首页 > 文献资料
-
槲皮素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及与Wnt/β-catenin信号通路的机制
目的:观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖和Wnt/ β-连环蛋白( β-catenin)信号通路的调控作用,探讨其抗前列腺癌的可能机制.方法:体外培养PC-3细胞,以不同终浓度槲皮素进行处理,设空白组.采用噻唑蓝比色法(MTT)观察槲皮素对PC-3细胞增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测槲皮素对PC-3细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blot)和逆转录-PCR(RT-PCR)分析检测槲皮素对β-catenin和下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1),原癌基因(c-Myc)蛋白表达和转录水平;采用免疫荧光分析检测槲皮素对β-eatenin表达的影响;利用荧光酶报告基因分析检测槲皮素对Wnt/β-eatenin信号通路的影响.结果:与空白组比较,槲皮素对PC-3细胞增殖具有明显抑制作用(P＜0.05),并诱导PC-3细胞凋亡(P＜0.05).与空白组比较,槲皮素可显著抑制PC-3细胞β-eatenin的蛋白表达和转录活性,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路的传导,抑制下游靶基因的表达水平(P ＜0.05,P＜0.01).结论:槲皮素可显著抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与抑制Wntt/β-eatenin信号通路有关.
关键词： 前列腺癌 槲皮素 Wnt/β-连环蛋白信号通路 细胞周期素D1 原癌基因 -
十全大补汤含药血清对A549/DDP细胞株中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的干预作用
目的:探讨十全大补汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的干预作用.方法:以SD大鼠制备高、中、低剂量(65,32.5,16.25 g·kg-1,10 mL·kg-1)的十全大补汤含药血清和空白对照血清(生理盐水10 mL·kg-1).培养细胞分为十全大补汤含药血清高、中、低剂量组和空白血清组,采用MTT法检测各组50％抑制浓度(ICs0),采用蛋白质印迹法检测各组糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),p-GSK-3βser9,β-连环蛋白(β-catenin)及survivin蛋白表达.结果:随着十全大补汤含药血清浓度的升高,顺铂(DDP)对A549/DDP细胞的IC50逐渐降低,以中、高剂量组显著(P＜0.01);十全大补汤含药血清对A549/DDP细胞浆GSK-3β蛋白的表达无影响,但可显著下调胞浆p-GSK-3βser9蛋白的表达及细胞总β-catenin和survivin蛋白的表达,以中、高剂量组明显(P＜0.01) 结论:十全大补汤可通过降低A549/DDP细胞浆p-GSK-3βser9蛋白及细胞总β-catenin,survivin蛋白的表达而影响Wnt/β-catenin信号转导通路,进而发挥对顺铂耐药的增敏作用.
-
芪玉三龙汤调节肺癌组织核转录蛋白表达抑制荷瘤小鼠瘤体生长的作用机制研究
目的 观察芪玉三龙汤对肺癌荷瘤小鼠瘤体的抑瘤效应及对Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路中糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin蛋白表达的影响.方法 采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,按随机数字表法分为模型组、化疗组和芪玉三龙汤低、中、高剂量组以及联合组,每组8只.制模第2天开始,芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48 g·kg-1·d-1灌胃中药,化疗组每周腹腔注射0.4 mL顺铂,联合组给予高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合用药,模型组给予等量生理盐水,连续给药21 d.实验结束后处死小鼠取肺组织,称取瘤质量,计算抑瘤率;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肿瘤组织GSK3β、p-GSK3β、β-catenin的蛋白表达水平.结果 与模型组比较,各药物组瘤质量、GSK3β、β-catenin的蛋白表达水平均明显降低,抑瘤率、p-GSK3β的蛋白表达水平明显升高,联合组瘤质量、抑瘤率的变化较芪玉三龙汤低、中、高剂量组更显著 〔瘤质量(g):1.48±0.71比4.53±1.34、4.27±0.62、3.45±1.05,抑瘤率:73.23％比13.51％、18.32％、33.86％,均P<0.01〕,联合组瘤质量、抑瘤率与化疗组相当〔瘤质量(g):1.48±0.71比1.49±0.68,抑瘤率:73.23％比73.01％,均P>0.05〕;而联合组GSK3β、p-GSK3β的蛋白表达水平变化也较芪玉三龙汤低、中、高剂量组和化疗组更显著〔GSK3β/β-肌动蛋白(β-actin):0.58±0.03比1.02±0.02、1.06±0.04、0.96±0.04、0.78±0.05,p-GSK3β/β-actin:1.93±0.05比1.40±0.09、1.41±0.06、1.60±0.06、1.79±0.02,均P<0.05〕,但对β-catenin蛋白表达的影响以芪玉三龙汤高剂量组的降低程度较化疗组和芪玉三龙汤低中剂量组及联合组更显著(β-catenin/β-actin:0.16±0.01比0.80±0.05、1.33±0.04、0.74±0.05、0.73±0.02).结论 芪玉三龙汤对肺癌移植瘤具有温和的抑制作用,高剂量抑制肿瘤生长作用较优,且量效关系明显.芪玉三龙汤和化疗药联用具有协同效应,对肺癌具有一定的抑制作用.
