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都匀亚洲牛带绦虫病患者生化指标的观察
目的 观察都匀亚洲牛带绦虫病患者生化指标的改变. 方法 应用全自动生化分析仪和全自动放射测量仪对都匀亚洲牛带绦虫病患者肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA),肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(CREA),血清酶学指标r-谷氨酰转移酶(r-GT)、碱性磷酸酶(ALP)及肝纤维化指标(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)进行测定和分析. 结果 都匀亚洲牛带绦虫病患者与对照组相比血清r-GT、ALP、HA、Ⅳ-C显著升高(P＜0.05),ALB、PA显著下降(P＜0.05). 结论 都匀亚洲牛带绦虫病患者肝功能、血清酶学、肝纤维化指标有明显变化.
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都匀亚洲带绦虫不同方式感染宿主的免疫病理变化
目的 建立等量都匀亚洲带绦虫虫卵单次感染和多次感染的动物模型,比较两种不同感染方式对家猪肝脏的损害程度. 方法 将实验动物猪分成3组,单次感染组、多次感染组和正常对照组,分别灌喂都匀亚洲牛带绦虫的孕节,感染动物于3、9、18周剖杀,制作病理切片,测量单个囊尾蚴肉芽肿面积,放射免疫法检测家畜血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)和层粘连蛋白(laminin, LN),免疫组化法检测肝内结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)与转化生长因子-β1(transforming growth factor-betal,TGF-β1)蛋白的表达水平. 结果 单次感染组家猪急性期囊尾蚴肉芽肿反应明显,慢性期和晚期肉芽肿面积逐渐缩小,而多次感染组肉芽肿缩小不明显;血清中HA和LN、肝组织中CTGF和TGF-β1水平在感染各期均高于正常对照组,多次感染组升高更显著. 结论 用等量的都匀亚洲带绦虫虫卵多次感染家猪比单次感染引起的肝纤维化更严重.
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亚洲牛带绦虫自吞噬相关蛋白3基因克隆及表达
目的 从亚洲带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别并预测自吞噬相关蛋白(autophagy related protein3-like,APG3)基因,并将该基因进行克隆表达,为进一步研究其生物学功能提供基础依据.方法 利用生物信息网站及其他分析软件包,分析该蛋白质理化特性等,并将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及测序鉴定之后诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果 该基因全长为1 331 bp,编码区为92～1099,编码335个氨基酸,理论分子量、等电点分别为37 498.5 Da和4.71.PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta APG3重组质粒构建成功.经过尿素破包涵体法得到纯化蛋白.结论 发现亚洲牛带绦虫APG3基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.
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亚洲带绦虫膜联蛋白B3基因生物信息学分析
目的 识别亚洲带绦虫新基因,分析和预测该基因及其编码蛋白的结构和特性,为其生物学功能研究提供依据.方法 利用在线生物信息学网站及工具进行序列分析、预测其编码的膜联蛋白B3的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象、进化树等.结果 该基因全长1176 bp,编码区为70～588 bp,编码173个氨基酸,为全长基因;无跨膜区;具有多个磷酸化位点和B细胞线性表位;蛋白的理化性质稳定,理论分子量为19339.7;没有质体、线粒体定位序列;氨基酸序列高度保守.结论 运用生物信息学方法 从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中识别出了亚洲牛带绦虫成虫膜联蛋白B3基因,并对其所编码的蛋白质的结构与功能进行预测.
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亚洲牛带绦虫Spefl-Like基因克隆、表达及纯化
目的 扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata aslatica)Spefl-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化.方法 以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spcfl-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化.结果 PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spcfl-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达.结论 成功克隆了亚洲牛带绦虫Spefl-Like基因,并表达和纯化了Spcfl-Like蛋白,为研究Spefl-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据.
