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固定时间对不同组织染色的影响
有关冷冻切片的质量,多数文章都是在比较不同的固定液对冷冻切片质量的影响,而我们的体会是多种组织在不同固定时间的染色质量有所不同.冷冻切片的固定时间一般为10 -20 s[1].我们选取日常常用的、容易配制的3％冰醋酸乙醇固定液,对10s、30 s、l min、2 min、3 min不同同定时间冷冻切片的HE染色效果进行了比较,以期探讨几种常见组织冷冻切片染色效果佳的固定时间.
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标本固定时间对免疫组化染色结果的影响
目前常用的组织标本固定剂是4%甲醛液,其甲醛醛基交联封闭抗原作用对免疫组化染色的影响是众所周知的.在适宜的固定时间内可使抗原保存完好,固定时间过短或过长则免疫组化染色减弱以至消失.本文选择23个固定时相点的人体正常胃组织标本,用7种常用抗体进行标记,试图进一步证明固定时间对免疫组化染色结果的影响,寻找适用于多数抗原表达的组织固定时间段,为提高免疫组化染色方法的准确性和稳定性提供参考依据.
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固定时间对乳腺癌快速冰冻切片免疫组化结果的影响
目的：分析固定时间对乳腺癌冰冻切片免疫组化结果的影响，探寻佳的固定时间。方法利用AAF固定液(配方为丙酮85 mL、冰醋酸5 mL、40%甲醛10 mL)以1 min、2 min、4 min、6 min、8 min、10 min、12 min、15 min不同时间对乳腺癌组织冰冻切片进行固定，然后利用6种乳腺癌相应抗体进行免疫组化染色，根据2004-2008年全国十次免疫组化质控活动所用的免疫组化质控评分标准对图像质量进行评分量化。结果固定时间可以直接影响乳腺癌冰冻切片免疫组化图像的质量，佳的固定时间为6～8 min。结论对乳腺癌冰冻切片固定6～8 min可取得质量高的免疫组化结果。
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固定时间对口腔黏膜鳞状细胞癌组织染色的影响
目的 探讨固定时间对口腔黏膜鳞状细胞癌组织HE染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色的影响.方法 选取10例患者口腔黏膜鳞状细胞癌组织,每例各取4块,分别固定8 h、24 h、48 h和1周,进行HE染色和高分子量细胞角蛋白(cytokeratin high molecular weight,CKH,克隆号34βE12)和广谱细胞角蛋白(cytokeratin pan,ckpan,克隆号AE1/AE3)IHC染色,观察细胞形态的优良、染色情况及IHC染色的阳性强度和阳性率.结果 HE染色和IHC染色结果 均显示口腔黏膜鳞状细胞癌组织形态和染色、阳性强度和阳性率佳为固定24 h,8 h为差.固定1周者染色效果较48 h差.结论 本研究表明对口腔黏膜鳞状细胞癌组织,24 h为佳固定时间;组织固定不充分对HE染色和IHC染色的影响要大于固定时间过长的影响;固定时间越长,对HE染色和IHC染色效果影响越大.
关键词： 10％中性甲醛 固定时间 HE染色 免疫组织化学(IHC)交联 -
家兔固定时间对热原试验结果的影响
目的分析家兔固定时间对热原试验结果的影响.方法按照<中国生物制品规程>2000年版的生物制品热原质试验规程进行.结果按规定测量6次体温,制品均合格,而延长测温2h,变为不合格和复试的制品批次占总试验批次的30.8%,且存在显著性差异(P＜0.05).结论家兔固定时间过长可致热原试验结果出现误差.
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不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响
目的 针对不同的抗原修复液与时间对免疫组化所产生的影响进行探讨.方法 取出26例乳腺浸润性导管癌标本试样.其中的每例中附着4个时间点,这四个时间点组分别为:立即固定组,延迟12小时固定组,延迟24小时固定组和延迟48小时固定组.依次对所选取4块肿瘤组织,在肿块部位进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片等相关操作,利用行HE染色方法验证试验中的肿瘤组织,再通过抗原修复液展开免疫组化验证实验.结果 CK7、ER和C-erbB-2在4组试样在不等的时间和不同的抗原修复液的乳癌组织间表现出了不同的效果,并且结果的差异可以从统计学角度进行分析.结论 在本实验中,所进行延迟固定的组织,在通过充分固定和进行选取抗原修复液A[高温高压EDTA(pH9.0)缓冲液修复)]、抗原修复液B[高温高压EDTA(pH8.0)缓冲液修复]、抗原修复液C[高温高压柠檬酸盐(pH6.0)缓冲液修复]和抗原修复液D[微波炉EDTA(pH9.0)缓冲液修复法]的前提下能够进行免疫组化检测,但需要注意的是尽量减少和避免延迟固定时间.