-
透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控
背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变.目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3.及.-连环蛋白的影响.方法:将SD 大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素 1β诱导软骨细胞退变,取第2 代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8 d 后,采用RT-PCR 检测2 组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA 表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达.结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象.说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成.-连环蛋白和Wnt4 蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达.
-
miR-200c通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路诱导膀胱癌细胞阿霉素耐药
目的:探讨miR-200c表达与膀胱癌细胞阿霉素(DOX)耐药的关系.方法:过表达或抑制miR-200c表达后,检测DOX对膀胱癌细胞(RT4、RT112、T24和TCCSUP)生长抑制作用的变化.Western blot检测miR-200c对Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响,检测Wnt/β-连环蛋白信号激活剂Wnt3a干预对miR-200c诱导膀胱癌DOX耐药作用的影响.结果:抗miR-200c转染后,T24和RT4细胞DOX的耐药性显著下降.DOX干预后,与对照组细胞相比,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞凋亡和S期积累明显增加.此外,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞中Dkk1,Kremen2和sFRP2等Wnt/β-连环蛋白信号的负调控蛋白表达明显升高,Wnt/β-连环蛋白信号通路活性明显下降.Wnt3a干预能够拮抗抗miR-200c转染的膀胱癌细胞生长抑制作用.结论:miR-200c表达与膀胱癌细胞DOX耐药密切相关,且Wnt/β-连环蛋白信号通路激活介导了miR-200c诱导的膀胱癌细胞DOX耐药性.
关键词： 膀胱癌 阿霉素 微小核糖核酸 miR-200c Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
微小RNA-194对肝癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-194在肝癌组织以及肝癌细胞株中的表达,探讨miR-194对肝癌细胞生物行为学的影响.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测miR-194在20例肝癌组织和20例癌旁组织以及肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L02中的表达,建立miR-194过表达或低表达肝癌细胞株,采用细胞增殖实验、划痕实验、蛋白免疫印迹技术检测癌细胞的增殖、迁移能力改变及其相关机制.结果 miR-194在肝癌组织中的相对表达量显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(0.364±0.040比0.198±0.028,t=3.176,P=0.003);在肝癌细胞株HepG2中的相对表达量也显著高于正常肝细胞株,差异有统计学意义(0.517±0.069比0.181±0.025,t =4.557,P=0.010);在肝癌细胞株HepG2中,高表达miR-194组细胞的增殖能力(1.857±0.170比1.019±0.019,t=7.065,P=0.000)和迁移能力(0.483±0.084比0.927±0.030,t=5.181,P=0.008)较对照组肝癌细胞显著增强,差异有统计学意义,而低表达组细胞的增殖能力(0.529±0.095比1.019±0.019)较对照组肝癌细胞显著降低(t=5.422,P=0.006).检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)的表达改变,miR-194过表达细胞的Wnt蛋白的表达显著高于对照组(0.589±0.194比0.302±0.013,t =3.035,P=0.039);且β-catenin蛋白的表达亦显著高于对照组(0.941±0.101比0.220±0.115,=9.434,P=0.000),差异均有统计学意义,而miR-194低表达细胞的Wnt蛋白(0.310±0.028比0.260±0.026,t 1.308,P=0.261)和β-catenin蛋白(0.179±0.028比0.080±0.034,t=2.242,P=0.088)较对照组表达差异无统计学意义.结论 miR-194在肝癌组织中高表达,其可能与肝癌细胞的增殖和侵袭能力增加有关,miR-194的上述作用可能是通过上调Wnt/β-catenin信号通路实现.
