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PACAP对神经系统疾病保护作用的研究进展
垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)存在于中枢神经系统内,作为神经递质、神经调质、神经营养因子及生长因子通过多种途径发挥神经保护作用.对脑缺血-再灌注损伤、创伤性脑损伤、精神分裂症、焦虑症、帕金森病、阿尔茨海默病等重大疾病具有重要的神经保护作用.本文就PACAP对神经系统疾病的保护作用及其机制的研究进行综述.
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PACAP对创伤性脑损伤大鼠CD4+/CD8+T细胞水平的影响
目的 观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activiting polypeptide,PACAP)对大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)的影响及对血液和脾脏CI4+、CD8+T细胞数量的影响.方法 所有实验均在在江苏省麻醉学重点实验室内完成.将雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(n=6)、生理盐水+ TBI组(n=6)、PACAP+TBI组(n=6),采用大鼠创伤性脑损伤模型,于创伤前20min侧脑室微量注射PACAP 1μg/5μl,创伤后24h取材,采用HE染色方法观察脑组织损伤程度,采用流式细胞术检测各组大鼠血液及脾脏中CI4+、CD8+T细胞的数量.实验结果采用完全随机设计方差分析法.结果 与假手术组比较,TBI大鼠创伤周围皮层神经元水肿、坏死,海马神经元排列紊乱,血液和脾脏CI4+T细胞的数量减少(P=0.000,P =0.005),CD8+T细胞的数量增加(P=0.01)；侧脑室内微量注射PACAP后,能明显减轻TBI大鼠皮层和海马的神经元损伤,增加血液和脾脏CD4+T细胞的数量(P=0.019,P=0.839),降低CD8+T细胞的数量.结论 侧脑室微量注射PACAP能减轻大鼠创伤性脑损伤,可能与其对T细胞影响有关.
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血小板活化因子对大鼠卵巢颗粒细胞垂体腺苷酸环化酶激活肽mRNA表达的影响及调节机制
目的:探讨血小板活化因子(PAF)对大鼠卵巢颗粒细胞垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)mRNA表达的影响及其可能调节机制,旨在寻找PAF在卵巢中的作用靶点.方法:原代培养卵巢颗粒细胞,用放射免疫分析(RIA)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测颗粒细胞雌二醇分泌情况及其PACAPmRNA表达变化.结果:PAF对PACAPmRNA表达无明显影响,但与hCG共同作用可促进PACAPmRNA的表达.Forkolin可使PACAP mRNA表达升高.结论:PAF可通过对hCG的允许作用间接促进大鼠卵巢颗粒细胞PACAP mRNA表达,hCG的促进作用可能是通过cAMP-PKA途径介导的.
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垂体腺苷酸环化酶激活肽拮抗lactacystin细胞毒性的作用
背景：帕金森病的发病机制未明确，目前尚没有有效的治疗方法能从根本上阻止其病程进展。目的：分析垂体腺苷酸环化酶激活肽对lactacystin诱导的帕金森病多巴胺能PC12细胞凋亡的影响及其分子机制。方法：用神经生长因子将 PC12细胞诱导分化成神经元的细胞模型，经不同浓度泛素-蛋白酶体抑制剂lactacystin处理，分别作用不同时间，取细胞存活约为50%的lactacystin作用浓度与时间，建立帕金森病细胞实验模型。实验分组：对照组、lactacystin组、垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27干预组(干预1组)、垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27和垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27共同干预组(干预2组)。观察各组细胞形态变化；MTT法检测细胞活力；免疫印迹(Western blot)法检测内质网应激特异性蛋白caspase-12的表达情况。并观察垂体腺苷酸环化酶激活肽1-26及垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27对lactacystin毒性作用的影响。结果与结论：不同浓度及作用时间的 lactacystin 处理 PC12细胞后，细胞活力呈浓度及时间依赖性下降，其中lactacystin 20μmol/L作用24 h使细胞活力下降约50%。在相同的lactacystin作用条件下(20μmol/L，24 h)，与对照组比较，lactacystin组细胞发生损伤性改变，细胞活力降低，caspase-12活性明显升高(P<0.01)；与lactacystin 组比较，干预1组细胞损伤性改变明显好转，细胞活力增强，下调凋亡蛋白 caspase-12的表达(P <0.01)。干预2组细胞状态则明显不如干预1组，与lactacystin组相差不大。结果提示泛素-蛋白酶体抑制剂lactacystin引起内质网应激导致细胞损伤；垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27通过调节上述信号通路发挥保护作用。而作为垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27的受体拮抗剂，垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27则减弱了垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27的这一作用。
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PACAP mRNA在大鼠排卵过程中的表达与调节
目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)mRNA在排卵过程中的表达情况与调节其表达的因素.方法采用RT-PCR对PACAP mRNA在使用外源性激素诱导的大鼠排卵过程中的表达变化进行研究,并在体外培养的排卵前卵泡颗粒细胞中分析了不同处理因素对其表达的影响.结果对预先用孕马血清(PMSG)处理的未成年大鼠给予hCG发现,给予hCG 4～12h期间,PACAP转录水平持续升高,其表达水平在给予hCG4h后达高峰.对体外培养的排卵前卵泡颗粒细胞的研究结果分析显示,与对照组相比hCG和hCG+PAF能提高颗粒细胞PACAP mRNA水平.结论 PACAP mRNA在排卵前卵泡呈瞬时性高表达,提示了PACAP可能在排卵过程中发挥重要作用.hCG能促进PACAP的转录,并且PAF可加强这种促进作用.