关键词： 亚洲牛带绦虫 Spcfl-Like基因 基因克隆 原核表达 -
亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白基因克隆及表达
目的 对亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4(Actin related protein 2/3 complex subunit 4)基因进行克隆、表达和免疫学研究.方法 以亚洲牛带绦虫eDNA文库中肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4的已知序列设计合成一对特殊引物,进行PCR技术扩增目的 基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在CaCl2制备的感受态大肠埃希茵BL21/DE3中经过异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导目的 基因表达,表达产物经过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.由于蛋白在包涵体表达,故通过N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)法纯化获得纯化重组蛋白并用蛋白印迹(Western-blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明,pET-28a(十)-Arp2/3重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明,基因在大肠埃希菌BL21/DE3包涵体中表达,经过包涵体沉淀的溶解、重折叠和离子交换层析方法获得高纯度蛋白.重组蛋白能识别亚洲牛带绦虫患者及牛带绦虫患者血清,表明该蛋白具有免疫反应性.结论 成功克隆亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因,表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件.
关键词： 亚洲牛带绦虫 Arp2/3亚单位4基因 基因克隆 免疫反应性 -
亚洲牛带绦虫NOMO1基因在原核细胞中表达
目的 构建亚洲牛带绦虫NOMO1基因原核重组质粒,进行原核表达、纯化及免疫学研究.方法 以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含NOMO1基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒后再行诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,并用蛋白免疫印迹(Western-blotting)分析其免疫反应性.结果 成功建构了原核重组质粒pET28a(+)-NO-MI1.该基因在大肠埃希菌中以包涵体形式存在,破包涵体后纯化蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达.Western blotting结果显示,该重组蛋白可被亚洲牛带绦虫、牛带绦虫病人血清识别,具有免疫反应性.结论 成功克隆亚洲牛带绦虫NOMO1基因、表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件.
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亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析
目的 通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据.方法 用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定.结果 该基因全长1 090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26 973.8,等电点为5.96.生物信息分析揭示,Ta CRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符.SDS-PAGE结果表明,目的 基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功.结论 发现亚洲牛带绦虫Ta CRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.
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天名精对亚洲带绦虫囊尾蚴的杀灭作用
将天名精煎剂20、40和60 mg/ml与亚洲带绦虫囊尾蚴进行体外共培养,24 h后观察囊尾蚴的死亡情况及形态变化.20、40和60 mg/ml天名精煎剂对囊尾蚴均具有显著杀灭作用.以60 mg/ml杀灭效果佳,囊尾蚴死亡率达95.0％ (57/60),死亡的囊尾蚴囊体呈紧缩状,头节膨大,吸盘组织变性,形态变形.
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IFN-γ对亚洲牛带绦虫囊尾蚴病小鼠肝肉芽肿的影响
采用免疫组织化学技术链酶亲和素-生物素化过氧化物酶复合物技术观察感染小鼠不同时期肝内γ干扰素(IFN-γ)水平,以及细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、层连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平及分布,并以FN、LN及PCⅢ作为判断IFN-γ对肝纤维化抑制作用的动态变化指标.结果 表明,都匀亚洲牛带绦虫感染小鼠肝内IFN-γ含量与肝纤维化程度呈反比(P＜0.01),注射IFN-γ后囊尾蚴肉芽肿面积明显减少,囊尾蚴肉芽肿减少(P值均＜0.01).
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亚洲牛带绦虫泛素缀合酶基因及其蛋白质结构与功能的生物信息学分析
目的 分析和预测亚洲牛带绦虫泛素缀合酶基因及其编码蛋白的结构与功能特性,用于指导其生物学功能的实验研究.方法 利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,如Vector NTI suite, 从亚洲牛带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别出泛素缀合酶基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构等.结果 该序列为全长基因,编码区为76bp-537bp,编码154个氨基酸.该序列为泛素缀合酶基因同源序列.其编码蛋白的理论分子量为17397.1,亚细胞定位在细胞核.预测该蛋白无跨膜区.与吸虫属的泛素缀合酶进化关系近.结论 应用生物信息方法从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了亚洲牛带绦虫泛素缀合酶cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面的信息.
