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过氧化物酶体增殖物激活受体γ对小鼠缺血再灌注损伤后肝细胞癌血行转移的影响
目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对小鼠缺血再灌注损伤后肝细胞癌血行转移的影响及其机制.方法 将160只小鼠随机分为4组,分别为假手术组、对照组、罗格列酮组,罗格列酮+ PPARγ阻断剂GW9662组(R+GW组).建立小鼠肝脏部分缺血再灌注并肝癌细胞门静脉转移模型,比较各组ALT水平,MMP-9、NF-κB、PPARγ表达情况,及肝脏受侵犯面积(HRA)和小鼠存活时间.结果 (1)术后中位生存时间:假手术组16.3d、R组12.1d,对照组9.6d,R +GW组8.7d.(2)对门静脉转移的影响:与对照组左肝叶(缺血肝叶)比较,假手术组左肝叶的肝组织受侵犯面积(HRA)明显减少(29.1％比13.2％,P＜0.05);对照组左肝叶肿瘤负荷较R组高(29.1％比13.0％,P＜0.05).(3)血清ALT水平:肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)2、8、24 h后,对照组、R组、R+GW组ALT水平分别为(1 134.2±320.5) U/L、(1 017.3±365.9) U/L、(1 344.0 ±304.3)明显高于假手术组(20.6 ±7.8)U/L,差异有统计学意义(均P＜0.05).再灌注8、24 h后,R+GW组ALT水平[(4 101.7±462.2)U/L、(3 730.8±582.7) U/L]明显高于对照组[(3649.1±440.1)U/L、(2 226.7 ±442.7)U/L]和R组[(1 691.9±398.6)U/L、(1 109.2 ±237.4) U/L],均P＜0.05.(4)MMP-9表达:再灌注8h,对照组中MMP-9表达水平远高于R组[(41.3±10.7)比(4.7±1.1),P＜0.05)].R+GW组MMP-9表达水平明显高于对照组和R组[(166.9±7.9)比(41.3±10.7)和(4.7±1.1),均P ＜0.05].(5)PPARγ及NF-κB表达情况:再灌注2h后,对照组PPARγ出现表达,8h后达到高峰,24 h后表达明显下降.而NF-κB表达随着时间延长而升高,24 h达到高峰.R+GW组PPARγ表达特点与对照组相似,NF-κB在3个时间点均出现高表达.R组在再灌注2h时PPARγ即有明显表达,24 h达到高峰;而NF-κB在再灌注2h后出现弱表达.结论 罗格列酮能够降低小鼠HIRI并肝细胞癌细胞血行转移.这或与经罗格列酮处理后,PPARγ表达上调抑制NF-κB表达、导致MMP-9生成减少有关.
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宫颈癌组织中PPARγ与HIF-1α的表达及相关性研究
目的 研究宫颈癌组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其相关性.方法 采用免疫组织化学SABC法,检测40例宫颈癌组织、10例宫颈炎组织和10例非典型增生宫颈组织切片中的PPARγ与HIF-1α的表达.结果 PPARγ和HIF-1α在宫颈鳞癌组织、宫颈炎组织和宫颈非典型增生组织中均有表达,且3组间比较差异具统计学意义(P < 0.05).PPARγ和HIF-1α分别与宫颈癌的临床分期、放疗敏感性和骨、肺、肝等远处转移有关(P < 0.05);40例宫颈癌组织PPARγ表达与HIF-1α表达进行相关性分析,相关系数为r=-0.345,P=0.029 < 0.05,呈明显负相关.结论 宫颈癌组织中PPARγ和HIF-1α的表达均显著增高,对判断宫颈癌预后及指导临床治疗有重要的参考意义.
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小檗碱抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及其与过氧化物酶体增殖物激活受体γ的关系
目的 探讨小檗碱对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生长的影响及其与过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)的关系,以评价其在乳腺癌治疗中的应用潜力.方法 采用MTT法检测小檗碱对MDA-MB-231细胞的生长抑制效应;TUNEL法检测细胞凋亡;联合PPARγ拮抗剂GW9662,分析小檗碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响与PPARγ受体的关系;实验同时采用罗格列酮作为阳性药进行平行比较分析.结果 小檗碱呈量-效和时-效关系抑制MDA-MB-231细胞生长,24 h的半数抑制浓度(IC_(50))为0.21μmol/L;小檗碱诱导MDA-MB-231细胞凋亡作用随药物浓度的增加而增强;PPARγ受体拮抗剂不能逆转小檗碱对细胞增殖的抑制作用.结论 小檗碱可明显抑制MDA-MP-231细胞生长,但与罗格列酮不同,其作用不通过PPARγ受体介导;小檗碱诱导MDA-MB-231细胞凋亡的效应较罗格列酮更为显著;小檗碱可望成为治疗乳腺癌的有效药物.
