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土槿乙酸诱导HL60细胞凋亡及其与半胱氨酸蛋白酶-3活化的关系
目的探讨土槿乙酸(PLAB)的抗癌活性及其机制.方法对用不同浓度PLAB处理的HL60细胞,或半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制剂DEVD-fmk预处理的HL60细胞.采用MTT法检测HL60细胞抑制增殖作用,采用Hoechst33342/PI双荧光活细胞染色和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡,CPP32 colorimetric kit检测caspase-3酶活性.结果 PLAB以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的生长,其IC50值为1 μmol/L.PLAB诱导HL60细胞死亡的形式以细胞凋亡为主,且该凋亡可被caspase-3抑制剂所遏制.PLAB诱导的caspase-3酶的活化与剂量和作用时间呈依赖关系.结论 PLAB能有效诱导HL60细胞凋亡,该凋亡过程伴有caspase-3的活化.
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土槿乙酸对葡萄球菌生物膜形成的抑制作用
目的:研究中药活性成分土槿乙酸对葡萄球菌生物膜形成的抑制作用.方法:采用肉汤培养法检测土槿乙酸对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌浮游细菌生长的影响；采用分光光度计检测法分析土槿乙酸对上述二菌株生物膜形成的影响.结果:30 μg/ml土槿乙酸对两株葡萄球菌浮游细菌数量没有明显影响,但同样浓度下土槿乙酸能明显抑制细菌形成生物膜.金黄色葡萄球菌生物膜试验组与对照组A550值分别为1.03±0.12和0.26±0.03(P ＜0.05),表皮葡萄球菌生物膜相应数值为1.36±0.08和0.41±0.05(P＜0.05),有统计学差异.结论:尽管土槿乙酸不能直接杀灭葡萄球菌,但对其生物膜形成有抑制作用,为进一步开发中药抗感染药物奠定基础.
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土槿乙酸增强9顺式维甲酸对白血病细胞生长的抑制作用
目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cis RA)对白血病细胞生长的影响.方法 应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术和Hoechst33342/PI染色分析HL-60细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR检测PPARγ和RXRα mRNA表达.结果 HL-60细胞系上有PPARγ和RXRα的表达,经配体联合作用后能明显抑制细胞生长,呈剂量依赖关系;细胞出现明显凋亡形态学改变和亚G1峰;PPARγ和RXRαmRNA表达明显增强.结论 PLAB能显著增强9-cis RA对HL-60细胞的生长抑制作用,其机制与凋亡诱导效应有关.
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土槿乙酸抗肿瘤作用研究进展
0 引言土槿皮为松科植物金钱松(pseudolarix kacmpferi gorden)的于燥根皮或近根树皮,其性温、味辛、有毒,归肺、脾经.土槿皮具有杀虫、止痒的功效,常用于治疗癣症.目前,已从土槿皮中分离到20余种土槿酸,其中土槿乙酸(pseudolarix acid B,PAB)是主要成分之一,具有较强的细胞毒作用[1].PAB是二萜酸化合物,分子式为C23H28O8,结构式见图1.现代药理实验研究表明,PAB具有抗肿瘤[2]、抗生育[3]、抗血管生成[4]、抗真菌[5]等作用,其衍生物也具有较强的抗肿瘤作用[6-10].土槿乙酸类药物作用广泛,本文主要综述土槿乙酸抗肿瘤作用的研究进展及其可能的作用机制.
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土槿皮乙酸阻滞HepG2肝癌细胞于G2/M期并抑制其侵袭和迁移
目的 研究土槿乙酸(PAB)阻滞HepG2肝癌细胞周期并抑制其侵袭转移的机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察PAB对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对HepG2肝癌细胞周期的影响;免疫荧光细胞化学染色法检测PAB对HepG2肝癌细胞内α微管蛋白(α-tubulin)聚合形态及表达的影响;TranswellTM小室侵袭实验和划痕愈合实验检测PAB对肝癌HepG2细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测细胞内α-tubulin、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平.结果 PAB可剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖并将细胞阻滞于G2/M期;PAB可显著改变微管蛋白聚合态使其表达明显减弱,PAB处理的HepG2细胞侵袭和迁移能力明显降低;细胞内α-tubulin、MMP-9蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平增加.结论 PAB可以通过下调α-tubulin水平影响其聚合,将HepG2细胞周期阻滞于G2/M期,抑制HepG2肝癌细胞增殖,通过下调细胞骨架α-tubulin、MMP-9,上调E-cadherin,抑制HepG2肝癌细胞的侵袭和迁移.
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土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用
目的 初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制.方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5 μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理.流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB (NF-κB)信号通路相关信号分子水平.结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平.下调NF-κBp65、pNF-κB p65、IKKα、IKKβ、pIKKα/β、IκBα、pIκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期.GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用.结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关.