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基于琼脂糖膜为载体的抗体芯片工作条件的优化
目的:优化以琼脂糖修饰的玻片为载体的抗体微阵列的制备方法,提高微阵列信噪比及检测灵敏度.方法:选取单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为待检的靶蛋白,在琼脂糖膜上首先固定MCP-1捕获抗体,经过洗涤、封闭,然后依次加入标准抗原、生物素标记的检测抗体以及亲和素标记的cy3,分别孵育、洗涤后,激光共聚焦扫描仪扫描获取图像,分析各点的荧光强度,根据荧光强度确定捕获抗体的佳固定时间、温度以及适宜的洗涤缓冲液.结果:与4、37 ℃过夜固定相比,捕获抗体室温(25 ℃左右)过夜固定时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性高;捕获抗体过夜固定比固定2 h获得更高的检测灵敏度;另外,通过比较相同pH值不同溶质缓冲液的洗涤效应,pH 7.4的缓冲液PBST可获得更优信号强度.结论:本研究优化了以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列的反应条件,提高了微阵列的检测灵敏度.
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长时间甲醛固定的大鼠视网膜组织胰蛋白酶消化方法探讨
目的探讨长期甲醛固定的大鼠视网膜胰蛋白酶消化的佳消化时间和佳胰蛋白酶浓度。方法健康♂ SD大鼠，颈椎脱臼处死，摘取眼球，放入4％甲醛固定液，固定时间为2 d、2周、4周、3月、5月、7月。分离固定不同时间的视网膜，放入3％、6％、9％胰蛋白酶消化，37℃恒温箱孵育。分别记录固定不同时间的视网膜在3％、6％、9％胰蛋白酶中消化完全所需时间。铺片操作，行 PAS 染色。显微镜下记录视网膜消化情况。结果新鲜眼球常规固定48 h，3％胰蛋白酶37℃消化3.5 h，视网膜消化完全。对于甲醛固定2周及1月的大鼠眼球，采用常规胰蛋白酶浓度（3％），仅延长胰蛋白酶的消化时间至9 h 及14 h，可以达到常规固定组织的消化效果。对于固定3月的大鼠眼球，采用常规浓度的胰蛋白酶仅延长消化时间至22 h，同样可以得到完整的视网膜血管铺片，且提高胰蛋白酶浓度对于缩短视网膜消化时间的影响不大。而对于固定5～7月的大鼠眼球，6％和9％浓度的胰蛋白酶可以在一定程度上缩短视网膜消化的时间至22 h 和28 h，有利于得到相对完整的视网膜血管。结论固定时间短于3月的眼球组织，采用3％胰蛋白酶消化，延长消化时间可达到佳消化效果。对于固定5～7月的视网膜组织，不仅需要延长消化时间，还需要通过提高胰蛋白酶浓度至6％，才可以获得佳消化效果的视网膜血管。
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固定时间对原位杂交的影响
目的 研究组织固定时间对原位杂交的影响.方法 选择了18个固定时间点的胃癌组织标本,用两种探针进行原位杂交实验.结果 固定时间为8～24 h胃癌组织胞核阳性细胞个数及平均光密度为(84/0.40),明显高于其它组;固定时间为6～16 h胃癌组织胞浆阳性细胞个数及平均光密度为(84/0.40),明显高于其它组.结论 胃癌组织胞核阳性佳固定时间为8～24 h,胃癌组织胞浆阳性佳固定时间为6～16 h.
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固定时间不同的大鼠视网膜血管铺片酶消化技术改进研究
目的 探索固定时间不同的大鼠视网膜铺片酶消化方法和消化时间,提高大鼠视网膜铺片质量.方法 正常SD大鼠12只,颈椎脱臼法处死后,摘取眼球,随机分3组于4%甲醛溶液中固定2天、3个月及7个月.将固定好的眼球取出,分离视网膜,每例视网膜再随机分为2份,分别行常规胰蛋白酶消化和改进后的蛋白酶K-胰蛋白酶联合消化.消化完全后制备视网膜血管铺片,HE染色,显微镜下观察各级血管形态,直到获得清晰的血管图像为止.结果 固定2天、3个月及7个月的大鼠视网膜常规胰蛋白酶消化法所用时间分别为:3%的胰酶消化液10 h、6%的胰酶消化液22 h、9%的胰酶消化液28 h.蛋白酶K-胰蛋白酶联合消化法所用时间分别为:0.1%的蛋白酶K消化15 min,3%胰蛋白酶消化5 h;0.1%的蛋白酶K消化15 min,6%胰蛋白酶消化7 h;0.1%的蛋白酶K消化20 min,9%胰蛋白酶消化20 h.固定2天、3个月的视网膜在两种消化方法中,成片效果基本相同,血管网铺片完整,各级血管形态、走向清晰,无断裂,血管内皮细胞形态及细胞核均清晰显示,但联合消化法消化的更为彻底几乎无其他组织残留.固定7个月的视网膜,采用单纯胰蛋白酶消化的,存在血管断裂现象,而采用联合消化法的视网膜血管断裂现象优于前者.结论 改进后的蛋白酶K-胰蛋白酶联合消化法,优于常规胰蛋白酶消化法,对长时间固定的视网膜消化稳定性较好.