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姜黄素抗血吸虫病肝纤维化及其机制的实验研究
目的 探讨姜黄素抗血吸虫病肝纤维化的作用及可能机制.方法 小鼠随机分为4组:对照组、感染模型组、吡喹酮治疗组和姜黄素治疗组,除对照组外,各组建立血吸虫病肝纤维化小鼠动物模型,用实时荧光定量PCR反应观察小鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达.应用HE染色,免疫组化法及多媒体病理图文定量分析,观察各组小鼠肝脏的病理改变及转化牛长因子β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化.结果 姜黄素可显著减轻肝脏纤维组织增生.感染模型组及吡喹酮治疗组PPARγmRNA表达较对照组及姜黄素治疗组显著减弱(P<0.05);姜黄素治疗组TGF-β1,α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平均明显低于吡喹酮治疗组和感染模型组(P<0.05).结论 姜黄素有明显的抗日本血吸虫病肝纤维化作用,其抗纤维化机制与其激活PPARγ的表达、抑制肝星状细胞(HSC)表达α-SMA及分泌TGF-β1,并减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成有密切关系.
关键词： 姜黄素 肝纤维化 血吸虫病 过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) -
MODS 患者外周血单个核细胞内 PPARγ与 NF －κB的表达和关系
目的：探讨多器官功能障碍综合征（ MODS）患者外周血单个核细胞（ PBMCs）中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ PPARγ）与核转录因子－κB （ NF－κB）的表达和关系。方法选择我院ICU和急诊科MODS患者60例，分为3组，每组20例，MODS 1组（ APACHEⅡ评分0～10分），MODS 2组（ APACHEⅡ评分11～20分），MODS 3组（ APACHEⅡ评分＞20分）及正常对照组（20例健康对照者）为研究对象。确诊后分别于1、3、6 d取静脉血，采用逆转录聚合酶链反应（ RT－PCR）检测PPARγ、NF－κB的表达与同期正常对照组进行比较分析。结果①正常组PBMCs中PPARγ、NF－κBp65表达量均较少。与正常组比较，MODS 1组PPARγ、NF－κBp65表达均明显增高，随治疗时间推移，PPARγ表达明显增高（ P＜0．05）；而NF－κBp65表达则明显降低（ P＜0．05）。 MODS 2组、MODS 3组PPARγ表达低于正常对照组，随着治疗时间增加，PPARγ明显下降（P＜0．05）；NF－κBp65表达高于正常对照组，随着治疗时间增加，NF－κBp65明显升高（P＜0．05）。②相关结果分析表明，PBMCs中PPARγ与NF－κBp65表达在MODS 1组、MODS 2组、MODS 3组呈负相关性（MODS 1组：r＝－0．726，P＜0．01；MODS 2组：r＝－0．736，P＜0．01；MODS 3组：r＝－0．721，P＜0．01），在正常对照组无明显相关性（r＝0．183，P＞0．05）。结论PPARγ可能通过抑制NF－κB的表达对MODS患者起到保护作用，可作为MODS病情判断重要指标和治疗潜在靶点。
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大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响
目的 研究大豆苷原( daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响.方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2％ FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化.加入浓度均为0.1μtmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用.为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用.结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达.0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44％和38％ (P＜0.05),下调ERβ蛋白水平50％ (P＜0.05)和31％ (P＜0.05),上调PPARγ 74％和78％(P＜0.05).ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4)；GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节.在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0％～29.6％ (P＜0.05)增强至74.0％～82.8％(P＜0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失.结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用.DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一.
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ与代谢综合征的研究进展
代谢综合征(Metabolic Syndrome,MS)是以腹部肥胖或超重、胰岛素抵抗、糖调节异常、高血压、血脂异常为主要内涵,以多种代谢性疾病同时存在为临床特点的一组严重影响人类健康的临床症候群.
