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红花多糖抗肿瘤活性及对T739肺癌鼠CTL,NK细胞杀伤活性的影响
目的:研究红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)体内外的抗肿瘤活性及对荷瘤鼠CTL,NK细胞杀伤活性的影响.方法:利用昆明种小鼠(KM)制备小鼠肉瘤S180的体内移植性肿瘤模型,腹腔连续给予SPS 10 d,称肿瘤质量;利用T739小鼠制备小鼠肺腺癌LA795的体内移植性肿瘤模型,腹腔连续给予SPS 10 d,称肿瘤质量,测定CTL及NK细胞杀伤活性;用台盼蓝拒染法观察SPS对3种肿瘤细胞的体外抗肿瘤作用.结果:SPS 40 mg·kg~(-1)对小鼠肉瘤S180的抑制作用明显,抑瘤率为51.33%(P<0.01);对小鼠肺癌LA795也有抑制作用,使肿瘤体积明显减小为3.29 mm~3(P<0.05);能明显提高荷瘤小鼠脾CTL细胞、NK细胞杀伤活性(P<0.05).结论:SPS具有抗肿瘤作用,其作用机制可能与增强CTL,NK细胞的细胞毒活性有关.
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白介素21对树突状细胞诱导的CTL抗白血病作用的影响
本研究探讨白介素21(IL-21)对树突状细胞(DC)诱导的CTL抗白血病的体外作用.以不同细胞因子诱导培养急性白血病(AL)患者缓解期外周血单个核细胞产生DC,自体AL细胞RNA作为抗原负载DC,与自体T淋巴细胞共培养诱导白血病特异性CTL产生;用LDH释放法检测CTL杀伤自体AL细胞的作用,并检测CTL产生IFN-γ和TNF-α的变化.实验共分2组:实验组,在DC-CTL共培养过程中加用IL-21(200 ng/ml);对照组,不加IL-21.同时对IL-21单独作用培养后成熟DC,检测其表面抗原表达变化以及诱导同种混合淋巴细胞反应能力.结果表明:对照组和实验组的CTL产生率分别为:(56.73±10.21)%,(73.43±18.01)%(P<0.01);培养上清中IFN-γ和TNF-α分别为:(154.91±67.20)ng/L,(310.62±141.15)ng/L(P<0.01)和(8.77±5.09)μg/L,(15.25±6.56)μg/L(p<0.01).在效靶比为20∶1时,两组对自体AL细胞的杀伤作用分别为(50.22±5.07)%,(75.38±9.47)%(P<0.01);IL-21作用后的成熟DC的CD1a、CD83、CD86、CD80和HLA-DR表达没有明显变化;诱导同种混合淋巴细胞反应能力亦没有明显不同.结论:IL-21可促进DC诱导的CTL增殖、增加IFN-γ和TNF-α产生从而增强其抗白血病作用;IL-21对成熟DC表面抗原表达及其免疫功能无明显影响;提示IL-21在白血病免疫治疗中发挥一定的作用,具有潜在的临床应用价值.
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海洋真菌多糖YCP对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响
目的研究海洋真菌多糖(YCP)对荷瘤小鼠的抑瘤作用及对其免疫功能的影响.方法采用小鼠Lewis肺癌移植瘤和裸小鼠人肺癌A-549移植瘤模型,检测YCP对荷瘤小鼠的瘤质量、体重的影响及其相对肿瘤增殖率T/C.以MTT法检测YCP对Lewis肺癌细胞体外增殖的影响.以荷瘤小鼠的吞噬指数(k)及吞噬系数(α)值、自然杀伤细胞(NK)活性和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性为指标,观察YCP对免疫功能的影响.结果YCP(9、3 mg/kg)iv给药可显著抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长(P＜0.01),但对裸小鼠人肺癌A-549移植瘤生长无抑制作用.YCP对Lewis肺癌细胞体外增殖无抑制作用.YCP(9、3 mg/kg)iv给药可显著提高S180荷瘤小鼠的k值(P＜0.01、0.05).YCP(9、3 mg/kg)iv给药可明显提高Lewis肺癌小鼠NK细胞和CTL细胞的杀伤活性(P＜0.01、0.05).结论 YCP可显著提高荷瘤小鼠的免疫功能,对小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长有显著抑制作用.
