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汉族人群血管紧张素原基因的新单核苷酸多态性位点
应用改进的PCR-SSCP技术、多种聚丙烯酰胺凝胶电泳和PCR产物直接测序等方法,分析人的血管紧张素原(AGT) 基因启动子区5＇远侧端的单核苷酸多态性(SNP).在非变性胶上,发现不同样品的PCR产物(双链DNA分子)电泳迁移率不同;而在变性胶上,对应的单链DNA分子电泳迁移率相同;PCR产物直接测序的结果表明,在同一PCR扩增片段中同时存在两个SNPs位点(G-1074T, A-1179G);通过476个不同样品的实验结果,进一步证实两个SNPs位点处于完全的连锁不平衡关系.GenBank同源性比较结果显示: A-1179G为中国汉族人群所特有.
关键词： 单链构象多态性 单核苷酸多态性 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品
目的 建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较.方法 采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究.结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条.SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条.2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别.结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法.
关键词： 哈蟆油 鉴别 伪品 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
切割穹隆海马伞后大鼠海马中83 ku差异蛋白的质谱分析
目的: 探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能. 方法: 切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对83 ku差异蛋白进行检测和功能分析. 结果: 质谱分析找到了17组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白.结论: 切割穹隆海马伞海马83 ku差异蛋白可以通过参与Rho信号通路,调控神经干细胞向神经元分化.
关键词： 83ku蛋白 切割穹隆海马伞 海马 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱分析 -
切割海马伞海马中56 kD差异蛋白的质谱分析
目的:探讨切割海马伞海马中具有生物活性的56 kD差异蛋白的组成成份及其功能.方法:切割SD大鼠海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对56 kD差异蛋白进行检测和功能分析.结果:质谱分析找到了33组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、核酸水解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白.结论:切割海马伞海马中56 kD差异蛋白中含有功能涉及神经干细胞迁移、分化的蛋白质.
关键词： 56 kD蛋白 切割海马伞 海马 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱分析 -
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在大鼠海马组织蛋白分离中的应用
目的:探索应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白的佳条件.方法:选用不同pH的正极缓冲液和样品蛋白上样量,应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白质.结果:在其它条件不变的情况下,pH9.0的正极电泳缓冲液以及40～60μg/孔样品蛋白上样量时,可得到分辨率高、条带多而清晰的电泳图谱.结论:应用pH9.0的正极电泳缓冲液和样品上样量为40～60μg/孔时,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,可成功地分离大鼠海马组织蛋白.
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不同地理单元尖吻蝮蛇毒蛋白组分比较研究
目的 探讨不同地理单元尖吻蝮蛇毒蛋白组分有无差异性.方法 采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)方法,比较采自安徽黄山(黄山单元)和贵州梵净山(西部单元)尖吻蝮蛇毒组分.结果 梵净山尖吻蝮的蛇毒蛋白表达量和条带数目均高于黄山尖吻蝮.结论 黄山单元和西部单元的尖吻蝮蛇毒蛋白组分具有差异性.
关键词： 尖吻蝮 地理单元 蛇毒 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
生物素标记探针-液相杂交-非变性PAGE检测非编码小RNA方法的建立和优化
目的 建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法.方法 将生物素标记的sRNA U6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测.从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法 检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNA U6与miRNA145的含量.结果 将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10 μmol/L时达到强.采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5 μg RNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞.结论 成功建立并优化了sRNA检测新方法,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能.
关键词： 非编码小RNA 生物素化探针 液相杂交 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
海马中56kD蛋白诱导人神经干细胞迁移的作用
为了探讨切割海马伞后的海马和正常海马在蛋白表达方面的差异,获取海马中具有生物活性的特异蛋白,并观察其对人胚神经干细胞迁移的影响,取切割SD大鼠海马伞后10、14、20 d及正常海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE).将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14 d海马和正常海马的56 kD差异蛋白胶条及空白对照胶条共培养,观察神经干细胞球中神经干细胞迁移情况,第3 d时计数朝胶条方向1/4扇区内的迁出细胞数.结果显示,切割后各天组和正常组比较见多条差异蛋白条带,其中56 kD差异蛋白的密度积分正常组低,10 d组和20 d组较高,14 d组高.神经干细胞球中向56 kD差异蛋白胶条方向迁移的细胞数在切割组多,正常组次之,对照组少.提示切割海马伞后的海马与正常海马间存在多种差异蛋白,其中56 kD蛋白在切割海马伞后14 d表达量高,并具有诱导神经干细胞迁移的作用.