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蒿甲醚对Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长抑制及机制探讨
目的 探讨蒿甲醚对Lewis肺癌小鼠移植瘤的作用及其相关机制.方法 建立Lewis肺癌小鼠模型,40只C57小鼠随机分为4组:生理盐水组(NS组)、蒿甲醚组(ARE组)、PPARγ特异性抑制剂组(GW9662组)、ARE+GW9662组(联合组).计算抑瘤率,评估蒿甲醚对肺癌移植瘤生长的影响,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法及RT-PCR法检测各组瘤组织中PPARγ、NF-κB、Caspase-3的表达.结果 (1)抑瘤率:ARE组64.51％,联合组45.14％,GW9662组与NS组比较瘤重差异无统计学意义(P=0.128),但平均瘤重有减小趋势;(2)蒿甲醚单药组细胞凋亡率为(13.90％±0.94％),联合组的细胞凋亡率为(7.74％±0.59％),生理盐水组细胞凋亡率为(3.80％±0.57)％;(3)Western blot:PPARγ蛋白:ARE组上调明显;NF-κB蛋白:ARE组明显下调;(4)RT-PCR:PPARγ mRNA及NF-κBmRNA表达水平与蛋白表达水平一致;Caspase-3在各组的表达未发现明显的特异性;结论 蒿甲醚可抑制Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长,其机制是通过激活PPAR γ调控NF-κB的表达下调,进而促进肿瘤细胞凋亡.
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原儿茶酸调控PPARγ通路对小鼠胆总管梗阻肠屏障损伤的保护作用
目的:研究原儿茶酸对小鼠胆总管梗阻肠屏障损伤的保护作用及作用机制.方法:构建小鼠胆总管结扎(BDL)术继发小肠屏障损伤模型.将小鼠随机分为假手术组、模型组、模型+原儿荼酸低、中、高剂量(20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg)组,各给药组于术前2天给至术后5天腹腔注射相应剂量原儿茶酸.第5天末处死小鼠,检测小肠形态学、小肠PPARγ通路相关氧化应激和细胞凋亡指标及全身炎症指标;利用Western blot检测小肠PPARγ、Occludin和Bcl-2蛋白表达.结果:模型组小鼠较对照组病理损伤评分显著升高,血清TNF-α、IL-6和TB显著升高,小肠组织SOD、GSH、GSH-Px降低,MDA升高;小肠细胞凋亡显著.原儿茶酸腹腔注射原儿荼酸20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg组可不同程度改善上述指标变化,并呈剂量依赖趋势.模型组较对照组小肠PPARγ、Ocdudin、Bcl-2表达降低;原儿茶酸处理组较模型组可显著提升上述蛋白在小肠组织中的表达.结论:原儿茶酸能在小鼠胆总管梗阻肠屏障损伤中发挥保护作用,其机制可能与提高小肠PPARγ表达,减轻小肠组织的氧化应激和细胞凋亡相关.
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罗格列酮通过抑制肠系膜脂肪组织炎症改善三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠结肠炎
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎小鼠的治疗作用及可能机制.方法 选取雄性BALB/c小鼠20只建立TNBS结肠炎模型,造模成功后随机分为罗格列酮处理组及模型组,每组10只.罗格列酮处理组给予罗格列酮灌胃(0.2 mL,[20 mg/(kg·d)]),模型组给予生理盐水(0.2 mL/d)灌胃.处理6周后,处死所有小鼠.采用炎症性肠病疾病活动度指数(DAI)及HE染色结合Spencer结肠炎组织学评分评估两组小鼠肠道炎症程度及组织学改变,ELISA检测肠黏膜白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10水平及肠系膜脂肪组织IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平;脂肪组织HE染色后200倍光镜下拍照依据比例尺计算脂肪细胞直径;免疫组织化学染色法检测小鼠肠系膜脂肪组织F4/80阳性巨噬细胞浸润数量、脂肪细胞成熟标志物外周蛋白(peripherin)、脂连蛋白(adiponectin)及瘦素(leptin)水平.Western blot法检测小鼠肠系膜脂肪组织核因子κB (NF-κB)和信号通路中的NF-κBp65、磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)、磷酸化的NF-κB抑制蛋白(p-IκB)及磷酸化的IκB激酶(p-IKK)的蛋白水平.结果 罗格列酮处理后第5及6周,小鼠DAI评分显著低于模型组.同时,处理组小鼠肠黏膜IL-1β及TNF-α水平显著低于模型组,而IL-10水平显著高于模型组.与模型组小鼠相比,罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪细胞直径及脂肪细胞成熟标志物perilipin水平均显著高于模型组.同时,罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪组织巨噬细胞浸润数量及炎症介质IL-6、MCP-1水平均显著低于模型组.罗格列酮治疗显著促进处理组小鼠肠系膜脂肪细胞adiponectin的表达,而抑制leptin的水平.罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪组织NF-κBp65、p-NF-κBp65、p-IKK及p-IκB蛋白水平均显著低于模型组.结论 罗格列酮可显著抑制TNBS模型小鼠肠道炎症,可能与抑制肠系膜脂肪组织NF-κBp65通路有关.
