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RUNX1表观遗传机制在白血病发生中的作用研究进展
RUNX1又称为AML1,是RUNX转录因子蛋白家族中的成员之一,是白血病染色体易位常见的靶位点.RUNX1是十分重要的转录因子,可双向(促进或抑制)调节造血相关基因的表达.RUNX1蛋白可接受多种翻译后修饰,其活性可受这些翻译后修饰的影响,从而调节造血细胞的分化、凋亡及自我更新.本文重点综述RUNX1的靶基因、转录机制及翻译后修饰等表观遗传机制在白血病发生中的作用.
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银屑病患者外周血T细胞主控基因RUNX1及其靶基因的表达研究
目的：研究银屑病患者外周血T细胞主控基因RUNX1及其靶基因SLC9A3R1、人类白细胞抗原（HLA）-C及磷酸激酶（PKC）-βⅠ的mRNA表达，进一步了解RUNX1及其下游基因与银屑病外周血T细胞活性异常的关系。方法取20例银屑病患者及20名健康对照外周血，分离、培养、扩增外周血T细胞并鉴定纯度；提取纯化mRNA并反转录合成cDNA，实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测RUNX1、SLC9A3R1、HLA-C及PKC-βⅠ在mRNA水平表达。结果银屑病患者外周血T细胞RUNX1、SLC9A3R1、HLA-C及PKC-βⅠmRNA表达水平均高于健康对照组，银屑病组RUNX1、SLC9A3R1、HLA-C及PKC-βⅠmRNA与对照组的表达水平比值分别为1．8071、2．2494、2．0744及2．3784。结论RUNX1及其靶基因表达水平的增高可能引起外周血T细胞的活化，并参与银屑病的发病。
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miR-101及Runt相关转录因子1在肺癌细胞系A549中的作用
目的 研究miR-101及其下游靶基因Runt相关转录因子1(RUNX1)在肺癌细胞系A549中的作用.方法 Western Blot及Real Time PCR检测miR-101和RUNX1在A549中的表达情况,上调或下调miR-101后A549中RUNX1的表达变化,绘制生长曲线及细胞克隆实验检测A549细胞的增殖变化,transwell验证A549细胞迁移的变化.结果 在A549细胞,miR-101表达水平下调,RUNX1表达水平上调;miR-101抑制A549细胞的增殖及迁移;RUNX1促进A549细胞的增殖及迁移.结论 miR-101通过抑制RUNX1的转录表达抑制肺癌细胞系A549的增殖及迁移.
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RUNX1基因与肿瘤关系的研究进展
RUNX1(Runt-related transcription factor 1)是RUNX转录因子家族成员之一,定位于21q22,包含138个氨基酸Runt同源功能区,研究发现RUNX1在肝癌、胃癌中发挥抑癌作用,而在非小细胞肺癌、子宫内膜癌中发挥促癌作用,在不同亚型的乳腺癌中发挥抑癌或促癌作用.而RUNX1作为重要的转录因子,主要通过直接或间接调控TGFβ、Wnt、BMP等信号转导通路发挥作用.
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银屑病患者骨髓CD34+细胞RUNX1及其靶基因SLC9A3R1的研究
目的:研究转录调节因子RUNX1及其靶基因SLC9A3R1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达及SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1的连接位点,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性,为深入阐明银屑病患者免疫异常的根源及造血细胞在其中的作用提供理论依据.方法:采用免疫磁珠法分离CD34+细胞,RT-PCR法分别检测RUNX1和SLC9A3R1的mRNA表达,直接测序法检测PCR产物中SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1连接位点DNA序列.结果:银屑病患者骨髓CD34+细胞RUNX1表达阳性率低于正常对照组(P＜0.05);银屑病患者骨髓CD34+细胞SLC9A3R1表达水平明显高于正常对照组(P＜0.05),且与PASI评分正相关(r=0.48,P＜0.05);在SLC9A3R1与NAT9之间未发现RUNX1连接位点的突变.结论:决定银屑病患者骨髓CD34+细胞分化的关键基因RUNX1存在异常;银屑病患者骨髓RUNX1和SLC9A3R1可能通过对骨髓造血微环镜和造血干细胞的异常调节参与银屑病的发病.
