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影响大鼠胚胎多巴胺能神经元原代培养因素的研究
目的试图通过方法改进获得高纯度原代多巴胺能神经元,并研究Matrigel及多聚左旋赖氨酸(poly-l-lysine,PLL)等不同基质对于大鼠胚胎13d中脑黑质神经元突起生长的不同作用. 方法无菌技术取得孕13d SD大鼠胚胎,采用改进的取材方法,得到胎鼠腹侧中脑细胞,以较高密度(1×105/cm2)分别种入由Matrigel及PLL作为基质的塑料培养皿中.体外培养5d后,对培养物进行TH免疫细胞化学染色,测量TH免疫反应突起的长度并计算TH免疫反应神经元占细胞总数的比例. 结果和结论 1.采用改进的方法,能够得到高纯度的多巴胺能神经元(多巴胺神经元占培养细胞总数的比例为15%);2.与PLL相比,Matrigel能有效地促进多巴胺能神经元突起的生长,但不能特异地促进中脑培养细胞的存活.
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多聚左旋赖氨酸协同超顺磁性氧化铁标记大鼠C6脑胶质瘤细胞
目的 观察多聚左旋赖氨酸(PLL)协同超顺磁性氧化铁(SPIO)对大鼠C6胶质瘤细胞的标记率及对标记细胞生物活性的影响.方法 将未标记的C6胶质瘤细胞设为对照组,25 mg/L SPIO(A组)、25mg,LSPIO+0.75mg,LPLL(B组)、50mg,LSPIO+1.5mg,LPLL(C组)标记的C6胶质瘤细胞设为实验组.各组细胞处理后分别培养6、24及48 h进行MTS细胞活性检测;普鲁士蓝染色评定标记率;3.0 T MRI GRE/30° T2*WI序列对各组细胞体外成像,比较R2*值及信号强度差异.结果 各实验组细胞处理后48 h均未见细胞活性显著降低(均P>0.05).普鲁士蓝染色显示B组、C组细胞标记率均达到98%以上,而A组约为70%,SPIO与PLL混合标记细胞随SPIO浓度增高染色程度逐渐加深.3.0T MRI体外细胞成像对标记细胞有较敏感的信号变化,对照组及A、B、C组R2*值分别为11.76±5.74、12.13±4.39、61.22±27.85、90.07±35.59,对照组与A组间R2*值差异无统计学意义(P>0.05);B、C组分别与其它各组间比较差异均有统计学意义,且此两组之间差异亦有统计学意义(均P<0.01).结论 PLL可增强SPIO对C6脑胶质瘤细胞的标记作用并对标记细胞活性未产生明显影响.3.0T MRI GRE/30°T2*WI序列对离体标记细胞有较敏感的信号变化,R2*值随着细胞内SPIO浓度的增加而增大.25 mg/L SPIO+0.75 mg,L PLL可获得满意的体外标记效果.
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多聚左旋赖氨酸对大脑皮层星形胶质细胞体外培养的影响
目的 探讨不同浓度多聚左旋赖氨酸(PLL)对体外培养大脑皮层星形胶质细胞(AS)的影响.方法 采用酶消法、差速贴壁获得大脑皮层AS细胞,细胞分为四组,分别种植于对照组(未包被PLL)、25 μg/mL PLL包被组、50 μg/mL PLL包被组、100μg/mL PLL包被组包被的培养瓶或板内,运用细胞计数检测细胞贴壁率及CCK检测法绘制原代细胞生长曲线;待细胞铺满瓶底,予振荡及传代法去除其他类型细胞.第三代AS,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光计数细胞纯度及CCK检测细胞活性.结果 细胞贴壁率随PLL包被浓度的增加而增加;原代AS生长曲线显示对照组生长速度较三组PLL包被组慢;除100μg/mL PLL包被组[(90±0.53)％]外,其余各组细胞纯化率均大于95％;对照组第4、6天细胞活性均明显低于各PLL包被组,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).结论 PLL能有效地促进AS的贴壁和生长,适宜包被浓度为25～50 μg/mL.
