象.超氧化物歧化酶(SOD)可抑制此变化,过氧化氢酶(CAT)无效果.细胞在无钙液中观察仍出现钙峰,但受内钙库耗竭剂Thapsigargin阻断.结果表明,小剂量可诱使肝卵圆细胞胞内钙库钙释放造成瞬间胞质自由钙浓度增高,并可能引发胞内钙浓度的衰减振荡,此可能与通过影响胞内重要信号转导因子钙,调控细胞生物学功能如增殖、转化相关.
关键词： 超氧阴离子自由基 肝卵圆细胞 钙 激光共聚焦扫描显微镜 -
乙酰唑胺对水孔蛋白-1表达的抑制与细胞内pH及Ca2+的关系
为明确乙酰唑胺对水孔蛋白-1(aquaporin-1,AQP1)基因表达的抑制是否与其对细胞内pH和Ca2+浓度的影响有关,采用激光共聚焦扫描显微镜的技术观察不同培养条件下(培养液中含或不含NaHCO3),10-5 mol*L-1乙酰唑胺对原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞内pH和Ca2+浓度的影响,同时用免疫荧光法观察给药1d、3d、7d后AQP1表达的变化.结果显示在含NaHCO3组,乙酰唑胺处理7d后,使细胞内的H+探针的荧光强度由91.81±5.44降至39.58±3.10, Ca2+探针荧光强度由18.23±1.02降至11.5±1.03,AQP1蛋白荧光强度由44.4±1.86减少到25.91±1.97;在不含NaHCO3组,细胞内pH和Ca2+浓度均无明显变化;但AQP1蛋白的荧光强度由43.15±2.97明显减少到23.85±1.92.结果表明乙酰唑胺对细胞内pH和Ca2+浓度的调节依赖于细胞外液HCO3-的存在,而它对AQP1表达的抑制与细胞内pH和Ca2+浓度的改变无关.
关键词： 水孔蛋白 乙酰唑胺 激光共聚焦扫描显微镜 -
培养的大鼠脊髓神经元中微管相关蛋白5与溶酶体的相关性
目的探讨微管相关蛋白5(MAP5)与溶酶体之间的相互关系. 方法神经细胞培养、免疫荧光细胞化学方法、激光共聚焦扫描显微镜. 结果在培养脊髓神经元中,MAP5及组织蛋白酶D均分布在胞质及突起中,融合图像中两者分布大致相似.分别使用Nocodazole及PMA处理后MAP5及组织蛋白酶D在培养脊髓神经元的变化具有一致性. 结论提示MAP5和溶酶体的形态及分布依赖于微管的完整性.
关键词： 脊髓神经元 微管相关蛋白5 溶酶体 激光共聚焦扫描显微镜 大鼠 -
卵泡刺激素及其受体在大鼠胰腺的共定位观察
目的观察卵泡刺激素(FSH)及其受体(FSHR)在大鼠胰腺中的共存关系,以了解FSH对胰腺的功能意义.方法应用免疫荧光组织化学双标记染色技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察染色结果.结果部分外分泌腺细胞、导管上皮细胞及部分胰岛细胞呈FSH反应阳性,呈强绿色荧光.小血管内皮细胞也呈FSH反应弱阳性,呈弱的绿色荧光.部分胰岛细胞呈FSHR反应阳性,呈强红色荧光.一些外分泌腺上皮细胞呈FSHR反应弱阳性,呈淡红色荧光.有一些胰岛细胞呈FSH和FSHR双阳性反应,呈黄色荧光或红、绿相间荧光. 结论FSH及其受体均存在于大鼠胰腺中,胰岛中的部分细胞共同存在FSH及其受体,FSH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用.