关键词： 海洋真菌多糖(YCP) NK细胞 CTL细胞 Lewis肺癌 -
结肠癌患者化疗／热化疗前后CD4＋CD25＋T细胞和CTL细胞的变化及临床意义
目的：探讨结肠癌患者化疗/热化疗前后CD4＋CD25＋T细胞和CTL的变化及临床意义。方法选取68例结肠癌患者，分为化疗组34例和热化疗组34例，患者治疗前后采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞中CD4＋CD25＋T细胞的表达，同时检测患者CTL细胞的功能，对比观察2组患者的检测结果，分析和探讨结肠癌患者化疗/热化疗前后 CD4＋CD25＋T细胞和CTL的变化及临床意义。结果化疗组患者治疗前后CD4＋CD25＋T细胞水平分别为（19±9）和（19±3），无显著性差异（P＞0．05）；热化疗组患者治疗前后分别为（20±7）和（15±8），有显著性差异（ P＜0．05）；热化疗组患者治疗后的CD4＋CD25＋T细胞水平明显低于化疗组（P＜0．05）。 CTL细胞杀伤活性化疗组患者治疗前后分别为（10．4±2．2）和（15．1±4．4），热化疗组患者治疗前后分别为（10．9±2．7）和（17．5±3．8），2组比较治疗前后比较均有显著性差异（P均＜0．05）；热化疗组患者治疗后的CTL细胞杀伤活性显著优于化疗组（P＜0．05）。结论热化疗可明显改善结肠癌患者的免疫抑制状态，增强患者CTL细胞的杀伤活性，可提高患者的临床治疗效果，改善预后，值得临床推广应用。
关键词： 结肠癌 化疗 热化疗 CD4 +CD25 +T细胞 CTL细胞 -
化疗联合热疗对直肠癌患者治疗前后CD+4CD+25T细胞和CTL细胞的影响
1995年,Sakaguchi等首次分离获得具有免疫调节作用的CD+4CD+25T细胞,称为调节性T(regulatory T,Treg)细胞[1].研究表明,CD+4CD+25T细胞是存在于正常机体内的一类同时具有免疫无能性和抑制性的调节性T淋巴细胞,通过分泌抑制性细胞因子和T-T细胞接触性抑制,对抗原提呈细胞(APC)和免疫效应细胞发挥独特的免疫调节功能;细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL),对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用,与自然杀伤细胞构成机体的重要防线,以上2种细胞均与肿瘤的发生、发展密切相关[2].
关键词： 直肠肿瘤 热疗 化疗 CD4+CD25+T细胞 CTL细胞 -
肿瘤冻融抗原协同IL-2诱导的人脐血CTL细胞体外扩增及杀瘤活性的研究
目的观测经肿瘤冻融抗原体外诱导的脐血细胞毒T淋巴(Cytotoxic T Lymphayte,CTL)细胞体外扩增及杀瘤活性.方法以肿瘤冻融抗原协同IL-2体外诱导脐血干细胞,使其中的CD8+细胞得以扩增,获得CTL细胞,观测其表型变化及杀瘤活性.结果CD4+和CD8+T淋巴细胞表达呈增高趋势,但无明显统计学差异;CTL细胞杀瘤活性远高于LAK细胞,且可长期存活.结论CTL细胞可作为过继免疫疗法进行深入应用研究.