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牛带绦虫不同亚种感染家猪后血清IL-2和INF-γ含量的比较
目的 通过观察比较牛带绦虫两亚种感染家猪后血清IL-2和INF-γ含量的变化,探讨牛带绦虫不同亚种所致家猪Th1细胞应答机制.方法 用亚洲牛带绦虫虫卵和传统牛带绦虫虫卵分别灌胃20d龄健康乳猪各5头,以健康乳猪5头作对照,于感染后第7、15、45和75d抽取猪耳缘静脉血,常规分离血清.用ELISA试剂盒检测血清IL-2和INF-γ含量.结果 正常组血清IL-2和INF-γ含量在不同时期基本处于稳定水平;亚洲牛带绦虫组血清IL-2和INF-γ在第7d含量高,远高于传统牛带绦虫组(P<0.01),15d含量降低,远低于传统牛带绦虫组,两个实验组在第45d和75d无显著差异;与正常组相比,两个实验组血清IL-2和INF-γ含量在第7、15和75d均明显高于正常组(P<0.01).结论 牛带绦虫两个亚种感染家猪后,早期Th1细胞应答较强,中期Th1细胞应答较低,晚期Th1细胞应答增强,但亚洲牛带绦虫所致家猪Th1细胞应答在第7d强,传统牛带绦虫所致家猪Th1细胞应答在第15d强.
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生物信息学分析亚洲牛带绦虫乳酸脱氢酶基因及其蛋白的结构与特性
目的 分析和预测亚洲牛带绦虫(Taeniasaginata asiatica,Ta)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因及其编码蛋白的结构和特性,以指导其生物学功能的实验研究.方法 利用生物信息网站如美国国家生物技术信息中心(NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY, http://ca.expasy.org/)中有关基因和蛋白序列、结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,如DNAman和Vector NTI suite, 从亚洲牛带绦虫全长cDNA质粒文库中识别乳酸脱氢酶(Ta LDH)基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象,酶的活性中心在拓扑结构和空间构象中的位置分布等.结果 该基因全长1285bp,编码区为92bp-1084bp,编码331个氨基酸,其推导氨基酸序列与其它物种乳酸脱氢酶氨基酸序列一致性达50%左右,具有乳酸脱氢酶保守结构域.其编码的蛋白相对分子量理论预测值和等电点分别是35268.9Da 和8.03.其编码的蛋白有3个跨膜区、没有其它亚细胞定位序列.α螺旋(H)、β折叠(E)和无规卷曲(L)的比例分别是36.56:22.96:40.48,L-乳酸脱氢酶活化位点,位于189-195aa,Ta LDH氨基酸序列中有16个潜在抗原表位,酶催化位点的关键氨基酸在不同物种中保守,在空间结构中3个关键氨基酸相互靠近.结论 应用生物信息方法 从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了Ta LDH的cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面的信息.
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亚洲牛带绦虫36kDa胞浆型苹果酸脱氢酶基因的表达、纯化及免疫学分析
目的 对亚洲牛带绦虫胞浆型苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆、表达和免疫学研究.方法 将亚洲牛带绦虫成虫MDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中.在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-30a(+)-TaMDH重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了商纯度蛋白.重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清.表明其具有免疫反应性.结论 亚洲牛带绦虫苹果酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
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亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因及其蛋白结构特征的生物信息学分析
目的 分析和预测亚洲牛带绦虫的Spefl-Like基因及其编码的蛋白质的结构和功能.方法 利用生物信息学网站如美国国家生物技术中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://ca.expasy.org/)所提供的有关基因和蛋白序列和结构功能分析工具,以及专业的生物信息学软件包如pcgene,Vector NTI suite,从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库当中识别该基因及编码区,分析和预测该基因编码的蛋白质的理化性质,一级结构中的修饰位点及模序,亚细胞定位特征,二级结构特征以及蛋白三维空间构象,蛋白亲水性及潜在抗原表位.结果 该基因全长1099bp.编码区为117-929bp,编码271个氨基酸,与GenBank当中的其他序列比对.预测该基因为全长基因.编码的蛋白质理化性质比较稳定,含有多个能被其他酶修饰的位点,无跨膜区,预测其主要含有三个亲水性较强的抗原表位,空间结构上相距较近.结论 生物信息方法可从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出Spef1-like基因并进行分析.