-
RNA干扰靶向抑制胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白1基因对肾癌细胞的抑制作用及其机制
目的 探讨RNA干扰(RNAi)抑制胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)基因对肾癌细胞活力和凋亡的影响及其机制.方法 以人胚肾HEK293细胞为对照组细胞,通过Western blot检测人肾癌786-0、A498、ACHN和CaKi-2细胞中IGF2BP1的蛋白表达.将设计并合成的IGF2BP1小干扰RNA(siRNA)经LipofectamineTM 2000转染CaKi-2细胞,Western blot检测转染后的细胞中IGF2BP1、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路关键分子β-catenin及增殖凋亡相关靶基因增殖细胞核抗原(PCNA)、生存素(Survivin)的蛋白表达.结果 786-0(0.415±0.038)、A498(0.278±0.030)、ACHN(0.326±0.032)和CaKi-2(0.557±0.053)细胞中IGF2BP1的表达均明显高于在HEK293细胞(0.062±0.009)表达(P =0.003),选择CaKi-2细胞为研究对象.IGF2BP1 siRNA转染后的细胞中IGF2BP1(0.073±0.010)、β-catenin(0.178±0.021)、PCNA (0.147 ±0.016)、Survivin(0.095 ±0.010)的蛋白表达均明显低于NC组(0.485 ±0.055)、(0.547±0.050)、(0.246±0.028)、(0.168±0.018),细胞活力(0.557 ±0.045)明显低于NC组(0.804±0.057,细胞凋亡率(21.48±1.54)％明显高于NC组(2.46±0.27)％,差异均有统计学意义(P=0.000).结论 IGF2BP1在肾癌细胞表达升高,抑制其表达后可明显降低细胞活力和诱导凋亡,机制可能是Wnt/β-catenin信号通路的降低.
-
Stomatin样蛋白2基因调控Wnt/β-连环蛋白信号通路对胃癌细胞增殖凋亡的机制
目的 探讨人Stomatin样蛋白2(SLP-2)基因调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制.方法 Western blot检测SLP-2基因在人胃癌组织中的表达;将NC-小干扰RNA(siRNA)、SLP-2-siRNA1、SLP-2-siRNA2转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何siRNA的作为对照组,Western blot检测转染后各组细胞中SLP-2蛋白表达;细胞转染48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测活化的的Cleaved含半胱氨酰的天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、β-catenin、c-Myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达.结果 胃癌组织中SLP-2的蛋白表达(0.283±0.016)显著高于癌旁组织(0.082±0.016)(t=7.789,P=0.003);SLP-2-siRNA2组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;LP-2-siRNA组(16.62±1.32)%细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达(1.421±0.210)均显著高于对照组(1.56±0.56)%、(0.510±0.083),β-catenin(0.157±0.024)、c-Myc(0.039±0.016)、Cyclin D1(0.052±0.012)蛋白表达显著低于对照组(0.311±0.036、0.137±0.026、0.183±0.021)(t凋亡率=9.324,P凋亡率=0.001;tβ-catenin=8.868,Pβ-catenin=0.003;tc-Myc=9.112,Pc-Myc=0.002;tCyclin D1=9.987,PCyclin D1=0.001).结论 SLP-2在胃癌中高表达,沉默SLP-2的表达能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖和促进细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关.