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RUNX1对氧糖剥夺诱导PC12细胞凋亡的保护作用研究
目的:研究RUNX1在PC12细胞氧糖剥夺模型中的表达及其对PC12细胞的保护作用,并探讨其相关机制.方法:体外培养PC12细胞并构建氧糖剥夺模型,将细胞分为对照组、氧糖剥夺组、RUNX1 siRNA处理组、siRNA对照处理组(sicontro1)、pcDNA3.1-RUNX1处理组(pcRUNX1)和pcDNA3.1对照处理组(pcDNA 3.1).qRT-PCR和western blot检测RUNX1、磷酸化Akt(p-Akt)和总Akt(t-Akt)表达水平;MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果:与对照组比较,RUNX1在PC12细胞氧糖剥夺模型中表达水平显著升高;沉默RUNX1可下调PC12细胞的存活率,促进细胞的凋亡,有效抑制p-Akt蛋白表达,而过表达RUNX1显著提高细胞存活率,抑制细胞凋亡,并上调p-Akt蛋白表达;此外,PI3K/Akt通路抑制剂LY294002明显抑制RUNX1过表达对细胞存活率的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用.结论:RUNX1可通过PI3K/Akt信号通路保护OGD对PC12细胞的损伤作用.
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炎症状态下NF-κB-mTOR通路及转录因子RUNX1调控肾小管上皮细胞DC-SIGN表达研究
探讨炎症状态下NF-κB通路、mTOR通路以及转录因子RUNX1对肾小管上皮细胞DC-SIGN表达调控.体外培养肾小管上皮细胞株(HK-2)并经TNF-α刺激,分别给予NF-κB抑制剂(BAY 11-7082)和mTOR抑制剂(Rapamycin)干预.采用免疫印迹试验和实时定量PCR法检测HK-2细胞DC-SIGN表达;免疫印迹试验检测mTOR的磷酸化水平.用上述经TNF-α刺激的HK-2以及建立的肾炎损伤小鼠模型,以实时定量PCR法检测HK-2细胞以及分离的模型鼠肾小管上皮细胞中RUNX1表达.进一步利用HK-2构建过表达RUNX1稳定转染细胞株并经TNF-α刺激,实时定量PCR法检测RUNX1和DC-SIGN表达.结果显示,HK-2经TNF-α刺激模拟炎症状态下,可促进mTOR磷酸化并诱导DC-SIGN表达;NF-κB抑制剂和mTOR抑制剂均能抑制HK-2细胞的DC-SIGN表达,NF-κB抑制剂亦可抑制mTOR的磷酸化.还发现炎症因素刺激下,人和小鼠肾小管上皮细胞体内体外均明显表达RUNX1,且过表达RUNX1的HK-2细胞稳转株显著表达DC-SIGN,并在TNF-α刺激下可进一步上调DC-SIGN表达.本研究表明,肾脏微炎症状态下,NF-κB-mTOR通路以及转录因子RUNX1均参与了肾小管上皮细胞DC-SIGN的表达调控.提示此过程中,NF-κB通路作为mTOR上游通路,通过激活后者参与DC-SIGN表达,而转录因子RUNX1可能是启动DC-SIGN表达的关键调控因素.
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转录因子Runx1对RPL4 启动子的调节作用
目的:儿童白血病细胞全基因组芯片数据聚类分析发现,核糖体蛋白L4(ribosomal protein L4, RPL4)启动子区域具有转录因子Runx1的结合位点TTCATTCT,由此推测Runx1可能与该基因启动子之间存在调控作用. 本研究通过观察Runx1蛋白与RPL4启动子之间的相互作用,了解Runx1对RPL4启动子转录活性的影响,探讨其在儿童白血病发生机制中的意义. 方法:构建含RPL4启动子及其突变体的荧光素酶报告质粒,与Runx1的表达质粒共转染293T细胞,进行荧光素酶活性分析. 结果:Runx1蛋白可使RPL4启动子的转录活性降低(P< 0.01);随着Runx1剂量的增加,RPL4启动子的转录水平呈剂量依赖性降低(P< 0.01);Runx1蛋白对RPL4启动子的突变体转录活性无调控作用(P>0.05).结论:Runx1蛋白对RPL4启动子具有转录抑制作用,且具有明显的剂量依赖性;Runx1蛋白通过结合RPL4启动子区域的TTCATTCT位点发挥调控作用.
