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应用免疫蛋白质组学方法鉴定弓形虫病诊断抗原分子的研究
目的 鉴定对弓形虫感染具有潜在诊断价值的弓形虫抗原分子.方法 制备刚地弓形虫RH株速殖子全虫可溶性蛋白及弓形虫感染小鼠腹腔蛋白,经SDS-PAGE分离后采用半干电转移方法将其转移到硝酸纤维素膜上,再分别与22份弓形虫感染者血清进行Western blot,以22份健康人血清和其他寄生虫病患者血清作为对照,筛选能被弓形虫感染者血清特异性识别的蛋白组分;两种蛋白样本经二维电泳分离后采用Western blot筛选能被弓形虫感染者混合血清识别,但不能被健康人血清及其他寄生虫病患者血清识别的特异性斑点.切取SDS-PAGE胶上相应的特异性蛋白质斑点进行MALDI-TOF分析,鉴定蛋白斑点的基因.结果 一维电泳及Western blot结果显示,弓形虫感染小鼠腹腔蛋白中的90、37、30、28和18 ku组分分别可被部分弓形虫感染者血清识别,其中为28 ku蛋白能被22份弓形虫感染病人血清中的15份所识别;速殖子全虫可溶性虫体蛋白中的90、70、67、56、48、39、37、30、28和18 ku组分可被部分弓形虫感染者血清识别,其中28 ku蛋白可被22份弓形虫感染者血清中的21份识别,22份健康人血清中有2份与28 ku蛋白呈弱阳性反应,与其他寄生虫病患者血清无交叉反应.二维电泳Western blot阳性斑点的飞行质谱分析显示,弓形虫感染小鼠腹腔蛋白中的28 ku组分为磷酸丙糖异构酶,弓形虫速殖子全虫可溶性蛋白中的28 ku组分为GRA2和GRA7.结论 弓形虫抗原与宿主抗体反应具有高度异质性,GRA2、GRA7及磷酸丙糖异构酶等分子的弓形虫感染者血清识别率高,此三种蛋白可作为建立具有高敏感性的弓形虫病特异性免疫诊断方法的抗原分子.
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蛋白质组学在肿瘤标志物筛选和筛查中应用与评价
据世界卫生组织(WHO)估计,2004年全球癌症新发病例约1 000万,死亡620万,现患癌症病例2 200万.预计2020年新发病例将达到1 500万,死亡1 000万,患病病例为3 000万.由我国卫生部制定的"中国癌症预防与控制规划纲要(2004～2010)"中指出:20世纪70年代以来,我国癌症发病及死亡率一直呈上升趋势,至90年代的20年间癌症死亡率上升29.42%,年龄调整死亡率上升11.56%.2000年癌症发病例数约180～200万,死亡140～150万,在城镇居民中,癌症已占死因的首位.随着社会经济的发展,癌症的主要危险因素并未得以相应控制.在我国当前肝癌、胃癌及食管癌等死亡率居高不下的同时,肺癌、结直肠癌及乳腺癌等又呈显著上升趋势.特别值得重视的是,我国农村癌症死亡率的上升速度明显高于城市,癌症高发地区亦多在农村和西部地区,是当地农民因病致贫及因病返贫的重要原因.
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循环DNA在食管癌异常甲基化检测中的应用价值
目的 探讨循环DNA在食管癌异常甲基化检测中的应用价值.方法 收集食管癌患者的癌组织、食管远端组织和外周血浆样本及正常体检人群的食管黏膜对照组织,采用450 K甲基化芯片初筛食管癌组织中差异甲基化位点,扩大样本采用DNA甲基化时间飞行质谱技术对食管癌组织、对应血浆游离DNA进行甲基化定量检测,验证癌组织与血浆游离DNA甲基化的一致性.结果 基于芯片结果获得10个抑癌基因用于后续验证,包括ADAMTS9、AIM2、CASZ1、CDH13、EBF3、ING2、IQGAP2、KLF6、TMEFF2和TRIT1.质谱分析显示,所有位点的平均甲基化水平在食管癌患者血浆游离DNA样品中高,其次是食管癌组织和正常食管黏膜对照组织.结论 基因芯片技术可用于食管癌差异甲基化位点的初筛;但构建的抑癌基因异常甲基化谱在应用前尚需进行大样本、多阶段验证.血浆游离DNA甲基化谱可作为潜在的生物标志物应用于食管癌的诊断.
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系统性红斑狼疮肾炎血清差异蛋白质的筛选
目的:对比分析系统性红斑狼疮肾炎(LN)患者和健康人双重滤过血浆置换(DFPP)产物中的差异蛋白质,筛选与LN发生相关的血清蛋白质.方法:利用DFPP的方法分别对4例LN患者和4例健康人血浆进行过滤,将滤下的大分子蛋白混合物行双向电泳分离并银染显影,经图像分析筛选差异表达的蛋白点.应用QSTAR PulsarⅠ型串连飞行质谱鉴定差异表达的蛋白点,通过生物信息学比对,对其中有意义分子行血清浓度检测验证.结果:2组间筛选出差异蛋白点共317个,其中表达量差异达3倍以上的蛋白点69个,经串连质谱分析鉴定出包括人冷凝集素IgM抗体、免疫球蛋白λ轻链、谷胱甘肽-S-转移酶、结合珠蛋白前原蛋白、甲状腺素转运蛋白、载脂蛋白E、皮质类固醇结合球蛋白、玻连蛋白、角蛋白和转铁蛋白等十多个在SLE活动性肾炎血清中表达改变的蛋白分子.ELISA及RIA检测结果与双向电泳相符.结论:LN患者血清与健康人血清的蛋白表达谱有一定差异,这些差异分子可能成为LN诊断及预后判断的重要标志物.
关键词： 系统性红斑狼疮性肾炎 双重滤过血浆置换 飞行质谱 蛋白组学
