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XAV939抑制人肝癌HepG2细胞血管生成拟态的形成
目的 初步研究XAV939对人肝癌HepG2细胞血管生成拟态形成的影响及其可能的机制.方法 实验分为对照组和实验组(0.5和1μmol/L XAV939分别处理HepG2细胞48 h);体外成管实验检测各组细胞形成血管拟态的能力,RT-PCR检测ZEB1及MMP-7 mRNA的表达,Western blot检测β-catenin、ZEB1和MMP-7蛋白的表达.结果 对照组与实验组形成管状结构数目分别为9.67±0.70,5.67±0.64(0.5 μmol/L)和2.27±0.81(1μmol/L),体外形成管道结构的数目减少(P＜0.01);实验组ZEB1及MMP-7 mRNA表达和ZEB1、MMP-7及β-catenin蛋白表达均较对照组减少(P＜0.05).结论 XAV939能有效抑制人肝癌HepG2细胞血管生成拟态的形成.
关键词： XAV939 HepG2 Wnt/β-catenin 血管生成拟态 -
XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖
目的 探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制.方法 采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定佳作用浓度.然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化.Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化.结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升.XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态.此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖.
关键词： XAV939 神经母细胞瘤 Wnt/β-catenin信号通路 免疫印迹法 人 -
关键词：
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Wnt信号通路抑制剂XAV939对人小细胞肺癌H446增殖及凋亡的影响
目的 探讨Wnt信号通路抑制剂XAV939对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测XAV939、顺铂分别作用及联合用药时H446细胞的生长抑制率,并探索产生佳细胞生长抑制作用的药物水平,流式细胞仪检测XAV939对H446细胞凋亡情况.结果Wnt信号通路抑制剂XAV939抑制H446细胞生长并呈水平依赖性(P<0.01),顺铂抑制H446细胞生长呈水平和时间依赖性(P<0.01).两药联合时对细胞生长的抑制作用更明显.流式细胞仪检测结果显示随着XAV939水平增加,H446凋亡细胞比例明显增加(P<0.05).结论 XAV939 通过抑制 Wnt信号通路诱导细胞凋亡抑制人小细胞肺癌 H446 细胞的生长,这为小细胞肺癌的治疗提供辅助治疗手段.
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XAV939对结肠癌耐药细胞迁移能力的影响
目的 探究Wnt通路抑制剂XAV939对结肠癌耐药细胞迁移能力的影响.方法 XAV939处理HCT-8/5-Fu细胞,MTT检测HCT-8/WT、HCT-8/5-Fu和HCT-8/5-Fu+XAV939细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)的敏感性;Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白的表达水平.结果 MTT、Transwell和划痕实验结果显示,HCT-8/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性低于HCT-8/WT细胞,迁移能力高于HCT-8/WT细胞;Western blot结果显示,与HCT-8/WT细胞相比,HCT-8/5-Fu细胞核中β-catenin明显高表达,且c-Myc和cyclin D1也呈现高表达;XAV939处理HCT-8/5-Fu细胞后,其对5-Fu的耐受性和迁移能力均降低,细胞核中β-catenin表达下降,并且c-Myc和cyclin D1的表达也明显减少.结论 Wnt/β-catenin通路可能参与了HCT-8/5-Fu细胞的耐药,其小分子抑制剂XAV939通过影响HCT-8/5-Fu细胞对5-Fu的耐受性,进而影响细胞的迁移能力.