关键词： Stomatin样蛋白2 Wnt/β-连环蛋白信号通路 胃癌 增殖 凋亡 -
微小RNA-143下调Wnt/β-连环蛋白抑制食管癌侵袭转移的机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-143下调Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)在抑制食管癌侵袭转移中的作用机制.方法 体外培养食管癌细胞株EC109-H、TE-1及食管正常上皮细胞株Het-1A并随机分为实验组(EC109-H、TE-1)和阴性对照组(Het-1A);采用Transwell迁移实验、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测各组细胞的侵袭能力,miR-143及Wnt/β-catenin调控因子Wnt、β-catenin、CD44的表达量,并进行miR-143与Wnt/β-catenin通路调控蛋白的相关性分析;通过在线软件预测miR-143的相关靶点;利用miRNA抑制物及相似物改变细胞中miR-143含量,并构建CD44-3'端非编码区(3'UTR)载体及CD44-3'端非编码区(突变型)(3'UTRM)载体,应用双荧光素酶实验验证预测靶点.结果 各组细胞株侵袭能力比较,EC109-H的侵袭能力强(156.86±0.83,P=0.003);miR-143在EC109-H中的表达量低(1.01±0.12,P=0.000);高侵袭能力的EC109-H细胞株中Wnt、β-catenin、CD44表达量均高于其他组(0.51±0.11,P=0.005;0.65±0.12,P=0.007;0.80±0.09,P=0.001),且miR-143与上述蛋白表达均呈负相关(rCD44=-0.827,P=0.000;rwnt=-0.907,P=0.017;rβ-catenin=-0.810,P=0.028);靶点预测CD44可能为miR-143的调控靶点,双荧光素酶实验结果显示miR-143可以靶向CD44的3'UTR区(0.32±0.28,P=0.000).结论 miR-143可能通过靶向Wnt/β-catenin信号通路调控食管癌细胞的侵袭转移能力.
关键词： 微小RNA-143 Wnt/β-连环蛋白信号通路 食管癌 侵袭 转移 -
XAV939对胃癌细胞株MKN45凋亡的诱导作用及其机制
目的 探讨Wnt信号通路抑制剂XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞凋亡的影响及其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法观察XAV939对MKN-45细胞增殖的影响;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染流式细胞术、原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测XAV939作用不同时段后c-Myc、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2)、α-连环蛋白(β-catenin) mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、c-Myc、bcl-2、bcl-2相关X蛋白(bax)、Axin 1、β-catenin、磷酸化β-catenin(p-β-catenin)和细胞周期蛋白(Cyclin) D1等的表达变化.结果 XAV939能明显抑制胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖,呈浓度依赖性,半数抑制浓度为(1.91 ±0.27)μmol/L.Annexin V-FITC/PI流式细胞法检测到早期凋亡细胞,作用12h后的MKN-45细胞凋亡率分别为8.8％、13.5％、21.5％和25.8％,不同浓度XAV-939作用MKN-45细胞48 h后,实验组c-Myc、bcl-2、β-catenin基因mRNA表达逐渐减弱,与对照组比较差异有统计学意义.c-Myc、bcl-2、PARP(116 ×103)、β-catenin及Cyclin D1蛋白表达水平呈下调趋势,而bax、Axin 1、p-β-catenin和PARP(85×103)蛋白表达逐渐上升.结论 XAV-939可以有效抑制胃癌细胞株MKN-45的增殖,诱导其凋亡,机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路,促进MKN-45细胞凋亡有关.
