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日本血吸虫大陆株卵黄铁蛋白基因重组及其真核表达
目的构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因(SjYolFer)的真核表达重组质粒pLYolFer,转染Hela细胞进行表达,并对表达产物进行鉴定.方法用PCR法从日本血吸虫大陆株成虫cDNA文库中扩增目的基因片段,经RNA斑点杂交显示转录差异,然后定向克隆入表达载体pLXSN.转染重组体到Hela细胞中进行表达,并用SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.结果PCR扩增产物大小约600 bp左右,与雌虫RNA的杂交信号明显强于雄虫.获得重组质粒pLYolFer,特异性表达产物约为21 ku,能被日本血吸虫感染兔血清及小鼠血清识别.结论为进一步免疫原性实验奠定了基础.
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日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在小鼠诱生的保护性免疫力
目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因DNA免疫小鼠诱生的保护性免疫力。方法 分两大组进行，实验Ⅰ小鼠有预感染，实验Ⅱ小鼠没有。将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒pL-SjFerl经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠，共免疫2次，间隔2周。末次免疫后5w以血吸虫尾蚴攻击感染，6w后计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果PL-SjFerl免疫小鼠，在实验Ⅰ主要诱生IgG1和IgG3，在实验Ⅱ主要诱生IgG2a和IgG2b；实验组尚产生较高水平的IgA和IFN-γ应答。pL-SjFerl免疫小鼠诱生一定程度的减虫率(26.47％，34.08％)，减卵率40.02％，36.83％)和死亡卵百分比(27.50％，30.13％)。结论PL-SjFerl免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力，值得进一步深入研究。
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日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的体外扩增及逆转录病毒pLXSN-Ferl重组质粒的构建
目的构建日本血吸虫pLXSN-Fer1真核表达重组逆转录病毒，为进一步在细胞中表达及DNA免疫作准备。方法用PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增编码卵黄铁蛋白(yolk ferritin，Ferl)的基因片段，定向克隆入pLXSN逆转录病毒载体，然后经氨苄LB培养基筛选，酶切、PCR鉴定。结果从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增出特异的卵黄铁蛋白的基因片段，克隆成功pLXSN-Fer1重组逆转录病毒。结论构建成功pLXSN-Fer1重组逆转录病毒。
关键词： 日本血吸虫 卵黄铁蛋白 pLXSN-Fer1 重组逆转录病毒 -
日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫在不同处理小鼠诱导免疫应答的观察
[目的]研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用.[方法]免疫小鼠分两大组进行:实验Ⅰ组小鼠有预感染,实验Ⅱ组小鼠没有预感染.将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的重组质粒pLXSN-Fer1经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠,共免疫2次,间隔2周.末次免疫后5周以血吸虫尾蚴攻击感染,6周后剖杀小鼠,计数成虫负荷及肝组织虫卵数.设空载质粒免疫组为对照组.[结果]免疫小鼠后在实验Ⅰ组主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ组主要诱生IgG2a和IgG2b;实验组产生较高水平的IgA和IFN-γ应答.pLXSN-Fer1免疫小鼠获得一定程度的减虫率(26.47%,34.08%)和减卵率(40.02%,36.83%).[结论]日本血吸虫卵黄铁蛋白在两种不同处理小鼠均能产生一定程度的保护作用,有可能成为有价值的疫苗候选分子,值得进一步深入研究.
