首页 > 文献资料
-
木犀草苷人工抗原合成及免疫原性鉴定
金银花是常用大宗中药材之一,市场流通量大,但存在较多质量问题,建立一种金银花质量快速检测方法具有重要意义.木犀草苷是其质量控制指标之一,目前木犀草苷的含量检测主要以仪器检测为主,无法满足简单、快速、高通量的需求.酶联免疫检测法(ELISA)则具有灵敏度高、操作简单、设备仪器需求少、通量高等优点,是实现中药材有效成分快速检测的有效手段之一.该研究以木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷为原料,通过活泼酯法,分别与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原及包被抗原;紫外分光光度法检测半抗原与载体蛋白的偶联比,分别为3.7∶1 (LG-BSA)和1.0∶1(LG-OVA);免疫原(LG-BSA)免疫Bal b/c雌性小鼠,制备抗血清,ELISA检测抗血清效价并建立血清特异性标线.结果显示血清效价＞2000,以抗血清建立特异性标线,IC50=298.7 μg·L-,标线范围18.4～4 852.4 μg·L-1,表明所制备的完全抗原免疫原性良好.
-
大黄酸人工抗原合成及免疫原性鉴定
大黄药理作用广泛,是临床常用中药材之一.大黄酸是其主要活性成分,大黄酸的含量是大黄质量控制的主要指标之一.目前对大黄酸的检测主要是通过仪器分析手段,如高效液相色谱法,但是仪器分析通常操作繁琐、耗时长、通量小且仪器设备昂贵.与之相比,酶联免疫检测法(ELISA)则具有灵敏度高、操作简单、设备仪器需求少、通量高等优点,是实现中药材快速检测的有效手段之一.该研究制备大黄酸(rhein)人工抗原及血清,为之后大黄酸单克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附检测方法提供基础.通过碳二亚胺法活化大黄酸,分别与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原及包被抗原;通过紫外分光光度法检测人工抗原的半抗原与载体蛋白偶联比,分别为4.0∶1(rhein-BSA)和2.6∶1 (rhein-OVA).用免疫原免疫Bal b/c雌性小鼠,制备抗血清,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗血清效价及特异性.结果表明血清效价均高于8 000,特异性强,免疫原性良好.
-
从蛋白质相互作用研究方法的发展看人们认识事物的过程
1 酶联免疫吸附检测法简单的研究两蛋白质相互作用的是,在体外验证两蛋白质的相互作用,如验证所制备的抗体是否特异性地与抗原结合,这里要求方法:一要能检测到结合作用,二要排除非特异性结合,这样人们就建立了酶联免疫吸附检测法(ELISA).原理是,将已知抗原固定在96孔塑料板上,用不同稀释度的抗抗原的第一抗体溶液与其结合,经洗涤去除非特异性结合分子后,加入用辣根过氧化物酶标记的抗第一抗体的第二抗体,洗涤后再加入辣根过氧化物酶的底物,底物被酶作用后就转变为有颜色的物质.这样只有在第一抗体与抗原结合了之后才会有后面的二抗和底物的逐步结合,也才会有颜色的变化.由于这种方法是用酶标二抗和底物呈色,所以有放大效应,灵敏度较高.若抗体的特异性和亲和性非常好,ELISA法就可以用来检测实验样品和临床标本中的抗原水平,例如,临床上乙型肝炎5项指标的检测就是用这种方法.
-
乙型肝炎患者血清中HBsAg-IgM特异循环免疫复合物与HBVDNA检出率的相关性探讨
目的探讨乙型肝炎患者血清中HBsAg-IgM特异性循环免疫复合物(HBsAg-IgM CIC)与HBVDNA之间相关关系机理.方法采用酶联免疫吸附检测法(ELISA),聚合酶链反应方法(PCR).结果 80例急性乙型肝炎中HBsAg-IgM CIC阳性率为85%,HBVDNA阳性率94%.80例慢性活动性肝炎HBsAg-IgM CIC与HBVDNA的阳性率分别为65%和48.7%.80例慢迁肝HBsAg-IgM CIC与HB-VDNA的阳性率分别为15%和17.5%.80例乙型肝炎恢复期患者中HBsAg-IgM CIC中与HBVDNA的阳性率分别为0%和5%.40例健康成人中HBsAg-IgM CIC中与HBVDNA的阳性率均为0%. 结论各型乙型肝炎中HBsAg-IgM CIC中与HBVDNA的阳性率经统计学处理有非常显著性差异P=0.001,各型乙型肝炎中HBsAg-IgM CIC与HBVDNA之间r＝0.9586,呈正相关.
-
3种登革热抗原检测方法的比较
目的 比较3种检测方法——免疫胶体金包被法、ELISA检测法及PCR核酸检测法,测定登革热抗原的敏感性、特异性及其3种方法的优缺点.方法 用免疫胶体金包被法和ELISA检测法及PCR核酸检测法,对来源于医院临床诊断的疑似登革热病例的血清进行抗原检测.结果100份临床诊断疑似登革热病例的血清经过免疫胶体金包被法检测为阳性者再次用ELISA检测法及PCR核酸检测法测定抗原,检测后的阳性结果准确率均为100％,而100份免疫胶体金包被法检测为阴性的血清,用ELISA检测法及PCR核酸检测法测定抗原,结果出现了假阴性.结论 通过比较免疫胶体金包被法、ELISA检测法及PCR核酸检测法检测登革热抗原,使用ELISA检测法及PCR核酸检测法测定登革热抗原的敏感性较强,准确度很高并具有可排除干扰因素的优点.
-
酶联免疫吸附检测法检测全血中他克莫司浓度及其应用
目的：探讨酶联免疫吸附检测法(ELISA)检测全血中FK506浓度的准确性及其在器官移植术后抗排斥治疗中的应用。方法：采用酶联免疫吸附检测法，对5例肝移植术后患者不同时期全血中FK506谷值浓度进行监测，并结合临床调整剂量，分析该法的准确性及其对临床FK506应用的指导作用。结果：在305个血样的131次检测中，质控血样检测结果全部在控制范围内，高、低浓度两个质控的RSD值分别为9.09％和11.90％，监测下的FK506血药浓度控制与文献报道一致。结论：酶联免疫吸附检测法灵敏度高、特异性强，是一种较理想的FK506血药浓度常规检测方法，适宜在医院内开展。
-
罗汉果甜苷V人工抗原免疫原性检测法的建立与评价
目的 制备罗汉果甜苷V(mogroside V,MogV)-载体蛋白复合物人工抗原及抗血清,建立抗血清与MogV特异性反应的检测方法,为进一步制备MogV的单克隆抗体、建立快速检测MogV的ELISA法提供技术基础.方法 将MogV与丁二酸酐、载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HAS)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,通过紫外扫描光谱计算出结合的半抗原数目;以此抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测效价和特异性.结果 合成的人工抗原MogV-HS-BSA结合比约为44:1,MogV-HS-HAS结合比约为64:1;通过免疫小鼠得到特异性针对MogV的抗血清,血清效价较高.结论MogV人工抗原有较好的免疫原性,建立的免疫原性检测方法简便可行.