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垂体腺苷酸环化酶激活肽对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响
目的:研究垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响.方法:将大鼠随机分为不同浓度PACAP治疗组:P8组(1×10-8mol/L),P10组(1×10-10mol/L),P12组(1×10-12mol/L);对照组.免疫荧光双标观察BrdU+/NSE+及BrdU+/GFAP+细胞的表达变化.结果:各组BrdU+/NSE+及BrdU+/GFAP+细胞7d时较少,14d显著增加,28d时高,PACAP治疗组高于对照组(P<0.01);P8组高于P10组,P12组(P<0.05).结论:PACAP具有诱导神经干细胞分化的作用,以1×10-8mol/L为佳浓度.
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越鞠丸对帕金森病体外模型的神经保护作用研究
目的：研究越鞠丸醇提物（YJ-E）对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶离子（MPP＋）所致大鼠嗜铬细胞（PC12）损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法 PC12细胞给予1 mmol／L MPP＋，制备帕金森病（PD）离体模型。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力，Hoechst染色法观察细胞凋亡，观察 YJ-E对 PC12细胞的保护作用。应用 Western blotting检测垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）的表达及细胞外调节蛋白激酶（ERK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的磷酸化水平。结果3个浓度1．0、2．0、4．0 mg／mL的 YJ-E均能显著改善 MPP＋模型中 PC12细胞的存活（P＜0．01），而对正常 PC12细胞的存活无显著影响（P＞0．05）。同时 YJ-E可显著上调 MPP＋模型中 PC12细胞 PACAP的表达（P＜0．01），并且显著上调ERK、CREB的磷酸化（P＜0．01）。结论 YJ-E对 MPP＋模型中的PC12细胞具有保护作用，其机制可能是通过上调 PACAP的表达及其下游 ERK、CREB的磷酸化。
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垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血-再灌注后IL-1β表达的影响
目的 探讨PACAP对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后脑保护作用及保护机制.方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,对36只大鼠随机分为假手术组、缺血-再灌注组和PACAP组,在大鼠脑缺血2h后进行12h、24h再灌注,比较光镜下细胞损伤变性程度,应用免疫组化法检测IL-1β的表达.结果 PACAP组大鼠脑标本光镜下细胞损伤变性程度与缺血-再灌注组相比明显减轻;IL-1β灰度值PACAP组分别为120±5、114±4,与缺血-再灌注组178±4、162±6比较,有显著性差异(P<0.01).结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血-再灌注时IL-1β的表达,可能是其脑保护作用之一.
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垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后诱导性一氧化氮合酶表达的影响
目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注时氧化氮合酶(iNOS)在PACAP脑保护机制中的作用.方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,对36只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PACAP组,在大鼠脑缺血2h后进行24h、48h再灌注,应用免疫组化法检测脑组织iNOS的表达.结果 脑缺血再灌注后,与假手术组比较,iNOS的表达量显著增加,阳性细胞数分别为60.02±4.23、80.36±6.24,P<0.01;应用PACAP后与缺血再灌注组比较,iNOS表达的峰值明显降低,分别为30.47±5.24、40.56±4.84,P<0.01.结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注时iNOS的表达,这可能是其脑保护作用之一.
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垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子表达的影响
目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注时ICAM-1在PACAP脑保护机制中的作用.方法 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,对54只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PACAP组,在大鼠脑缺血2h后进行再灌注.在再灌注2h、24h、48h,应用免疫组化法检测脑组织ICAM-1的表达.结果 局灶性脑缺血再灌注后,与假手术组比较,ICAM-1的表达量显著增加,灰度值分别为2h:128.67±1.51(P＜0.05)、12h:168.67±2.66(P＜0.01)、24h:173.17±2.51(P＜0.01);应用PACAP与缺血再灌注组比较,ICAM-1表达的峰值明显降低,灰度值分别为123.00±2.98、143.67±2.42、144.67±3.01(P＜0.01.结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注时ICAM-1的表达,进而抑制炎症反应,这可能是其脑保护作用之一.
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针刺抗焦虑的PACAP及其受体PAC1的机理探讨
焦虑障碍为常见的心理障碍疾病之一,其发病机制较为复杂.研究表明,脑内PACAP及其受体PAC1有致焦虑的效应.针刺常以神门、内关穴为主,治疗焦虑的疗效显著,但其调节焦虑障碍的PACAP及PAC1相关机制研究,目前尚未见报道.故本文拟从PACAP及PAC1的生理功能、焦虑障碍与PACAP及PAC1关系、针刺可良性调节焦虑障碍、针刺神门、内关调节焦虑障碍的PACAP及PAC1机理分析这四个方面,探讨针刺神门、内关穴治疗焦虑障碍的PACAP及PAC1相关机理,拟为针刺抗焦虑的进一步机制研究提供新思路.