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铁离子对Caco-2细胞内钙离子转运的影响及钙离子浓度变化与细胞凋亡关系的研究
目的研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对钙离子(Caco-2)细胞内Ca2+转运的影响及细胞内钙离子浓度升高与Caco-2细胞凋亡的关系.方法采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞技术进行观察与检测.结果(1)利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着Caco-2细胞外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为100～300μmol/L),Ca2+向细胞内的转运量增加;而随着细胞外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为10～100μmol/L),Ca2+向细胞内的转运呈降低趋势;(2)经A23187和Fluo-3/AM处理后Caco-2细胞的存活率较高,达90%以上(用荧光素二醋酸酯检测);(3)A23187升高Caco-2细胞的胞内Ca2+浓度,呈剂量依赖性;经流式细胞技术(FCM)检测发现胞内Ca2+浓度增加具有诱导Caco-2细胞凋亡的作用.结论Caco-2细胞外Fe3+浓度的减少有促进Ca2+向细胞内转运的作用,但胞外Fe3+浓度增加时有抑制Ca2+向胞内转运的作用;胞内Ca2+浓度增加对Caco-2细胞凋亡具有诱导作用.
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低氧条件下低氧诱导因子-1α及p53的表达
目的研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子-1α及凋亡相关基因p53蛋白表达的变化,探讨两者之间的关系.方法实验用雄性昆明小鼠,分为低氧组和对照组,低氧仓浓度分别为10%、7%、5%.用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦扫描显微镜技术,检测小鼠在低氧条件下肺组织中HIF-1α及p53蛋白表达的变化.结果正常组小鼠肺组织HIF-1α无表达.p53少量表达;低氧组HIF-1α及p53蛋白表达均增加,并且随低氧时间的延长及低氧强度的增加而增强,P＜0.05,HIF-1α及p53的表达呈显著正相关(r=0.97). 结论低氧可诱导小鼠肺组织中HIF-1α的表达增强,同时肺组织p53蛋白的表达上调,两者呈显著正相关,说明HIF-1α有可能参与肺组织p53蛋白表达的调节,进而调节凋亡的发生.
关键词： 低氧诱导因子-1α P53 激光共聚焦扫描显微镜 肺组织 小鼠 -
大鼠肝硬化门腔静脉分流术后运动皮层和脊髓一氧化氮合酶阳性神经元的变化
目的研究大鼠肝硬化门腔静脉分流术后运动皮层和脊髓一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的变化.方法采用NADPH-d黄递酶组织化学法以及NOS荧光免疫组织化学技术结合激光共聚焦扫描显微镜方法.结果肝硬化门腔静脉分流术后运动皮层NOS和nNOS阳性细胞显著减少;脊髓NOS阳性细胞改变不明显.结论大鼠肝硬化门腔静脉分流可引起大脑皮层细胞的改变,NO可能参与了肝硬化门腔静脉分流术后对中枢神经系统的损害.
关键词： 肝硬化门腔静脉分流 大脑皮层运动细胞 一氧化氮合酶 激光共聚焦扫描显微镜 大鼠 -
变异链球菌生物膜结构观察
目的建立变异链球菌生物膜模型,用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察变异链球菌生物膜结构. 方法在盖玻片上分别形成6、12、18、24、48、72 h变异链球菌生物膜,将得到的各时段生物膜荧光染色后,用CLSM观察生物膜的断层扫描图像、生物膜厚度、每层红光绿光的面积,计算生物膜中细菌密度和活菌百分比,用软件处理扫描数据,得到生物膜的三维重建图像. 结果变异链球菌生物膜具有空间立体结构,形态多样,其中细菌密集,由死细菌和活细菌组成,还有丰富的基质和管道系统.24 h生物膜平均厚度大,生物膜内层、中间层的细菌密度相对较大,而外层较低,72 h内各时间段生物膜中活菌百分比由内往外逐渐增加. 结论变异链球菌生物膜有一定的厚度,具有三维立体空间结构,结构形态具有多样、不均质、开放的特点.
关键词： 变异链球菌 生物膜 激光共聚焦扫描显微镜 -
肥胖大鼠心肌细胞内游离钙浓度的变化
目的 探讨肥胖大鼠心肌细胞内钙调节机制.方法 60只健康雄性SD大鼠高脂饲料喂饲10周后,筛选出肥胖易感(OP)大鼠,基础组大鼠和肥胖抵抗(OR)大鼠,每组15只.测量各组大鼠体脂肪含量,检测血脂水平.采用酶法分离心肌细胞,Fluo-3/AM负载后采用激光共聚焦扫描显微镜观察各组大鼠心肌[Ca<'2+>]<,i>对KCl除极及咖啡因诱导的反性.结果 与基础组大鼠和OR大鼠比较,OP大鼠睾周脂肪、肾周脂肪、网膜脂肪、体脂比升高(P<0.05),血清总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平升高(P<0.05),心室肌[Ca<'2+>]<,i>的升高幅度降低(P<0.05).结论 肥胖心肌细胞[Ca<'2+>]<,i>在KCl除极后及咖啡因诱导后升高幅度发生改变,可能是肥胖者心律失常发生机制之一.