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顺铂与XAV939联合应用对人肺癌细胞A549增殖、迁移能力的影响及机制
目的：观察顺铂联合端锚聚合酶抑制剂XAV939对人肺癌细胞增殖和迁移能力的影响，并探讨其机制。方法将体外培养的人肺癌A549细胞分为空白对照组、顺铂组、XAV939组、顺铂＋XAV939组，分别用1μmol／L NaCl、0．002 g／L顺铂、1μmol／L XAV939、0．002 g／L顺铂＋1μmol／L XAV939培养。用MTT法观察各组细胞增殖情况并计算细胞增殖抑制率；用细胞划痕实验和Transwell小室实验观察各组细胞迁移能力；用Western blotting法检测各组细胞中的WNT通路转录因子端锚聚合酶、β-连接素蛋白。结果与对照组相比，顺铂组、XAV939组、顺铂＋XAV939组细胞增殖抑制率高（P均＜0．05），细胞迁移距离短（P均＜0．05），穿膜细胞数少（P均＜0．05），细胞中端锚聚合酶、β-连接素蛋白相对表达量低（P均＜0．05）；与顺铂组和XAV939组相比，顺铂＋XAV939组细胞增殖抑制率高（P均＜0．05），细胞迁移距离短（P均＜0．05），穿膜细胞数少（P均＜0．05），细胞中端锚聚合酶、β-连接素蛋白相对表达量低（P均＜0．05）。结论顺铂联合XAV939可以抑制人肺癌A549的增殖和迁移，且效果强于单用XAV939或顺铂。这可能与二者抑制WNT通路转录因子端锚聚合酶、β-连接素蛋白表达有关。
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不同浓度XAV939对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 观察不同浓度端锚聚合酶抑制剂XAV939对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 取肺腺癌A549细胞,分为XAV939组和空白对照组,XAV939组分别加入0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μmol/L的XAV939,空白对照组正常培养.采用MTT法观察各组细胞增殖情况,细胞划痕试验观察细胞24h内的迁移能力,RT-PCR法检测细胞中WNT通路转录因子β-catenin mRNA表达,免疫荧光法对细胞β-catenin表达进行定位.结果 ①24、48 h时XAV939组不同浓度的细胞增殖抑制率均较空白对照组升高(P均＜0.05);同一时间点XAV939组不同浓度的细胞增殖抑制率比较有统计学差异,随XAV939浓度增加,细胞增殖抑制率增加(P＜0.05).②24h时,XAV939组不同浓度的细胞划痕宽度均大于空白对照组(P均＜0.05).③XAV939组不同浓度β-catenin mRNA表达均较空白对照组减少(P均＜0.05).④空白对照组及XAV939组0.1、1.0、10.0 μmol/L的β-catenin荧光染色逐渐由细胞核和细胞质转移至细胞质和细胞膜.结论 XAV939可抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移,其作用机制可能与抑制WNT通路的异常激活相关.
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XAV939对胃癌细胞株MKN45凋亡的诱导作用及其机制
目的 探讨Wnt信号通路抑制剂XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞凋亡的影响及其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法观察XAV939对MKN-45细胞增殖的影响;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染流式细胞术、原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测XAV939作用不同时段后c-Myc、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2)、α-连环蛋白(β-catenin) mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、c-Myc、bcl-2、bcl-2相关X蛋白(bax)、Axin 1、β-catenin、磷酸化β-catenin(p-β-catenin)和细胞周期蛋白(Cyclin) D1等的表达变化.结果 XAV939能明显抑制胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖,呈浓度依赖性,半数抑制浓度为(1.91 ±0.27)μmol/L.Annexin V-FITC/PI流式细胞法检测到早期凋亡细胞,作用12h后的MKN-45细胞凋亡率分别为8.8％、13.5％、21.5％和25.8％,不同浓度XAV-939作用MKN-45细胞48 h后,实验组c-Myc、bcl-2、β-catenin基因mRNA表达逐渐减弱,与对照组比较差异有统计学意义.c-Myc、bcl-2、PARP(116 ×103)、β-catenin及Cyclin D1蛋白表达水平呈下调趋势,而bax、Axin 1、p-β-catenin和PARP(85×103)蛋白表达逐渐上升.结论 XAV-939可以有效抑制胃癌细胞株MKN-45的增殖,诱导其凋亡,机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路,促进MKN-45细胞凋亡有关.
