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酶联免疫吸附法测定三种CTB与其受体GM1的亲和性
霍乱毒素(cholera toxin,CT)是霍乱弧菌产生的相对分子质量为84 kD的肠毒素,由1个A亚单位(CTA)和5个B亚单位(CTB)形成的五聚体共价连接而成.CTA(大约28 kD)为毒性亚单位,CTB(大约12 kD)为无毒的受体结合亚单位,可以和所有有核细胞膜上的单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)结合.CTA则通过CTB与GM1的结合作用得以进入细胞发挥其毒性级联反应[1,2].目前,CTB已作为载体蛋白广泛用于基础研究.本文采用ELISA法测定了两种国产CTB与其受体GM1之间的亲和性,并与国际标准品CTB进行了比较.
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Hyper-IL-6基因转染的肝癌细胞株的建立及生物学特性的观察
IL-6是一种具有广泛生物学活性的细胞因子,近年曾有学者应用基因瘤苗的方法治疗肿瘤并取得一定的效果.Hyper-IL-6是Fischer等依据已知的关于IL-6受体的结构信息设计的一种“设计细胞因子”,即将人类IL-6基因与截短形式的可溶性IL-6受体基因通过基因操作共价连接,并在真核细胞进行表达得到的一种具有超高效IL-6活性的融合蛋白.本研究我们建立了稳定表达Hyper-IL-6的小鼠肝癌细胞克隆株,同时观察其生物学特性的改变.
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肝素酶及其抑制剂在肿瘤转移中的作用
阻止肿瘤细胞扩散与转移的细胞外基质和基底膜屏障,主要由结构蛋白(包括胶原蛋白、层粘蛋白与玻璃体结合素等)和糖氨聚糖2种成分构成.糖氨聚糖的主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proglycan,HSPG),HSPG主要由1个核心蛋白和数个与之共价连接的线性硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链组成.在过去十几年中,有关肿瘤转移机制的研究大多集中在底物为结构蛋白的一些蛋白酶(如基质金属蛋白酶、胶原蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶等)上,而对以糖氨聚糖为底物的肝素酶(heparanase)的研究则为多数学者所忽视.
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乙酰肝素酶在中枢神经系统表达调控的研究进展
乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)是哺乳动物体内唯一能降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfateproteoglcans,HSPGs)的β-D-葡萄糖醛酸内切酶.HSPGs是细胞表面、基底膜和细胞外基质中重要的多聚糖成分.主要由一个核心蛋白和数个与之共价连接的线性硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链组成.HS通过特殊的位点与基底膜和细胞外基质中的Ⅳ型胶原、纤粘连蛋白以及层粘连蛋白结合并相互作用.
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口蹄疫病原免疫学的分子基础
FMDV属于微RNA病毒科,口蹄疫病毒属成员,是一种单股正链RNA病毒.基因组长度约为8 500 nt, 5'端共价连接一种特殊的小蛋白VPg(3B),其后为一个约1 300 nt的5'非编码区,与宿主RNA相比,FMDV的5'非编码区没有帽子结构,而是靠一个内部核糖体进入位点(IRES)启动基因组的复制;3'端含有poly(A)的尾巴,尾巴上游为100 nt的非编码区.5'非编码区和3'编码区之间为一个大约7 500 nt 的开放阅读框(ORF),编码一个2 300 aa多聚蛋白,这个多聚蛋白在感染细胞中或体外翻译体系从未发现,因为其被病毒编码的蛋白酶迅速裂解,这个蛋白酶也存在于多聚蛋白中.
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脂磷壁酸相关新研究进展
脂磷壁酸(LTA)是革兰阳性细菌特征性的膜结合聚合物,是由16~40个磷酸二酯键连接的磷酸甘油残基与1个膜载体(通常为一种糖脂或糖磷酸酯)共价连接的线性聚合物.LTA的基本生理功能为调节自溶素的活性,清除二价阳离子(如镁离子),改变细胞壁的电荷性质从而影响细菌与宿主细胞间的相互作用.以往对LTA的研究已证实其除了具有抗微生物、抑制肿瘤细胞(尤其是胃肠道肿瘤)、免疫调节、抗氧化、抗衰老等积极作用外,也具有一定的消极作用,但相关的机制尚不明确,对其相关疾病的研究亦较少.近年来,国内外学者对LTA进行研究,以下对此作一综述.