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新型骨髓干细胞富集材料富集骨髓细胞的效果
背景：骨髓干细胞富集材料是目前研究热点，制备并筛选一种新型骨髓干细胞富集材料对于组织工程学发展及临床应用至关重要。目的：制备并筛选一种骨组织工程新型骨髓干细胞富集材料，应用选择性细胞滞留技术观察其富集骨髓细胞的效果。方法：用预先制备的人脱钙骨基质与不同体积分数(0.01%，0.05%，0.1%，0.5%，1%)的多聚左旋赖氨酸复合制备多聚左旋赖氨酸-脱钙骨基质材料，应用选择性细胞滞留技术富集骨髓干细胞进行实验。激光显微共聚焦拉曼光谱分析、红外光谱分析鉴定材料成分；三维视频显微镜、扫描电镜观察富集材料孔径、孔隙率、表面及横断面超微结构；对富集前后骨髓有核细胞、纤维母细胞集落形成单位和血小板进行计数分析。结果与结论：多聚左旋赖氨酸-脱钙骨基质富集材料孔隙率高，孔隙内部有大量孔隙相互连通，材料内外表面有乳白色均匀致密的多聚左旋赖氨酸涂层覆盖，并在天然孔隙内形成更小、孔径较均匀的网孔结构。体积分数0.1%多聚左旋赖氨酸制备的富集材料对人骨髓有核细胞、纤维母细胞集落形成单位和血小板的浓度富集倍数分别为(3.18±0.31)、(5.25±1.40)和(3.88±0.68)倍，相应的黏附率分别达(53±12)%，(73±13)%和(34±10)%，对纤维母细胞集落形成单位的选择率为1.41±0.34。结果证实，实验制备并筛选的经多聚左旋赖氨酸修饰的脱钙骨基质具有天然骨海绵状支架网孔结构，对骨髓细胞的选择性滞留率高，是一种较理想的骨髓干细胞富集材料。
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PLL-DBM支架材料富集骨髓有核细胞的效果评价
目的 评价PLL-DBM支架材料富集骨髓有核细胞的效果.方法 用人脱钙骨基质(DBM)与不同浓度的多聚左旋赖氨酸(PLL)复合制备PLL-DBM支架材料.实验分组:A组:单纯DBM,B～F组分别是由0.01%,0.05%,0.1%,0.5%和1%的PLL与DBM制备的PLL-DBM.应用选择性细胞滞留技术观察PLL-DBM对骨髓有核细胞(NCs)的浓度富集倍数与粘附率.结果 ①PLL-DBM支架材料对人骨髓NCs浓度富集倍数与粘附率随着PLL浓度的增大而逐渐增加.②D组对人骨髓NCs浓度富集倍数为(3.18±0.31)倍,粘附率达(53±12)%,与A、B、C组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);与E、F组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PLL-DBM支架材料对骨髓有核细胞的富集效果与PLL浓度间存在一定的量效关系,随着PLL浓度的增大而逐渐增加;0.1%PLL制备的PLL-DBM(D组)在富集效果和制备成本上分别优于其它各组,是较理想的骨髓干细胞富集材料之一.
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新型骨髓干细胞富集材料的制备及其表征研究
目的 制备一种新型骨髓干细胞富集材料,并观察其表征.方法 用预先制备的人脱钙骨基质(DBM)与多聚左旋赖氨酸(PLL)复合制备富集材料.参照Zhang 氏液体置换法测定其密度与孔隙率;三维视频显微镜、扫描电镜观察其孔径、表面及横断面超微结构;拉曼光谱分析鉴定材料成分,并进行组织学观察.结果 经PLL修饰的DBM富集材料(PLL-DBM)密度为(0.27±0.02)g/ml,孔隙率为(73±11)%,孔径为(412.73±160.29)μm.孔隙内部有大量孔隙相互连通,PLL在材料内外表面形成均匀的乳白色涂层,并在天然孔隙内形成更小、孔径较均匀的网孔结构.结论 制备的PLL-DBM具有自体骨三维空间结构和促进细胞粘附的PLL,是一种较理想的骨髓干细胞富集材料.
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Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进
目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对PatrickBrown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进.方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面.设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中.结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用.结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性.
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多聚赖氨酸修饰的山羊脱钙骨富集骨髓干细胞的性能评价
目的 研究经多聚左旋赖氨酸修饰的山羊脱钙骨基质(demineralized bone matrix decorated with poly-L-lysine,PLL-DBM)的性能,为选择性细胞滞留技术(selective cell retention,SCR)提供一种对骨髓干细胞黏附性能良好的富集基质材料.方法 将取材于山羊股骨近端的松质骨去皮质理化处理制成脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),用多聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)对其进行修饰.扫描电镜分析其显微结构;氨基酸成分分析检测PLL与DBM的复合情况;通过纤维母细胞集落形成单位(CFU-F)计数,检测山羊PLL-DBM对骨髓干细胞的富集效果;在山羊横突间融合模型中,通过X线片及组织学评价其成骨能力.结果 PLL-DBM具有天然网状孔隙结构系统,空隙内修饰有PLL形成的蜘蛛网样结构;PLL与DBM能较好地复合;山羊PLL-DBM对骨髓干细胞富集效果明显优于空白DBM(P<0.01).PLL-DBM的成骨能力与自体髂骨相当.结论 山羊PLL-DBM对骨髓干细胞有较好的富集效果,成骨能力强,是一种理想的富集基质材料.