关键词： XAV939 胃癌 Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
BAG-1基因的小干扰RNA转染对肝癌细胞生物学特性的影响
目的 观察RNA干扰BAG-1基因表达对肝癌细胞增殖凋亡及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响.方法 以人正常肝癌细胞L02作为对照细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分别检测BAG-1在无转移能力的HepG2、Huh7人肝癌细胞株及转染潜能依次增高的MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3人肝癌细胞株中的表达;将阴性小干扰RNA(siRNA)和BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞,不转染的细胞为空白对照组,转染48 h后检测转染效果;分别于转染后的24、48、72 h通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖;流式细胞仪检测转染48 h细胞的凋亡;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、生存素(Survivin)、c-Myc的蛋白表达.结果 BAG-1在肝癌细胞中的表达均显著高于对照细胞L02(mRNA表达:PHepG2=0.000;PHuh7=0.000;PMHCC97L=0.000;PMHCC97H=0.000;PHCCLM3=0.000;蛋白表达:PHepG2=0.030;PHuh7=0.001;PMHCC97L=0.000;PMHCC97H=0.000;PHCCLM3=0.000);BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞后BAG-1的蛋白表达(0.097 ±0.010)显著低于空白对照组(0.489±0.039)(P=0.000);BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞48 h(0.312±0.024)和72 h(0.398±0.036)后细胞的增殖显著低于空白对照组(0.448 ±0.032)、(0.673±0.051)(P48h=0.004;P72 h=0.002);与空白对照组(2.13±0.11)％、(0.512 ±0.048)、(0.349±0.032)、(0.166 ±0.015)比较,BAG-1-siRNA组细胞凋亡率[(13.47±1.05)％]显著升高,β-catenin(0.247 ±0.028)、Survivin(0.153 ±0.017)、c-Myc(0.089±0.009)蛋白显著下调表达(Pβ-catenin=0.001;PSurvivin=0.001;Pc-MyC=0.002).结论 抑制BAG-1表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡.
关键词： BAG-1基因 肝癌 增殖 脱噬作用 Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
XAV939对胃癌细胞株MKN-45的增殖及Wnt/β-连环蛋白信号通路的抑制作用
目的 观察XAV939对胃癌细胞株MKN-45增殖及Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的作用.方法 检测XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测β-catenin和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1) mRNA表达,Western blot法检测Axin 1、β-catenin、磷酸化β-catenin(p-β-catenin)和Cyclin D1的表达.结果 不同浓度的XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞增殖的抑制率分别是22.5％、39.1％、52.5％、62.1％(P＜0.05);不同浓度的XAV-939处理组的β-catenin、Cyclin D1 mRNA表达下降(分别为0.727±0.031、0.467±0.051、0.353±0.035、0.293±0.031,P ＜0.05;0.690 ±0.161、0.487±0.231、0.360±0.257、0.216±0.197,P ＜0.05),β-catenin、Cyclin D1蛋白表达下降而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升.结论 XAV-939可抑制以胃癌细胞株MKN-45的增殖,机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路.
关键词： 胃癌 Wnt/β-连环蛋白信号通路 细胞周期蛋白D1 -
微小RNA-30b-5p在前列腺癌组织的表达及其过表达对前列腺癌细胞增殖的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-30b-5p在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测41例前列腺癌组织及癌旁组织中miRNA-30b-5p的表达差异;分析上述组织中miR-30b-5p的表达与患者临床病理特征的关系.将人前列腺癌PC-3细胞分为空白对照组,阴性对照组及过表达组,分别进行转染,RT-qPCR法检测各组细胞中miR-30b-5p的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和细胞平板集落实验检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、β-连环蛋白([β-catenin)及细胞周期蛋白D1(Cyclin Dl)的蛋白表达.