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都匀亚洲牛带绦虫病小鼠肝纤维化肝脏CTCF、TCF-β1的表达意义
目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)与转化生长因子-β1(transforming growth factor=betal,TCF-β1)在都匀亚洲牛带绦虫小鼠肝纤维化肝脏中的表达状况及意义.方法 用昆明小鼠感染都匀亚洲牛带绦虫建立小鼠肝纤维化模型;感染小鼠于30、40、50、60d剖杀,眦染色观察肝脏病理变化,免疫组化法检测肝内CTCF、TCF-β1蛋白的表达水平.结果 感染小鼠30d时形成都匀亚洲牛带绦虫肝纤维化,加d时肝内CTGF和TGF-β1蛋白表达达高峰,随后出现下降.感染小鼠CTGF和TCF-β1蛋白表达水平具有直线相关性.结论 CTGF与TCF-B1的表达与都匀亚洲牛带绦虫小鼠肝纤维化形成有密切关系TCF-B1的致纤维化作用可能部分通过CTGF的生物学作用介导.阻断CTGF的传导通路可能是绦虫病肝纤维化治疗的有效靶点.
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生物信息学分析亚洲牛带绦虫WD40基因及其蛋白质的结构与功能
目的 分析和预测亚洲牛带绦虫WD40基因及其编码蛋白的结构和特性,用于指导其生物学功能的实验研究.方法 利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://ca.expasy.org/)和IEDB Analysis Recource提供的各种生物信息学在线分析程序.结合其它生物信息学分析软件包如Pcgene和Vector NTI suite,从亚洲牛带绦虫全长cDNA质粒文库中识别WD40基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等.结果 该基因全长1 208 bp,编码区为81～1 056 bp,编码402个氨基酸,为全长基因;无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质稳定,理论分子量为35 942.4;没有质体、线粒体定位序列;预测该蛋白表面有三个亲水性强的线性表位和三个B细胞抗原表位.结论 应用生物信息方法从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中识别出了亚洲牛带绦虫WD40基因,并对其所编码的蛋白质的结构与功能进行了预测.
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贵州省都匀地区亚洲牛带绦虫病的流行病学调查
目的了解亚洲牛带绦虫病在我省都匀地区的流行特点.方法采用传统流行病学调查方法(即:询问病史、驱虫、肛门拭子法等),对都匀米秀地区相邻六个村寨进行实地调查,并对70位有临床表现的成人(男性67,女性3)进行驱虫治疗.结果在67例男性患者中有24人驱出虫体;在3例女性患者中有1人驱出虫体,成人感染率为35.4%;对100名儿童,进行了肛门拭子法查虫卵,均未检出.结论贵州省都匀地区亚洲牛带绦虫病感染严重,患者主要是男性青壮年.
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亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因的原核表达和免疫学分析
[目的]对亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因(CaN)进行克隆、表达和免疫学初步研究.[方法]将亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析.[结果]PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Ta CaN构建成功.SDS-PAGE结果表明目的基因能在大肠杆菌BL-21/DE3中表达,经亲和层析得到了纯化重组蛋白.重组蛋白能被感染了亚洲牛带绦虫的猪和患者的血清识别.[结论]亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达.为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
关键词： 亚洲牛带绦虫 钙调神经磷酸酶B基因 基凶克隆 原核表达 -
亚洲牛带绦虫与传统牛带绦虫实验动物感染研究
在生物医学的科学研究中实验动物感染并建立相应的动物模型被广泛运用.它无论在疾病的发生、发展机制的探讨或预防与治疗上都非常重要.是促进医学科学发展的重要途径之一.传统牛带绦虫是种较古老的虫种,多年来,人们对它的认识已比较成熟.由Goeze于1782年鉴定为独立的种.近三十年来,在我国台湾和东南亚的很多地区,人们根本不吃或很少吃牛肉,而却一直有“牛带绦虫病”的流行与分布.