关键词： RUNX1 核糖体蛋白L4(RPL4) 白血病 转录调控 -
SLC22A4和RUNX1基因的单核苷酸多态性与中国汉族类风湿性关节炎和强直性关节炎的关联分析
目的:在中国汉族人群中进行功能候选基因SLC22A4(solute carrier family 22 member 4)和RUNX1(runt-related transcription factor 1)与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)以及强直性脊柱炎 (ankylosing spondylitis, AS)的关联分析.方法:在104例RA患者和109名正常对照以及278 例AS患者和417名正常对照中,用直接测序法对SLC22A4的3个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点和RUNX1的1个SNP进行基因分型,并分析这些等位基因和基因型是否与RA和AS的发病有关.结果:在RA 和 AS 病例-对照组中均没有发现SLC22A4和RUNX1的SNPs在等位基因以及基因型频率上有显著性差异.结论:在中国汉族人群中,SLC22A4和RUNX1不是RA和 AS 的易感基因.
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RUNX蛋白在不同发育时期小鼠髁状突中的表达
目的:探索小鼠髁状突形态发育及此过程中RUNX蛋白的表达变化及意义.方法:取胚胎14.5 d(E14.5)至出生后7.5 d(P7.5)的小鼠下颌骨,制备髁突矢状位切片,苏木素-伊红(HE)染色观察.免疫组化方法检测RUNX蛋白表达分布.结果:E14.5开始,髁突间充质细胞聚集,而后逐渐分化出完整的软骨细胞分层,髁突逐渐由半圆变扁平.免疫组化示RUNX1、2阳性信号主要位于增殖层、前软骨细胞层及部分肥大层细胞,RUNX3阳性信号主要位于前软骨细胞层及肥大层.髁突前后部,RUNX1、2在前软骨细胞层的信号强度较肥大层更高.RUNX整体的表达呈现双峰曲线.结论:髁突前后部成熟较晚,更易发生改建.RUNX1、2协同作用于软骨细胞分化早期,RUNX3调节作用于软骨细胞成熟期.
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RUNX家族蛋白在小鼠磨牙发育过程中的表达分析
目的:观察Runt相关转录因子(Runt-related transcription factor,RUNX)1、RUNX2、RUNX3在小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的表达情况,探讨其在Balb/c小鼠牙齿发育过程中的作用机制.方法:取Balb/c小鼠出生前19.5 d和出生后0、6、14、28 d的包含下颌第一磨牙胚或牙齿的下颌骨组织,分别进行HE染色和免疫组织化学方法观察牙齿发育中RUNX1、RUNX2、RUNX3的表达情况.结果:RUNX1在胚胎19.5 d的小鼠牙胚中有表达,出生当天、出生后6、14、28 d,RUNX1的表达递增.RUNX2在胚胎19.5 d和出生当天牙胚中呈颗粒状表达;出生后6、14、28 d均有表达,表达量在出生后6 d呈现低,然后又在14、28 d时升高.RUNX3在胚胎19.5 d和出生当天牙胚中基本无表达;出生后6 d,RUNX3在牙本质中表达量低,出生后14、28 d时表达量逐渐升高.结论:RUNX1在成釉细胞分化、成牙本质细胞分化和牙本质成熟过程中起一定作用,RUNX2与牙本质的成熟过程相关,RUNX3主要与后期牙本质的成熟和牙齿形态相关.