结果 前列腺癌组织中miR-30b-5p的表达(0.469±0.032)显著低于癌旁组织(0.997 ±0.016,t=14.499,P=0.000).miR-30b-5p低表达的患者在临床分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级G3 ～ G4级及Gleason评分≥8分者中所占比例明显高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期[65.2％ (15/23)与33.3％ (6/18),x2=4.108,P=0.043]、病理分级G1～G2级[72.7％ (16/22)与26.3％ (5/19),x2=6.145,P=0.013]、及Gleason评分≤7分[72.0％ (18/25)与18.8％ (3/16),x2=11.072,P=0.001]所占比例均明显增加,而不同年龄患者的miR-30b-5p低表达比例比较差异无统计学意义[54.5％ (12/22)与47.4％ (9/19),x2=0.210,P=0.647].转染后,过表达组miR-30b-5p的表达(4.088±0.229)显著高于阴性对照组(1.028±0.054,F=168.200,P=0.000).48 h及72 h时,过表达组A450值(0.308±0.040,0.512 ±0.033)显著低于阴性对照组A450值(0.494±0.035,0.840±0.037,F=6.514,P=0.001).过表达组细胞菌落数(14.400±2.227)显著低于阴性对照组(87.600±4.760,F=111.000,P=0.000).过表达组Ki-67、1β-catenin及Cyclin D1的蛋白表达(0.622±0.095、0.437±0.091、0.237±0.049)显著低于阴性对照组(1.681±0.062、1.067±0.188、0.665±0.083)(F=38.490、6.570、13.510,P=0.000、0.031、0.006).结论 miR-30b-5p在前列腺癌中低表达,过表达前列腺癌细胞中miR-30b-5p可减少癌细胞增殖,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
-
Wnt/β-连环蛋白信号通路在皮质骨和松质骨表达的差异
目的 探讨皮质骨和松质骨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及相关分子表达的差异.方法 通过小鼠在体和离体实验,观察皮质骨和松质骨Wnt/β-catenin通路及相关因子β-catenin、核心结合蛋白因子2(Runx2)、成骨相关转录因子抗体(Osterix)等表达水平的差异.结果 免疫组织化学结果显示小鼠皮质骨β-catenin、Runx2、Osterix阳性表达量均明显低于松质骨[(20.30±1.21)％比(25.80±1.10)％、(10.20±3.05)％比(19.51±2.03)％、(13.90±2.06)％比(23.74±3.33)％,P＜0.05].细胞免疫荧光和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)的结果与免疫组织化学结果一致.结论 皮质骨的Wnt/β-catenin信号通路及相关分子表达明显低于松质骨.
关键词： 皮质骨 松质骨 Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
高尔基磷酸化蛋白3基因过表达降低人结肠癌细胞对铂类化疗的敏感性及其机制
目的 探讨高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)基因过表达对人结肠癌细胞HT29顺铂化疗敏感性的影响及其机制.方法 将HT29细胞分为4组:对照组(HT29)、转染组[小干扰RNA(siRNA)-GOLPH3]、实验组1(10μmol/L顺铂)、实验组2(siRNA-GOLPH3+ 10 μmol/L顺铂).反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测人结肠癌细胞转染后的沉默效果.噻唑蓝(MTT)、瘤球形成实验、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞实验分别检测各组细胞增殖、成瘤、凋亡.Western blot检测各组细胞GOLPH3、P-糖蛋白(P-gp)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平.裸鼠随机分为4组,分别为裸鼠对照组(HT29+ NS)、裸鼠转染组(siRNA-GOLPH3 HT29+ NS)、裸鼠实验组1(HT29+顺铂)及裸鼠实验组2(siRNA-GOLPH3 HT29+顺铂),观察30 d内成瘤.结果 与对照组比较,转染组细胞中的GOLPH3 mRNA和蛋白的相对表达量明显降低(1.002±0.223比0.162 ±0.062;1.003±0.094比0.099±0.112)(P＜0.01),凋亡率明显升高[(1.843±1.298)％比(15.520±2.921)％,P＜0.01].在顺铂处理条件下,实验组2的A值(0.236 ±0.071)及瘤球数[(30.750±14.500)％]明显低于实验组1(0.746±0.085、212.800±30.380),而凋亡率明显高于实验组1[(59.400±2.392)％比(23.890±6.363)％,p＜0.01].裸鼠实验中转染组、实验组1、实验组2裸鼠腋窝皮下移植瘤体的体积均显著低于对照组[(1.738±0.121)、(1.573±0.224)、(0.625±0.189) mm3比(2.083±0.110) mm3],差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组1裸鼠自15d后其瘤体体积均大于同期实验组2裸鼠的瘤体体积(P＜0.01).与对照组比较,实验组1的GOLPH3、β-catenin、P-gp蛋白表达量同步升高(1.000±0.173比2.734±0.440,1.000±0.078比2.472±0.444,1.014±0.346比4.269±0.454)(P＜0.01).实验组2的GOLPH3、β-catenin、P-gp的蛋白表达水平较实验组1均明显降低(0.249±0.084比2.734±0.440;0.993±0.052比2.472±0.444;1.842±0.383比4.269±0.454)(P＜0.01).结论 GOLPH3基因过表达可通过激活Wnt/β-catenin细胞信号通路降低HT29结肠癌细胞对顺铂化疗的敏感度.