关键词： 肥胖 细胞内钙 心律失常 激光共聚焦扫描显微镜 大鼠 -
肝硬化患者肠道微生态的变化
目的:观察肝硬化(hepatic cirrhosis,HC)患者粪便中类杆菌、双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌、直肠真杆菌-球形梭菌和梭状芽胞杆菌,比较肝硬化患者与健康对照组之间肠道微生态的差异,以了解肝硬化患者肠道菌群的变化.方法:收集2010-03/2010-12遵义市第一人民医院消化科所收治的肝硬化患者29例,并以13例同期健康在校大学生作对照,收集粪便标本.经固定、玻片上涂片,荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH),激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)对细菌进行计数观察.应用秩相关检测法进行分析.结果:肝硬化患者与健康对照组比较粪便中双歧杆菌、类杆菌、真杆菌-直肠梭菌、肠球菌、大肠杆菌和梭状芽胞杆菌均较健康对照组显著减少(Z=-4.006、-4.34、-4.399、-4.174、-3.558、-3.95,均P＜0.01),6种细菌的比例发生改变,表现为双歧杆菌及类杆菌专性厌氧菌的数量减少,大肠杆菌、直肠真杆菌-球形梭菌、肠球菌和芽胞杆菌的数量增多(P＜0.05).细菌数量及比例之间的这种改变与肝硬化病因及肝硬化严重程度(Child-Pugh)分级无明显相关性(P＞0.05).结论:肝硬化患者肠道中6种细菌数量及构成比发生改变,肠道微生态的这种变化与肝硬化不同病因及疾病严重程度之间无明显相关性.
关键词： 肝硬化 肠道微生态 荧光原位杂交 激光共聚焦扫描显微镜 -
窝沟封闭继发类龋损体外实验模型的研究
目的 为评价窝沟封闭的防龋效果,建立以致龋微生物为基础的窝沟封闭后继发类龋损模型.方法 选择正畸减数上前磨牙24颗,随机分为非唾液污染组和唾液污染组.非唾液污染组按常规方法清洁、酸蚀牙面,进行窝沟封闭;唾液污染组在窝沟封闭前,用唾液污染牙面10s,再行窝沟封闭.2组样本经热循环处理后,悬吊于含变形链球菌血清c型、d型的轻唾培养液中,连续培养14d,用偏光显微镜观察2组封闭剂下继发类龋损的组织学变化;用激光共聚焦扫描显微镜观察荧光染料进入封闭剂下脱矿釉质内的量,测量封闭剂下龋损荧光面积、总荧光量、平均荧光量及封闭剂下龋损大深度,对2组封闭剂下继发类龋损发生的程度进行定量比较,采用独立样本t检验进行统计学分析.结果 偏光显微镜观察,唾液污染组多数釉质龋损延续至封闭剂下,形成继发类龋损.激光共聚焦扫描显微镜观察唾液污染组各参数均显著高于非唾液污染组(P＜0.01).结论 本研究所建立的体外实验模型可成功诱导窝沟封闭后继发类龋损的产生,提示在临床操作中,控制唾液污染能提高窝沟封闭防龋效果.
关键词： 窝沟封闭 继发类龋损 激光共聚焦扫描显微镜 偏光显微镜 -
粪肠球菌生物膜的药物敏感性研究
目的 建立体外粪肠球菌生物膜模型,评价10%氢氧化钙溶液和2%洗必泰溶液去除粪肠球菌生物膜的效果.方法 在玻片上形成4、8、12、24、48 h粪肠球菌生物膜,荧光染色后,采用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察;用10%氢氧化钙溶液和2%洗必泰溶液分别处理24 h生物膜3、10、30 min,采用CLSM观察;ANOVA方法进行统计分析.结果 粪肠球菌生物膜具有空间立体结构,在48 h内各时段生物膜中的活菌百分比由内向外逐渐增加;2%洗必泰溶液对粪肠球菌生物膜即时(3 min)杀菌效果优于10%氢氧化钙溶液,随着时间延长,氢氧化钙溶液杀菌效果同洗必泰溶液.结论 粪肠球菌生物膜能形成三维立体空间结构,具有多样、不均质、开放的特点,在48 h内各时段生物膜中的活菌百分比由内向外逐渐增加;10%氢氧化钙溶液和2%洗必泰溶液分别作用于24 h粪肠球菌生物膜30 min,能灭活生物膜中的大部分细菌.