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固定时间对过氧化物酶染色积分的影响
2.7％(4/146)的急性淋巴细胞白血病原始细胞苏丹黑B染色阳性[1],即该染色诊断急性非淋巴细胞白血病的特异性不如过氧化物酶(POX)染色.故有必要对影响POX染色灵敏度的有关因素进行细致研究,努力提高POX染色灵敏度,甚至有可能减少部分急性粒细胞白血病未分化型(M1)误诊为急性髓系白血病微分化型(M0).
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系统干预在缩短手术病理标本固定及送检时间中的应用
探讨系统干预在缩短手术病理标本固定及送检时间中的应用效果。方法采用回顾性研究方法，以2015年1月20日～2月20日的病例标本为对照组、2015年7月15日～8月15日的病例标本为实验组。比较分析2个阶段每份病理标本离体后至固定平均时间、送检人员与病理科人员核对交接标本的平均时间。结果经过6个月的系统干预和实践，平均每份病理标本离体后至固定时间由（60．75±3．41）min 降至（10．54±0．13）min，差异有统计学意义（P ＜0．01）；送检人员与病理科人员核对交接平均每份病理标本时间由（80．05±0．23）s 降至（35．52±0．11）s，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论通过系统干预管理，有效地缩短了手术病理标本固定及送检时间，说明系统干预管理方法的效果显著，值得推广。
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3种婴儿鼻导管给氧固定方法的研究比较
目的 研究比较3种婴儿鼻导管给氧固定方法的效果.方法 将有中度缺氧症状住院的180例婴儿随机分为3组,采用3种不同的鼻导管固定方法,比较3种不同鼻导管固定方法的鼻导管滑脱例数、固定时间及婴儿依从性.结果 高举平抬法中鼻导管滑脱和固定时间明显少于其他2组且能提高婴儿依从性,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 高举平抬法能缩短鼻导管给氧固定时间、防止鼻导管滑脱及提高婴儿依从性,值得临床推广使用.
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流式细胞术检测细胞周期实验样品制备条件的研究
目的 优化细胞周期测定实验样品制备条件.方法 T47D细胞株经乙醇固定后,加入RNase A消化细胞内RNA,加入碘化丙啶(PI)标记DNA,用流式细胞仪检测细胞内DNA含量,ModFit软件分析细胞周期.采用此方法研究样品制备过程中固定时间(30 min,4 h,24 h,48 h,7天和14天)和RNase A对细胞周期检测结果的影响.结果 固定不同时间,G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例变化范围分别为(57.79±0.90)%～(60.58±1.90)%,(20.16±1.55)%～(24.07±1.04)%和(17.32±0.62)%～(19.45±0.86)%,各组间差异无统计学意义(P＞0.05);变异系数的变化范围为(5.77±0.24)%～(7.72±0.28)%,各组间差异无统计学意义(P＞0.05);无RNase A组与有RNase A组相比,G0/G1期的细胞比例差异无统计学意义(t=1.59,P＞0.05),S期、G2/M期的细胞比例和变异系数的差异有统计学意义(P值均小于0.01,t值分别为-9.46,12.78和-7.99),S期升高,G2/M期降低,变异系数增大.结论 ①细胞周期测定实验样品处理过程中,细胞固定30 min后即可上机测试,且细胞固定后的保存时间可长达两周;②RNase A对细胞周期测定实验结果影响较大.
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不同固定液和时间对大鼠睾丸组织病理学制片质量的影响
目的 探讨不同固定液和固定时间对大鼠睾丸组织病理学制片质量的影响.方法 选用雄性SD大鼠12只,取两侧睾丸组织,共24例标本.每例标本分别用不同的固定液(10％中性福尔马林溶液、30％Davidson固定液及FAA固定液)固定不同的时间(24、48 h)后,进行脱水、包埋、切片、HE染色.用LEICA DM5000B普通光学显微镜观察.结果 3种固定液固定24 h后,可见30％ Davidsons固定液组睾丸组织的异常变化程度低于10％中性福尔马林组和FAA组;固定时间对睾丸组织有一定程度的影响:固定24 h的异常变化程度低于固定48 h.结论 30％ Davidson固定液组SD大鼠睾丸组织病理学变化程度小;固定时间不宜超过24 h.
