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霍乱毒素联合弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的GALT和NALT黏膜免疫应答
目的 观察霍乱毒素(CT)联合弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫小鼠诱导的肠相关淋巴组织(GALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)黏膜部位的免疫应答.方法 将48只5～6周龄BABL/c小鼠随机均分为3组,分别用PBS、ESA和CT+ESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔2周.末次免疫后14 d,处死小鼠,ELISA测定小鼠粪便和鼻咽冲洗液sIgA抗体水平;计数派伊尔淋巴集结(PP)、肠上皮淋巴细胞(IEL)、NALT和鼻通道(NC)淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平.结果 免疫后14 d,CT+ESA组小鼠鼻咽冲洗液和粪便sIgA水平显著高于ESA组和PBS组(P＜0.01);CT+ESA和ESA组小鼠GALT部位的PP淋巴细胞显著增生,主要以CD4+T细胞为主;而IEL以CD8+T细胞增生为主,CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05).CT+ESA NALT内淋巴细胞明显增生.CT+ESA组NC淋巴细胞显著升高(P＜0.01),以CD4+T细胞增生为主.结论 CT佐剂联合ESA滴鼻免疫BALB/c小鼠可诱导GALT和NALT黏膜部位免疫应答.
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HIV-1CN54合成gp120基因(syngp120)的DNA疫苗鼻内免疫小鼠诱导全身的和粘膜的免疫应答
目的初步探讨HIV-1CN54合成gp120基因的DNA疫苗(pcDNA3.1-syngp120)鼻内接种小鼠是否诱发免疫应答.方法DNA疫苗免疫后,制备脾和肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞,在体外测其增殖应答和CD+8 CTL应答.间接ELISA法测血清和粘膜洗液抗原-特异的IgG和IgA抗体滴度.中和实验测免疫血清和阴道洗液是否中和HIV-1SF33.结果在DNA疫苗末次免疫后,小鼠第1周检测到脾和MLN CD8+CTL应答较弱,而第5周未检测到.另外,在末次免疫后的第1、5周检测到MLN而未检测到脾淋巴细胞发生增殖应答.并且检测到特异的血清IgG抗体和粘膜的(包括粪便和阴道洗液)IgA抗体,但未检测到血清的IgA抗体和粘膜的(包括粪便和阴道洗液)IgG抗体.中和实验发现末次免疫后第5周的血清能中和实验室毒株HIV-1SF33(B亚型),而阴道洗液则没有.结论该DNA疫苗鼻内免疫小鼠可诱导粘膜免疫应答,包括MLN淋巴细胞增殖应答和CD8+CTL应答,同时诱导较弱的粘膜IgA抗体应答.此外,能诱导脾CD+8CTL应答和血清IgG抗体应答.免疫血清中和HIV-1S F33,而阴道洗液不能.
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鼻相关淋巴组织与鼻腔免疫
鼻相关淋巴组织是上呼吸道主要的免疫防御屏障.近年来,鼻腔免疫已成为继口服免疫后诱导粘膜免疫的又一有效途径.本文综述了鼻相关淋巴组织的结构、与其他粘膜相关淋巴组织的异同及其在免疫应答中的作用.
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nuocyte细胞体外诱导变应性鼻炎小鼠初始T细胞向Th2细胞的分化
目的:探讨nuocyte细胞是否可以在体外诱导AR小鼠的初始T细胞向Th2细胞分化.方法:用卵清蛋白建立变应性鼻炎(AR)小鼠模型,分离、提纯并体外培养小鼠鼻相关淋巴组织(NALT)中的nuocyte细胞,检测该细胞是否可以合成IL-4,获取AR小鼠外周血单个核细胞并分离出Th2细胞和T细胞进行体外培养,检测其中Th2细胞占T细胞百分比,然后将体外培养的NALT来源的nuocyte细胞加入上述小鼠T细胞培养液共培养,再次检测Th2细胞百分比.结果:AR小鼠模型的打喷嚏次数、挠鼻次数及鼻腔冲洗液中嗜酸粒细胞数均高于正常小鼠,以流式细胞仪技术将NLAT中nuocyte细胞鉴定为CD3CD4CD8CD19CD11 bCD11 cFcεR1 (lineage)-ICOS+,该细胞表达IL-4,而且AR小鼠nuocyte细胞中IL-4蛋白和mRNA含量均高于正常小鼠,nuocyte细胞与T细胞共培养后,Th2细胞所占T细胞百分比明显升高.结论:nuocyte细胞可能通过IL-4通路在体外诱导AR小鼠初始T细胞向Th2细胞分化.
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Orai1蛋白体外干预对小鼠nuocyte细胞功能的影响
目的 探讨nuocyte细胞是否表达Orai1蛋白及该蛋白的功能.方法 用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立小鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型,计数AR小鼠的打喷嚏、挠鼻次数,分离、提纯并体外培养AR小鼠鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)中的nuocyte细胞,用激光扫描共聚焦显微镜定性检测该细胞Orai1蛋白的表达,以ELISA法和实时荧光定量RT-PCR法分别定量检测该细胞Orai1蛋白及其mRNA的表达量,将小鼠重组(recombinant,rm)白介素(interhukin,IL)-33加入nuocyte细胞培养基,检测其中IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的浓度,然后再将Orai1蛋白抗体加入nuocyte细胞培养基,再次检测其中IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的含量.结果 小鼠AR模型打喷嚏和挠鼻次数较正常小鼠显著增多,OVA诱导NALT来源的小鼠nuocyte细胞被鉴定为CD3CD4CD8CD19CD11bCD11 cFcεR1 (lineage)-ICOS+,该细胞表面表达Orai1蛋白,其蛋白和mR-NA含量均较正常小鼠显著升高,rmIL-33加入nuocyte细胞培养基后,IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的浓度均明显增多,而加入Orai1蛋白抗体后,其浓度出现下降.结论 nuocyte细胞表达Orai1蛋白,该蛋白的干预抑制nuocyte细胞的正常功能.
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弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导NALT和GALT黏膜部位的免疫应答
目的 观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答,探讨弓形虫黏膜疫苗能否在感染起始阶段有效诱导免疫应答.方法 将BALB/c小鼠随机分为免疫和对照组,免疫组小鼠以弓形虫复合黏膜疫苗20μl/只(20μg STAg+1μgCT)滴鼻免疫2次(间隔2周),对照组PBS滴鼻.于末次滴鼻后14 d颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液IgA抗体水平:计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平.结果 免疫组小鼠粪便IgA和鼻咽冲洗液IgA抗体显著高于对照组(P＜0.05).NALT内淋巴细胞明显增生(P＜0.05),其中CD4+、CD8+T细胞均有增生(P＜0.01),CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05).NC中淋巴细胞数明显升高(P＜0.01),以CD4+T细胞水平为主(P＜0.01).GALT部位PP淋巴细胞增生显著(P＜0.01),主要以CD4+T细胞为主;而IEL以CD8+T细胞增生为主(P＜0.01),CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05).结论 弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答.