关键词： 粪肠球菌 生物膜 激光共聚焦扫描显微镜 药物控制 -
利用共聚焦显微镜研究siRNA/CLDs复合物的胞内分布
研究siRNA在胞内的运输过程有助于阐明其在细胞质基质中的动力学性质及过程.本文报道了激光共聚焦扫描显微镜技术用于研究siRNA及其肽缀合物与胱氨酸骨架阳离子脂质体递送系统(siRNA/CLD)的胞内分布过程.发现siRNA在胞质内分布动力学与3'-单肽-siRNA缀合物/CLD递送系统的入胞途径紧密相关,其中具有较好抗肿瘤活性的3'-pAs-siRNA/CLD,具有较快的细胞摄取及溶媒体逃逸过程,并能在A375细胞中潴留较长的时间.该方法高效、可定量并可视化,不仅能够测定siRNA在胞内的浓度,也能够定量分析其与细胞亚结构的共定位关系,进一步可系统研究siRNA及其缀合物在胞质内的动力学分布过程.
关键词： siRNA/CLD复合物 溶酶体逃逸 胞质分布 激光共聚焦扫描显微镜 -
肥胖大鼠心律失常易感性的分析
目的 研究高脂饮食诱导肥胖易感(OP)大鼠心律失常易感性的发生机制.方法 高脂饲料喂饲60只健康雄性SD大鼠12周后,筛选出OP大鼠、基础组大鼠动物模型,二组分别为15只大鼠.实验结束后,处死动物,测量体脂肪水平,并收集血清,以检测血脂水平.采用酶法分离心肌细胞,Fluo-3/AM负载后采用激光共聚焦扫描显微镜观察各组大鼠心肌细胞内钙离子强度([Ca2+]i).同时取心脏组织常规抽提总RNA,采用含有468种miRNA的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 OP大鼠睾周脂肪、肾周脂肪、网膜脂肪、体脂比[(20.15±3.38)、(8.74±1.66)、(9.23±0.94)、(7.71±0.74)mmol/L]均显著高于基础组大鼠[(8.98 4±1.19)、(4.70±0.59)、(6.28±0.40)、(4.69 ±0.37)mmol/L],OP组与基础组比较差异有统计学意义(P<0.05);OP大鼠血清总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平[(1.26±0.04)、(0.58±0.10)、(0.51±0.04)mmd/L]显著高于基础组大鼠[(0.924±0.08)、(0.29±0.03)、(0.31±0.04)mmol/L],OP组与基础组比较差异有统计学意义(P<0.05);OP组大鼠心室肌细胞内游离钙离子荧光强度(247.96±20.03)明显高于基础组大鼠(174.25±23.13),OP组与基础组比较差异有统计学意义(P<0.05).与基础组相比,OP模型组的miRNA表达谱中明显差异表达的miRNA共有7个,其中有3个miRNA上调,4个miRNA下调.结论 肥胖大鼠miRNA的表达异常可导致心肌细胞内[Ca2+]i发生改变,可能是肥胖心律失常发生机制之一.