关键词： XAV939 胃癌 Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
端锚聚合酶抑制剂XAV939抑制人骨肉瘤SOSP-9607细胞增殖及作用机制研究
目的:研究端锚聚合酶抑制剂XAV939对人骨肉瘤SOSP-9607细胞增殖的抑制及其作用机制.方法:以人骨肉瘤SOSP-9607细胞为研究对象,采用CCK-8法测定0.5、1、5、10μmol/L XAV939分别作用24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算细胞抑制率;采用流式细胞术检测5μmol/L XAV939作用72 h后的细胞凋亡情况及周期分布;以甘油醛-3-硫酸脱氢酶(GAPDH)为内参,采用蛋白质印迹法测定0.5、1、5、10μmol/L XAV939作用72 h后细胞中β-联蛋白(β-catenin)、G1/S期特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶7(MMP-7)的相对表达量.结果:1μmol/L XAV939作用72 h后,5、10μmol/L XAV939作用24、48、72 h后,SOSP-9607细胞的抑制率均显著升高(P<0.05或P<0.01).5μmol/L XAV939作用72 h后,SOSP-9607细胞的凋亡率从3.71％上升至21.03％(P<0.05);G1期细胞的比例由45.5％增至54.8％,S期细胞的比例由27.4％降至24.0％,G2/M期细胞的比例由22.2％降至16.2％(P<0.05).5、10μmol/L XAV939作用72 h后,SOSP-9607细胞中β-catenin、Cyclin D1和MMP-7的相对表达量均显著下降(P<0.05或P<0.01).结论:端锚聚合酶抑制剂XAV939能够抑制人骨肉瘤SOSP-9607细胞的增殖,其机制可能与其将细胞周期阻滞于G1期、阻断细胞外因子(Wnt)/β-catenin信号通路有关.
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小分子化合物XAV939诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究
目的 探讨采用小分子化合物XAV939对体外培养小鼠胚胎干细胞(mESC)诱导分化为心肌细胞的可行性.方法 复苏、培养未分化的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)在小鼠胚胎成纤维细胞制作的滋养层上长至汇合,胰蛋白酶消化后经悬滴法形成拟胚体(EBs),拟胚体贴壁后用XAV939诱导分化为心肌细胞.通过光镜观察并记录跳动的心肌细胞,采用免疫荧光技术鉴定心肌细胞.结果 XAV939能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化,诱导平均效率为71.85％±1.05％;分化的心肌细胞自发而有节律地收缩,心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T (cTnT)表达呈阳性.结论 小分子化合物XAV939能有效地诱导小鼠胚胎干细胞在体外分化为心肌细胞.
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XAV939对肝癌细胞增殖及糖酵解的影响
目的：探讨 Wnt／β－catenin 信号通路特异性抑制剂 XAV939对肝癌细胞增殖及糖酵解过程的影响。方法：MTT 方法检测不同浓度 XAV939对肝癌细胞 Bel －7402、HCCLM3增殖能力的影响；Western blot 方法检测 XAV939对肝癌 Bel －7402、HCCLM3细胞 Wnt／β－catenin 信号通路关键基因和其下游靶基因表达的影响，以及对糖酵解过程中关键调控基因表达的影响。运用 SPSS 19．0统计软件分析各组间的差异。结果：MTT 结果表明不同浓度的 XAV939能够不同程度的抑制 Bel －7402、HCCLM3细胞增殖能力，XAV939对两种细胞的抑制率接近50％时，浓度分别为：30μmol／L、20μmol／L。Western blot 结果显示，XAV939可以显著抑制 Wnt／β－catenin 及其下游基因 c －myc、Cyclin D1的表达，有效抑制β－catenin 信号通路活性；同时，XAV939可以通过抑制 HK －2、LDHA 而非 Glut －1的蛋白表达水平来抑制肝癌细胞的糖酵解过程。结论：XAV939在体外能够有效抑制肝癌细胞 Wnt／β－catenin 信号通路及其依赖性细胞增殖和糖酵解过程。
关键词： XAV939 肝癌 Wnt/β-catenin 信号通路 糖酵解