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氩氦冻融的肺癌细胞对人外周血单个核细胞免疫功能的影响
[目的]观察氩氦冻融的小细胞肺癌细胞NCI-H446对正常人外周血单个核细胞免疫功能的影响.[方法]分离正常人外周血单个核细胞,与氩氦冻融的小细胞肺癌细胞NCI-H446混合培养,设一个空白对照组,培养过程中隔天加入IL-2 10U,分别在第3、7、14d检测培养上清液中IL-12、IL-10含量及NK细胞、CTL细胞的杀伤活性.[结果]氩氦冻融的肺癌细胞NCI-H446与PBMC混合培养后,第3、7d时,培养上清液中IL-12含量分别为71.8±19.1pg/ml,106.2±13.6pg/ml,对照组IL-12含量为38.5±8.4pg/ml,40.8±8.3pg/ml,试验组较对照组明显升高(P＜0.05),在第14d时试验组与对照组IL-12表达相当.IL-10的表达在试验组与对照组之间始终未发现明显差异.试验组NK细胞、CTL细胞的杀伤活性在14d内均明显高于对照组(P＜0.05).[结论]氩氦冻融的肺癌细胞可以上调PBMC对IL-12的表达,而对IL-10的表达无影响,同时可明显增强NK细胞和CTL活性.
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IL-21 DNA微球疫苗的制备及其对CTL细胞抗肿瘤作用的影响
目的 探讨聚丙烯酸树脂包裹白介素21 DNA核酸疫苗免疫Babl/c小鼠的作用,检测小鼠CTL细胞抗daudi细胞的作用.方法 采用乳剂—溶剂挥发法制备微球疫苗,分组免疫BALB/c小鼠,将制备所得的抗Daudi细胞肿瘤特异性CTL细胞作用于Daudi细胞,通过MTT法计算Daudi细胞增值抑制率,流式细胞仪测量Daudi细胞凋亡率,检测CTL细胞的杀伤作用.结果 光学显微镜观察微球疫苗粒径约为(50.6±12.2)μm,且微球疫苗组对Daudi细胞的杀伤作用明显高于核酸疫苗单独免疫组.结论 聚丙烯酸树脂能有效地保护核酸疫苗,并能提高其在细胞内的表达,为肿瘤疫苗的后续研究提供了思路和理论依据.
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解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠外周CTL、 Treg细胞的影响研究
目的 明确解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠外周CTL细胞(CD3+ CD8+T细胞)及Treg细胞(CD4+ CD25+T细胞)的影响.方法 以D-氨基半乳糖(D-GalN,600mg/kg)联合内毒素脂多糖(LPS,20μg/kg)一次性腹腔注射构建肝衰竭大鼠模型,解毒化瘀颗粒在造模前5天开始预处理,成模后24h处死各组大鼠,分离外周单核细胞,CD3 APC、CD8 FITC、CD25APC、CD4 FITC标记,运用流式细胞仪检测.结果 CTL细胞比例在模型组大鼠中显著增高,Treg细胞比例降低,二者与空白组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);经解毒化瘀颗粒干预治疗,治疗组大鼠外周CTL细胞比例下降,Treg细胞比例上升,二者分别与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 解毒化瘀颗粒可通过调控并平衡免疫反应发挥治疗效应,调控免疫反应可作为中医“解毒”的科学内涵之一.
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超抗原SEB诱导人CTL细胞杀瘤条件优化
目的 通过正交设计优化CTL细胞佳杀瘤条件.方法 补体裂解法分离CTL细胞,MTT法测定CTL细胞杀瘤活性,正交设计选择CTL细胞佳杀瘤条件.结果 在SEB浓度为10-6g/ml,SEB作用CTL细胞时间为24h,CTL细胞与肿瘤细胞之比为20∶1情况下CTL细胞杀瘤活性强.结论 CTL细胞佳杀瘤条件组合为SEB10-6g/ml,作用时间24h,效靶比20∶1.