关键词： 肥胖 激光共聚焦扫描显微镜 细胞内钙 miRNA 心律失常 -
激光共聚焦扫描显微镜技术在脑卒中针刺机制中的应用进展
激光共聚焦扫描显微镜（ CLSM）作为一种非侵入性图像分析仪器，有标本制备简单、分辨率高、实时动态成像等特点，可清晰地对活体细胞进行无损伤性动态观察、空间定位、定量检测等。针刺疗法治疗脑卒中具有良好的临床疗效，其机制研究也越来越受到重视。 CLSM作为新一代的研究工具，也广泛应用于针刺机制的基础研究中，该文就 CLSM 技术在脑卒中针刺机制研究中的应用情况予以综述。
关键词： 脑卒中 激光共聚焦扫描显微镜 针刺 -
吗啡对培养海马神经元钙离子作用的机制研究
目的:研究吗啡对海马神经元[Ca2+]i影响的机制,为探索吗啡成瘾的神经生物学机制与可能的治疗途径.方法:荧光探针Fluo-4标记细胞内游离钙后,用激光共聚焦显微镜检测吗啡对大鼠原代培养海马神经元[Ca2+]i的影响.结果:吗啡急性刺激引起海马神经元[Ca2+]i升高,TOP不能阻断吗啡引起的细胞内[Ca2+]i增加,而naltrindole能阻断吗啡引起的细胞内[Ca2+]i反应;Thapsigargin预处理阻断吗啡诱导的细胞内[Ca2+]i增加,erapamil预处理不能完全抑制吗啡引起的细胞内[Ca2+]i增加;吗啡长时程作用后,海马神经元[Ca2+]i升高,加入纳络酮急性戒断后,不能阻断吗啡引起的细胞内[Ca2+]i升高,反而引起[Ca2+]i异常升高.结论:吗啡急性刺激引起的海马神经元内游离钙增加主要来源于δ2阿片受体介导的IP3敏感的钙库释放.
关键词： 吗啡 海马神经元 细胞内钙离子 阿片受体 激光共聚焦扫描显微镜 -
激光共聚焦扫描显微镜与多光子激光扫描显微镜之比较
激光共聚焦显微镜是80年代随着光学、视频、计算机等技术的飞速发展而诞生的新一代显微镜.
关键词： 激光共聚焦扫描显微镜 多光子激光扫描显微镜 -
黄体生成素及其受体在大鼠胰腺的免疫荧光定位
目的 观察黄体生成素(LH)及其受体(LHR)在SD大鼠胰腺的定位分布,以了解LH对胰腺的功能意义.方法 选取SD大鼠12只,雌雄不拘,经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后,用4％多聚甲醛灌流固定2h,取出胰腺组织置于300g/L蔗糖液中,用于双标记免疫荧光定位研究,在激光共聚焦扫描显微镜下观察.结果 胰腺部分外分泌腺细胞质、导管上皮细胞及部分胰岛细胞质LH反应阳性,小血管内皮细胞质呈LH弱阳性.部分胰岛细胞质呈LHR反应阳性,一些外分泌腺上皮细胞质呈LHR反应弱阳性,部分胰岛细胞及胰腺外分泌细胞质呈LH和LHR双阳性反应.结论 LH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用.
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芍药苷对白色念珠菌生物膜的作用
背景：研究证实中药赤芍有效成分对白色念珠菌有较好的抑制作用，但其单体芍药苷对白色念珠菌生物膜是否有抑制作用未见报道。目的：观察芍药苷对体外白色念珠菌生物膜的影响。方法：用RPMI-1640分别按2倍稀释法制备5个浓度梯度(4，2，1，0.5，0.25 g/L)的芍药苷溶液。用RPMI-1640稀释洗必泰为5个浓度梯度(2%，1%，0.5%，0.25%，0.125%)。采用琼脂扩散法检测不同浓度梯度芍药苷或洗必泰对白色念珠菌的抑菌直径。MTT法检测不同浓度洗必泰或芍药苷对白色念珠菌细胞黏附的作用，以及对白色念珠菌生物膜的抑制作用，并且利用激光共聚焦扫描显微镜和死菌活菌荧光染色技术相结合方法观察常态及药物作用下的白色念珠菌生物膜。结果与结论：洗必泰与芍药苷均有抑菌能力，抑菌环直径与药物浓度呈正相关；除2 g/L芍药苷组与1%，2%洗必泰组抑菌环直径无差异外，其余组间两两比较差异均有显著性意义。不同质量浓度芍药苷对白色念珠菌的细胞黏附都具有抑制作用，对白色念珠菌生物膜也具有抑制作用，且抑制率与药物质量浓度呈正相关。观察48 h时常态生物膜结构中大部分是活菌，有少量死菌存在；随芍药苷质量浓度改变白色念珠菌生物膜中死菌比例不断增高，其抑菌活性相对弱于洗必泰。表明芍药苷对体外白色念珠菌生物膜有较明显的抑制作用。
