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整合素-β1在层黏连蛋白促进施万细胞合成细胞外基质过程中的作用
目的 探讨整合素-β1在层黏连蛋白(LN)促进施万细胞(SCs)合成细胞外基质(ECM)过程中的作用.方法 体外培养10只SD大鼠来源的SCs,经外源性LN 处理后,双重免疫荧光细胞化学法检测LN和整合素-β1的表达情况,免疫印迹法检测SCs内黏着斑激酶(FAK)的磷酸化水平.用抗体Ha2/5封闭细胞表面受体整合素-β1,再经外源性LN 处理后,免疫印迹法检测FAK的磷酸化水平变化,免疫荧光细胞化学法检测SCs合成LN、着位素、Ⅳ型胶原等ECM成分的变化.结果 经外源性LN处理后,SCs内LN和整合素-β1均有阳性免疫反应,且局部共表达,SCs内FAK的磷酸化水平增加.封闭细胞表面受体整合素-β1后,SCs内FAK的磷酸化水平明显下降,SCs内LN、着位素、IV型胶原等ECM成分的表达和分布未见明显改变.结论 LN能与SCs表面受体整合素-β1相结合,激发细胞内整合素-β1依赖的FAK磷酸化途径,但LN促进SCs合成ECM的作用并不依赖于整合素-β1介导的信号途径.
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整合素β1在肝纤维化中的表达
目的:观察黏附分子整合素β1在肝纤维化中的表达情况.方法:实验于2005-03在上海市第十人民医院中心实验室完成.①实验分组:雄性SD大鼠20只,随机分为肝纤维化模型组10只和正常对照组10只.②实验干预:正常对照组不给予任何干预措施正常喂养,肝纤维化模型组给予400 g/L CCl4 7.5 mL/kg腹壁皮下注射造模,于造模后12周处死动物,取1 cm×1 cm×1 cm肝组织备用.③指标检测:反转录-聚合酶链反应半定量检测整合素mRNA在肝组织中的表达;常规苏木精-伊红染色了解肝纤维化的程度.结果:20只大鼠均进入结果分析.①整合素在正常肝脏和肝纤维化阶段均有表达;正常对照组整合素β1的表达量低于模型对照组(66.81±4.36,83.39±4.04,P＜0.01).②肝纤维化模型组大鼠肝组织可见肝细胞广泛的变性坏死,正常小叶结构消失.在高倍镜下可见纤维隔形成.结论:整合素β1在正常和病理肝脏均有表达,在肝纤维化过程中表达明显增高.
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整合素-β1在转化生长因子-β2诱导晶状体上皮细胞转化中的作用
目的 探讨整合素-β1(integrin β1)在转化生长因子-β2( TGF-β2)体外诱导晶状体上皮细胞(HLECs)向肌成纤维细胞转化中的作用.方法 体外培养的HLECs,选择传3代的细胞进行实验,以TGF-β2作为诱导剂.免疫荧光方法检测HLECs integrin β1、E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达,RT-PCR方法检测E-cadherin和α-SMAmRNA的表达.其中部分细胞预先加入去整合素kistrin孵育1h,再加入TGF-β2刺激细胞48h.结果 TGF-β2处理晶状体上皮细胞后,integrin β1、α-SMA和F-actin的表达明显增强,细胞E-cadherin表达明显减弱.加入去整合素kistrin后,细胞α-SMA和F-actin的表达明显减弱,细胞E-cadherin表达明显增强.结论 TGF-β2诱导了HLECs转分化,整合素-β1参与了TGF-β2诱导的HLECs向肌成纤维细胞的转化过程.
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皮肤干细胞在胎皮中分布的免疫组织化学研究
目的 采用免疫组织化学方法研究不同时期胚胎皮肤中的干细胞,分析皮肤干细胞的形态、分布特点及发育过程中在胎儿皮肤中的迁徙、增殖分化特征,探讨皮肤干细胞与皮肤发生发育的关系.方法 不同发育时期胎儿皮肤,取材、固定、制成石蜡切片,SP法检测整合素-β1、角蛋白19(K19)、K14、K10和PCNA的表达.结果 胚胎发育期可见整合素-β1阳性的细胞在基底层散在分布.随胎龄增加,整合素-β1表达减弱,表达范围减小.同时,胚胎发育的不同阶段K19均在表皮基底层强烈表达.表皮分层期后,K14阳性细胞从基底层向上延伸至亚基底层.而K10作为表皮终末分化细胞的标志,主要分布在表皮的中层和外层.此外,在毛囊发育过程中,胎皮表皮嵴的细胞相互聚集成团,形成毛囊初级原基,表达整合素-β1、K19、K14及PCNA为阳性.随着毛囊的形成、成熟,皮肤干细胞主要聚集在与表皮相延续的外根鞘、毛囊隆突部及毛母质,表达整合素-β1、K19、K14和PCNA为阳性.结论 (1)皮肤的发生、发育与角蛋白的程序性改变密切相关;(2)毛囊的发生、发育受到毛乳头的诱导作用.毛囊成熟期后,皮肤干细胞主要迁移至与表皮相延续的外根鞘、毛囊隆突部及毛母质等处.此外,还发现毛乳头及其周围组织内分布着单核样细胞表达整合素-β1、K19和K14为阳性.
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胃癌患者血清选择素-E和整合素-β1及细胞间黏附分子-1表达水平的临床意义
目的研究血清选择素-E(E-selectin)和整合素-β1(integrin β1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达水平的临床意义.方法应用酶联免疫吸附法 (ELISA)技术检测 47例健康人(对照组)和 57例胃癌患者(胃癌组)术前及术后7d血清 E-selectin、integrin β1和 ICAM-1含量,并进行对照.结果胃癌组患者术前血清E-selectin、ICAM-1及integrin β1均高水平表达,阳性率分别为 24.6%、33.3%和 28.1%. ICAM-1和 integrin β1显著高于对照组(均 P< 0.01);但 E-selectin水平两组比较无统计学意义(P=0.64).其术前的表达水平与胃癌分期、胃壁浸润、淋巴结转移和远处转移存在显著相关性(P<0.05或P<0.01).肿瘤根治性切除的患者3个黏附分子的血清浓度显著降低;而无法手术切除的患者,其水平几乎保持不变;其高水平表达是患者预后的显著预测因子,但不能单独评估肿瘤分期.结论血清 E-selectin、ICAM-1和Integrin β1表达水平可以反映肿瘤的病理进展及转移情况.
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三氧化二砷对慢性粒细胞白血病患者骨髓间质干细胞整合素-β1表达的影响研究
目的 体外观察不同浓度三氧化二砷(ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间质干细胞(BMSCs)整合素-β1表达水平及生长的影响,探讨ATO对CML患者BMSCs可能发生的作用及相关机制.方法 抽取慢性期CML患者骨髓液,分离单个核细胞行BMSCs体外培养,取第3、4代BMSCs,用不同浓度ATO处理,48 h后提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应法检测整合素-β1 mRNA表达水平,72 h后观察BMSCs形态.结果 ATO可抑制CML患者BMSCs体外生长,并呈浓度依赖性;对照组BMSCs整合素-β1基因表达水平为0.123±0.041,BMSCs在1.0 μmol/L及2.5 μmol/L浓度ATO作用下整合素-β1 表达升高,分别为0.658±0.129和0.426±0.090,5.0 μmol/L浓度ATO可明显抑制整合素-β1 表达(0.041±0.020).结论 不同浓度ATO对BMSCs 整合素-β1表达存在不同影响,对整合素-β1表达变化的干预有可能成为该类疾病新的治疗靶向.