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胰岛素样生长因子-Ⅰ受体蛋白在瘢痕疙瘩中的表达
研究发现胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ能降低烧伤后增生性瘢痕中成纤维细胞合成胶原酶mRNA的水平和胶原酶的活性[1].IGF-Ⅰ的功能主要靠与IGF-Ⅰ受体(IGF-Ⅰ R)结合来介导完成.成熟的IGF-Ⅰ R由4个亚基(α2β2)组成.位于细胞外的α链具有配体结合部位,通过二硫键与β链共价连接.β链有跨膜和胞内部分,具有酪氨酸激酶活性部位.本研究主要观察正常成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞中IGF-Ⅰ Rα亚单位的表达,以进一步探讨IGF-Ⅰ和IGF-Ⅰ R通路在瘢痕疙瘩形成中的作用.
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肝素酶与肿瘤转移
肿瘤细胞的侵袭、转移必须具备两个条件[1]:(1)肿瘤血管生成;(2)肿瘤细胞穿越由细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)和基底膜(basement membrane,BM)组成的屏障.该屏障主要由2种成分构成:一是结构蛋白;二是糖氨聚糖.其主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfate proteoglycan,HSPG).HSPG主要由一个蛋白核心和数个与之共价连接的线性硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链组成,参与一系列生理和病理过程[2].
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恶性肿瘤与Lumican的关系研究进展
基膜聚糖(Lumican)是一种蛋白聚糖,隶属于富含亮氨酸低分子蛋白聚糖(SLRP)家族[1],早在牛角膜基质中发现[2].和其他SLRP蛋白一样,Lumican在结构上主要由4个结构域组成:(1)16个氨基酸残基构成的信号肽;(2)N端结构域,包含硫化酪氨酸及二硫键;(3)用于蛋白质相互作用的亮氨酸高度重复的分子结构;(4)羧基端结构域,包含两个保守半胱氨酸残基.根据其聚糖修饰形式的不同,Lumican以核心蛋白共价连接未硫酸化的聚乙酰氨基乳糖的糖蛋白形式和核心蛋白共价连接硫酸化的硫酸角质素侧链的蛋白聚糖形式存在[3].
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以共价连接法使抗原固相化制备酶联免疫吸附测定试剂的研究
目的 通过共价法使抗原固相化减小抗原-抗体反应空间位阻,提高酶联免疫吸附测定(ELISA)灵敏度.方法 用含1%鱼明胶和0.2%的多聚赖氨酸的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(pH 9.5)溶液封闭反应板,以溴化氢溶液在pH 11.0环境下活化海藻糖,然后使海藻糖的活化基团连接在固相蛋白的-NH2上,以同样原理将重组人丙型肝炎病毒抗原接到海藻糖上,后加入甘氨酸封闭未反应的海藻糖的活化基团.结果 共价连接法建立的检测系统比吸附法建立的检测系统灵敏度提高约1~2个滴度.结论 共价连接法可降低酶联免疫检测过程中抗原-抗体结合空间位阻并提高检测灵敏度.
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Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进
目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对PatrickBrown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进.方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面.设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中.结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用.结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性.
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Ⅰ型单纯疱疹病毒载体在中枢神经系统基因治疗中的应用
Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是一种基因组为152 kb的双链线状DNA病毒,由共价连接的长片断(L)和短片断(S)组成.HSV-1具有天然嗜神经性,可感染非分裂细胞,同时能进入感觉神经元突触末端并逆轴突到达胞体,然后在神经元中建立长期稳定静止的潜伏状态.由于其在已知的84 kb基因中约一半为非必需基因,适合大片断外源基因的插入,同时因为熟悉该病毒的生活周期,构建载体相对容易.HSV-1是唯一能在神经元内保持潜伏状态而不被激活的病毒载体,仅以病毒相关启动子1(LAPI)进行转录,因此HSV-1是第一个显示其大量克隆能力,并可获得目的基因的长期表达的载体,其嗜神经性对于开展神经系统基因治疗具有十分诱人的前景.