关键词： 高尔基磷蛋白3 结肠癌细胞 Wnt/β-连环蛋白信号通路 化疗敏感性 顺铂 -
多形性腺瘤基因样因子2在胃癌组织中的表达及其影响胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化的机制
目的 观察多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达,探讨其对胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的影响及分子机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌及相应癌旁组织和人胃癌MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901细胞株中的表达.将PLAGL2小干扰RNA (siRNA)转染SGC-7901细胞,Real-time PCR、Western blot检测PLAGL2mRNA和蛋白表达,Transwell侵袭实验检测敲低PLAGL2对细胞侵袭的影响,Western blot检测敲低PLAGL2对EMT相关分子标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子表达的影响.分别采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001和抑制剂XAV939处理转染PLAGL2-siRNA的SGC-7901细胞,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭变化.结果 PLAGL2mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达量(mRNA:1.11±0.27;蛋白:0.98±0.26)高于癌旁组织(mRNA:0.37±0.10;蛋白:0.28±0.11;t=-20.941,P＜0.01;t=-20.186,P＜0.01).PLAGL2mRNA和蛋白在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901中的表达量高于人胃黏膜正常细胞GES-1(mRNA:t=-12.327,P＜ 0.01;t=-19.812,P＜ 0.01;t=-13.080,P＜ 0.01;t=-15.218,P＜0.01;蛋白:t=-11.816,P＜0.01;t=-21.162,P＜0.01;t=-14.517,P＜0.01;t=-15.899,P＜0.01).转染后,SGC-7901的PLAGL2 mRNA和蛋白表达(mRNA:2.10±0.29;蛋白:1.96±0.27)较Control siRNA组(mRNA:6.61±0.73;蛋白:6.46±0.71)显著降低(t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01).转染24、48、72 h后PLAGL2-siRNA组侵袭细胞数[(30.75±5.74)、(48.75±6.90)、(64.50±4.80)个]较Control siRNA组[(51.00±4.97)、(75.75±4.92)、(132.50±5.57)个]显著减少(t=-1.000,P＜ 0.05;t=-1.000,P＜ 0.01;t=-1.000,P＜ 0.01),同时N-cadherin、Vimentin、β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)-7、c-Myc蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著增高(t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜ 0.01;t=-8.205,P＜ 0.01).此外,SKL2001能够逆转敲低PLAGL2对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用,XAV939则能够进一步加强以上作用.结论 胃癌组织PLAGL2表达上调,siRNA干扰PLAGL2可通过抑制Wnt/β-cateninn信号通路的激活和EMT抑制胃癌侵袭.
-
胃癌中组蛋白H3第4位赖氨酸及第27位赖氨酸乙酰化的表达及Wnt/β-连环蛋白信号通路活性改变对其表达水平的影响
目的 观察组蛋白H3第4位赖氨酸乙酰化(H3K4AC)及组蛋白H3第27位赖氨酸乙酰化(H3K27AC)在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达,并分析与临床病理特征的关系,探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路与组蛋白乙酰化修饰之间的相互关系.方法 首先利用组织芯片技术免疫组织化学的方法检测H3K4AC和H3K27AC在45例不同级别胃癌及其癌旁组织和10例正常胃黏膜组织中的表达.然后通过Western blot方法检测加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535及激活剂Wnt3a后组蛋白乙酰化表达的变化.结果 免疫组织化学结果显示H3K4AC在正常组织、癌旁组织及胃腺癌中表达阳性率分别为90.0％、88.9％、77.8％,H3 K27 AC表达阳性率分别为100.0％、95.6％、88.9％,结果提示与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中H3K4AC和H3K27AC表达水平明显下调(P＜0.05);H3K4AC在高分化、中分化、低分化胃癌中表达阳性率分别为100.0％、91.7％、69.2％,H3 K27 AC表达阳性率分别为100.0％、91.7％、84.6％,差异有统计学意义(P＜0.05).加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂后,H3K4AC及H3K27AC与对照组比较均出现表达下调(P＜0.05),而加入该通路激活剂后,目的蛋白则表现为上升趋势.结论 H3K4AC和H3K27AC在胃癌组织中呈低表达状态,并与肿瘤分化程度相关;Wnt/β-catenin信号通路活性改变可以调控组蛋白乙酰化的表达.