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Runx1基因mRNA表达与非小细胞肺癌发生及淋巴转移的相关性研究
目的:探讨Runx1基因mRNA表达与人非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展的关系.方法:取37例NSCLC标本,10例肺良性病变旁正常肺组织,应用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测NSCLC中Runx1的mRNA表达水平,进行统计分析.结果:肺癌肿瘤组织中Runx1基因表达水平显著低于肺良性病变旁正常肺组织(P＜0.01),肺癌组织中Runx1基因表达水平降低与淋巴结转移相关(P＜0.05),与肺癌组织学类型、细胞分化程度以及患者的年龄、性别无关(P＞0.05).结论:与良性病变旁正常肺组织相比,Runx1基因的mRNA水平在肿瘤组织中表达下降,并且与淋巴结转移相关,提示其可能参与肺癌的发生发展过程.
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结直肠癌组织中SOX9与RUNX1表达及其临床意义
目的 探讨结直肠癌组织中SOX9与RUNX1表达及其临床意义.方法 采用免疫组化染色法检测88例结直肠癌组织及癌旁正常组织中SOX9、RUNX1表达情况,分析与结直肠癌患者临床特征的关系,同时分析SOX9与RUNX1表达的相关性.结果 SOX9在结直肠癌组织中高表达,RUNX1在癌旁正常组织中高表达.不同肿瘤分化程度、TNM分期、有无侵及浆膜、有无淋巴结转移、有无远处转移的患者直肠癌组织中SOX9高表达率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);不同TNM分期、血癌胚抗原(CEA)水平、有无侵及浆膜、有无淋巴结转移、有无远处转移的患者直肠癌组织中RUNX1高表达率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结直肠癌组织中SOX9、RUNX1均高表达13例,均低表达4例;结直肠癌组织中SOX9与RUNX1表达呈负相关(rs=-0.54,P<0.05).结论 SOX9、RUNX1表达与结直肠癌发生、发展关系密切;临床上联合检测有助于判断患者预后情况,为结直肠癌的基因治疗提供新思路.
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Runx1-shRNA重组质粒的构建与表达
本研究目的在于构建特异性下调人Runx1基因的shRNA表达质粒.设计并合成人Runx1基因的siRNA,通过DNA重组技术将目的序列插入到pSuper质粒,采用菌落PCR、限制性内切酶酶切技术及测序方法对其进行筛选与鉴定.转染该质粒于人肺腺癌细胞A549,通过实时荧光定量PCR技术和Western blot方法分别从基因及蛋白水平对其进行功能鉴定.实验结果表明我们所构建的pSuper-Runx1-shRNA质粒能够有效抑制A549细胞Runx1 mRNA和蛋白的表达,抑制率分别为33％和50％.
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Runx1转基因小鼠构建
本研究目的在于构建Runx1转基因小鼠模型.利用含小鼠Runx1 cDNA的ptetO7-Runx1-AscⅡ-IRES-EGFP表达载体,应用基因重组技术和显微注射技术,将纯化的线性化表达质粒ptetO7-Runx1-AscⅡ-IRES-EGFP注射进受精卵的原核内,将存活受精卵或存活胚胎移植制备Runx1转基因小鼠,用PCR技术和Southern blot实验方法鉴定转基因小鼠是否构建成功.实验结果表明本方法可成功构建携带Runx1基因的转基因小鼠模型,为进一步研究Runx1基因的生物学功能奠定了基础.
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骨髓增生异常综合征相关基因的研究进展
骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干细胞的异质性疾病,至今病因尚未完全清楚.近年来随着分子生物学技术的发展,对MDS相关基因的研究越来越多.研究证实,在MDS患者中存在一系列异常,包括基因甲基化、转录因子的突变和激酶突变等.本文就与MDS发病机制相关的P15~(INK4b)、RUNX1和FHIT等基因的研究进展作一综述.
关键词： 骨髓增生异常综合征 分子生物学 P15~(INK4b) RUNX1 FHIT -
小鼠胚胎造血发育的转录调控
小鼠胚胎造血发育是协调的、细胞特异性基因表达以获得特定表型的过程.胚胎干细胞是目前较为理想的体外分化模型.研究发现:多种转录因子在小鼠胚胎造血发育和胚胎干细胞造血分化中发挥重要作用.其中,SCL缺失导致成血血管细胞和所有造血谱系的发育缺陷,而Runx1敲除则主要使永久而非原始造血发育异常.