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卡介苗体外对急性淋巴细胞性白血病患儿细胞毒性T淋巴细胞杀伤HL-60细胞效应的影响
目的 探讨卡介苗(BCG)体外对急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿外周血细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤HL-60细胞效应的影响.方法 应用Ficoll-Hypaque法分离ALL患儿(白血病组)和健康儿童(对照组)的外周血单个核细胞,在白介素-2(IL-2)、植物血凝素(PHA)和BCG作用下诱导成CTL细胞；应用流式细胞仪测定CD3、CD3 +CD4+、CD3+ CD8+比例变化；应用MTT法检测CTL对HL-60细胞的杀伤力.结果 培养前2d,对照组和白血病组CTL细胞数量及体积均无明显变化,第3天开始两组细胞均开始增殖,体积变大,6～10 d达高峰；培养至第10天时,加入BCG的白血病组和对照组细胞数量分别较无BCG的白血病组和对照组增多；白血病组CD3+ CD8+比例明显高于对照组,经BCG作用后两组CD3+ CD8+比例均明显升高；白血病组CTL对HL-60细胞的杀伤力明显低于对照组.结论 BCG可协同IL-2、PHA体外促进CTL细胞增殖并提高其对HL-60细胞的杀伤力.
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乳酸杆菌增强树突状细胞诱导的CTL细胞抗宫颈癌移植瘤作用
目的 探讨乳酸杆菌在树突状细胞( dendritic cell,DC)诱导的CTL细胞抑制宫颈癌移植瘤中的作用及其机制.方法 30只雌性裸鼠移植瘤模型采用单纯随机抽样分为3组,①Lb-DC疫苗组:瘤旁注射乳酸杆菌宫颈癌细胞冻融抗原致敏的CTL细胞(1×106/200μl)；②DC疫苗组:瘤旁注射官颈癌细胞冻融抗原致敏的CTL细胞(1×106/200μ1)；③对照组:注射PBS液200μl.FCM检测肿瘤细胞凋亡率以及Fas膜蛋白的含量；免疫组化法观察移植瘤Survivin蛋白的表达.结果 Lb-DC疫苗组移植瘤治疗后体积明显小于治疗前(P＜0.01),抑瘤率为85.6%；DC疫苗组可明显抑制瘤体的生长,抑瘤率为57.4%.Lb-DC疫苗组肿瘤细胞凋亡率及Fas膜蛋白含量均高于DC疫苗组与对照组(P＜0.0l).Survivin蛋白在肿瘤细胞中的表达:Lb-DC疫苗组大部分为阴性；对照组大部分为强阳性,DC疫苗组为弱阳性.结论 乳酸杆菌辅佐DC疫苗可以明显抑制裸鼠宫颈癌HeLa移植瘤的生长,通过上调Fas膜蛋白,下调Survivin蛋白增强DC疫苗促进肿瘤细胞凋亡.
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肝细胞肝癌患者外周血CD8+ T淋巴细胞凋亡相关机制探讨
目的:探讨肝细胞肝癌患者外周血CD8 +T淋巴细胞(CTL细胞)凋亡的相关机制及临床意义.方法:收集30例健康体检者及60例不同临床分期肝细胞肝癌患者外周血,应用流式细胞仪检测分析 CTL细胞相对百分比、凋亡情况及CTL细胞表面Fas(CD95)表达情况.结果:肝细胞肝癌患者外周血CTL细胞相对百分比含量高于健康体检者[(26.4% ± 9.2%)vs (19.7% ± 4.7%),P＜0.05].肝细胞肝癌患者外周血 An-nexinV+CTL细胞凋亡率高于健康体检者[(25.3% ± 6.5%)vs (12.1% ± 6.5%),P＜0.05].肝细胞肝癌患者Fas+CTL细胞含量高于健康体检者[(62.2% ± 18.5%)vs (42.6% ± 16.5%),P＜0.05].Fas表达与CTL细胞的凋亡呈正相关.不同TNM分期患者CTL细胞凋亡能力不同,随着病情程度恶化,细胞凋亡水平增加[(27.7% ± 5.9%)vs (20.6% ± 5.1%),P＜0.001].结论:肝细胞肝癌患者外周血中CTL细胞的百分比增加,提示在肿瘤的发生发展过程中机体存在抗肿瘤免疫效应,但是基于Fas/FasL途径的CTL细胞凋亡比例增加,可能是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制.