关键词： 组蛋白乙酰化 Wnt/β-连环蛋白信号通路 胃癌 -
GDF11对小鼠神经干细胞增殖及TGF-β/Smads、 Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响
目的 探讨生长分化因子11 (GDF11)对小鼠神经干细胞增殖及转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、Wnt/β-连环蛋白信号通路关键蛋白表达的影响. 方法 分离培养及诱导分化孕14 d CD1胎鼠大脑侧脑室下区的神经干细胞,采用免疫荧光染色鉴定神经干细胞特异性蛋白巢蛋白、SOX2,以及在诱导分化后鉴定神经元标志物神经核抗原(NeuN)和星型胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP).取第3代神经干细胞分为实验组和对照组,实验组添加GDF 11(终浓度40ng/mL),对照组添加等体积完全培养液.采用EdU法检测2组细胞增殖情况,采用Western blotting于培养1h、6h时检测2组细胞Smad2/3、磷酸化(p)-Smad2/3、Smad4、β-连环蛋白表达. 结果 免疫荧光染色显示90％以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性,诱导分化后部分细胞呈NeuN或GFAP阳性.细胞增殖实验显示:与对照组EdU阳性细胞比例(0.24±0.03)相比,实验组EdU阳性细胞比例(0.34±0.08)明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示:实验组p-Smad2/3、Smad4和β-连环蛋白表达在培养1h、6h时均明显高于对照组,差异均有统计学意义P＜0.05).结论 GDF11可在体外促进小鼠神经干细胞增殖,其机制可能与TGF-β/Smad、Wnt/β-连环蛋白信号通路激活有关.
-
经典Wnt/β-连环蛋白信号通路在膀胱癌发生与发展中的作用研究进展
膀胱癌是全世界九大常见的恶性肿瘤之一,具有多灶性、易复发性和较高死亡率的生物学特征.经典Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号参与调控肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭和凋亡.现就经典Wnt/β-catenin信号通路在膀胱癌发生、发展中的作用进行综述.
-
阿托伐他汀对动脉粥样硬化模型兔Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响研究
目的:研究阿托伐他汀对动脉粥样硬化模型兔Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路中调控因子Wnt1、β-catenin、蓬乱蛋白1 (dvl-1)的影响,探讨其作用机制.方法:取兔随机分为正常对照组、模型组(高脂饲料)、处理组(高脂饲料+阿托伐他汀2.5mg·kg-1·d-1),每组8只,各组兔给予相应饲料喂养,每日1次,12周后采血并处死,检测各组兔的血脂指标(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇),观察主动脉硬化斑块的程度,免疫组化法和蛋白质印迹法检测主动脉硬化斑块处Wnt1、β-catenin及dvl-1蛋白的表达情况.结果:与正常对照组比较,模型组和处理组血脂指标明显升高,主动脉硬化斑块的程度明显增强,Wnt1、-catenin及dvl-1蛋白的表达明显增强(P＜0.05)；与模型组比较,处理组血脂指标明显降低,主动脉硬化斑块的程度明显减轻,Wnt1、β-catenin及dvl-1蛋白的表达明显降低(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1、-catenin及dv1-1蛋白的表达来减轻动脉粥样硬化的程度.
关键词： 动脉粥样硬化 阿托伐他汀 兔 Wnt/β-连环蛋白信号通路