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在DF1鸡胚成纤维细胞过表达KLF2对鸡PPARγ和C/EBPα启动子活性的调控
目的 研究过表达Krüppel样因子2(KLF2)对鸡过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)启动子活性的影响.方法 以DF1鸡胚成纤维细胞为材料,通过细胞培养和荧光素酶报告基因技术研究过表达KLF2对鸡PPARγ基因6个不同长度启动子和鸡C/EBPα基因5个不同长度启动子活性的影响.结果 过表达KLF2显著抑制鸡PPARγ启动子(-1978/-82、-1513/-82、-1254/-82和-1019/-82)的活性,但对PPARγ启动子(-513/-82和-320/-82)的活性无显著影响.过表达KLF2对PPARγ启动子(-1513/-82和-1254/-82)活性的抑制能力显著强于对PPARγ启动子(-1978/-82和-1019/-82)活性的抑制能力.过表达KLF2抑制C/EBPα启动子(-1863/+ 332)活性,促进C/EBPα启动子(-1318/+ 332、-891/+ 332、-538/+ 332和-123/+ 332)的活性,并且过表达KLF2对C/EBPα启动子(-1318/+ 332、-891/+ 332、-538/+ 332和-123/+ 332)活性的促进能力无显著差异.结论 过表达KLF2对鸡不同长度PPARγ启动子和C/EBPα启动子的调控作用不完全相同.
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土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用
目的 初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制.方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5 μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理.流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB (NF-κB)信号通路相关信号分子水平.结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平.下调NF-κBp65、pNF-κB p65、IKKα、IKKβ、pIKKα/β、IκBα、pIκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期.GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用.结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关.
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吡格列酮通过上调PPARγ降低创伤性脑损伤大鼠脑组织炎性细胞因子的水平
目的 观察吡格列酮对创伤性脑损伤(TBI)大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA的表达影响及量效关系.方法 72只SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、对照组、(0.5、1.0、10.0) mg/kg吡咯列酮组,每组各12只.改良Feeney法制作TBI模型,假手术组只开孔不进行打击处理,治疗组按体质量分别给予(0.5、1.0、10.0)mg/kg吡咯列酮治疗,对照组和假手术组给等量安慰剂.致伤24、48 h后,采用反转录PCR检测脑损伤部位组织PPARγ、 TNF-α、IL-6的mRNA水平.结果 损伤24 h后,各吡格列酮组PPARγ mRNA表达量显著上调,不同剂量吡咯列酮组间PPARγ mRNA表达量差异显著,有剂量依赖性;损伤后治疗组TNF-α mRNA的表达量显著下调,24 h后,与0.5 mg/kg组相比,(1.0、10.0) mg/kg吡咯列酮组TNF-α、IL-6的mRNA水平降低.结论 吡格列酮上调TBI大鼠PPARγmRNA、下调TNF-α和IL-6 mRNA表达,抑制炎症反应.
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PPAR γ激动剂对TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞细胞外基质表达的影响
目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR γ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人正常皮肤成纤维细胞细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达效应作用的影响,探讨其抗瘢痕的潜在作用.方法:体外培养人正常皮肤成纤维细胞,羟脯氨酸比色法观察PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的胶原表达的影响,免疫细胞化学法及图像分析技术观察、分析PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响,MTT法观察不同浓度的PPARγ激动剂对成纤维细胞增殖活性的影响.结果:TGF-β1能显著增加人正常皮肤成纤维细胞胶原和FN表达,并呈剂量依赖效应;与TGF-β1刺激组相比,10 μM 15d-PGJ2、曲格列酮预处理组胶原和FN表达减少,有显著性差异(P＜0.01);PPARγ激动剂对成纤维细胞的增殖活性影响分析,各实验组与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论:PPARγ激动剂可抑制TGF-β1诱导的人正常皮肤成纤维细胞ECM合成增多的效应,具有体外抗瘢痕纤维化的作用.
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ与妊娠的研究进展
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是配体激活的转录因子,有PPARα、PPARβ和PPARγ3种亚型,PPARγ除了拥有如抗炎、细胞分化、代谢调控等PPARs的共同功能外,还在妊娠中扮演重要角色.本文将从PPARγ在胎盘中的表达、PPARγ在胎盘发育中作用(PPARγ与滋养层细胞的分化和侵袭;PPARγ与胎盘脂肪代谢)、PPARγ与分娩的关系以及病理性妊娠阐释PPARγ对于妊娠的重要意义.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) 妊娠 胎盘 滋养层细胞
