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Survivin抑制剂YM155对K562细胞凋亡和自噬的影响
目的:本研究旨在探讨survivin抑制剂YM155对人慢性髓系白血病细胞株K562凋亡和自噬的影响.方法:采用不同浓度YM155处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin、BCL-2及beclin1的mRNA表达水平,Western blot检测survivin、BCL-2、caspase-3、PARP及LC-3的蛋白表达.结果:YM155抑制K562细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性.随着药物浓度的升高及作用时间的延长,survivin和BCL-2的mRNA及蛋白表达水平下降,而caspase-3、PARP、beclin1及LC-3的表达水平升高.YM155联合3-MA组的LC-3和caspase-3蛋白表达水平以及K562细胞凋亡率均显著低于YM155单用组.结论:YM155通过诱导凋亡和自噬而抑制K562细胞的增殖,其自噬诱导效应与凋亡诱导效应有协同抗CML的作用.
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Survivin抑制剂YM155对甲状腺癌B-CPAP细胞凋亡的影响及机制研究
目的:探讨人生存素(Survivin)抑制剂YM155{4,9-二氢-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(2-吡嗪甲基)-1H-萘并[2,3-d]咪唑鎓溴化物}对甲状腺癌B-CPAP细胞活力和凋亡的影响以及凋亡相关酶半胱氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Cysteinyl aspartate specific proteinase-8,Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)表达的变化,探讨其诱导B-CPAP细胞凋亡的可能机制.方法:体外培养B-CPAP细胞,分别以0、0.5、1、2、4、8 nmol/L浓度的YM155进行处理24 、48和72 h,采用CCK-8检测试剂盒检测YM155对B-CPAP细胞活力的抑制作用;B-CPAP细胞随机分为4组:分别以0、1、2 nmol/L YM155和5 μmol/L 顺铂(Cisplatin,阳性对照组)处理24 h.分别采用TUNEL染色和流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI法检测凋亡的情况;采用RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;采用比色法和Western blot检测Survivin和Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性和表达.结果:与0 nmol/L组比较,YM155对B-CPAP细胞活力具有明显抑制作用,并诱导B-CPAP细胞凋亡(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组比较,YM155显著降低B-CPAP细胞Survivin的表达,并上调Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达(P<0.05或P<0.01).结论:YM155对B-CPAP细胞活力具有抑制作用,诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达有关.
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YM155对人胃癌细胞株MKN28的作用及其机制研究
背景:研究发现生存素(survivin)在胃癌组织中高表达,YM155是survivin的特异性抑制剂.目的:探讨YM155对人胃癌细胞株MKN28的作用及其机制.方法:以不同浓度YM155作用于人胃癌细胞株MKN28.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖抑制率；以原位末端标记(TUNEL法)检测细胞凋亡率；以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测survivin mRNA和survivin、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、caspase-3蛋白表达.结果:YM155作用后,MKN28细胞增殖抑制,凋亡增加.随着YM155浓度升高,survivin mRNA和蛋白表达水平明显降低,并伴随PARP、caspase-3蛋白裂解.结论:YM155可抑制人胃癌细胞株MKN28增殖,并诱导其凋亡,此机制可能与抑制survivin表达,继而激活caspase凋亡信号通路有关.
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YM155诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬并促进其凋亡
目的:研究生存素(survivin)抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡及自噬的影响及其可能的作用机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时联合加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞与单用组比较细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Real-time PCR法检测不同加药组与对照组细胞的survivin、beclin 1和bcl-2的mRNA表达量;蛋白质印迹法检测survivin、bcl-2、caspase-3 、PARP及自噬相关蛋白beclin 1和LC-3表达变化情况.结果:YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性.流式细胞结果显示YM155在0.5、1.0、1.5 ng/mL浓度对细胞的凋亡率分别是(11.9±2.4)％、(21.7±2.6)％、(30.8±4.5)％,与对照组(6.4±1.2)％相比具有统计学意义(P＜0.01).当使用自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L)联合处理细胞24 h后细胞增殖率(62.5±3.3)％,与单用YM155组(54.7±2.7)％相比,细胞增殖活性增强(P＜0.05).YM155可显著下调survivn的mRNA和蛋白表达,降低bcl-2和提高caspase-3、PARP的蛋白表达,同时上调beclin 1表达及增加LC-3Ⅱ/LC-3 Ⅰ的比值,促进细胞自噬的发生.结论:YM155能够有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬的发生,其诱导的自噬效应进一步促进其凋亡的发生.
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Survivin抑制剂YM155联合阿糖胞苷对人白血病K562细胞系的作用及机制
目的：探讨survivin抑制剂YM155联合阿糖胞苷（Ara-C）对人白血病K562细胞系的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制。方法实验设6组：对照组、YM155单药组、Ara-C单药组、YM155和Ara-C联合组、YM155序贯Ara-C组、Ara-C序贯YM155组，分别作用于K562细胞。以CCK法检测增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡，western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果CCK-8法显示YM155和Ara-C单药均能抑制K562细胞生长，YM155序贯Ara-C组细胞增殖抑制率和凋亡率高于其他给药方式组。YM155序贯Ara-C组survivin、Mcl-1蛋白表达显著下降。结论YM155序贯Ara-C联合能显著抑制K562细胞增殖，可能通过下调survivin、 Mcl-1蛋白诱导K562细胞凋亡。
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小分子Survivin抑制剂YM155对人子宫颈癌SiHa和ME-180细胞增殖、凋亡的影响及机制研究
目的 探讨Survivin抑制剂YM155对子宫颈癌SiHa和ME-180细胞的作用及其机制.方法 体外培养人子宫颈癌细胞SiHa和ME-180,不同浓度YM155处理SiHa和ME-180细胞,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测Survivin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测Survivin、PARP、caspase-3蛋白的表达;慢病毒介导敲减Survivin.结果 YM155可抑制人子宫颈癌细胞SiHa和ME-180的增殖,且呈时间和剂量依赖性.有效浓度的YM155能显著诱导SiHa和ME-180细胞凋亡,同时能够降低Survivin mRNA和蛋白的水平,激活PARP和caspase-3.结论 YM155能够有效抑制人子宫颈癌SiHa和ME-180细胞增殖,并诱导其凋亡,其可能机制为抑制Survivin的表达,继而激活PARP/caspase凋亡信号通路.
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高三尖杉酯碱联合survivin抑制剂YM155对人白血病K562细胞系增殖和凋亡的影响
目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合survivin抑制剂YM155对人白血病K562细胞系增殖抑制和诱导凋亡的作用及机制.方法:CCK法检测细胞增殖抑制率,依据中效原理及CalcuSyn软件评价HHT和YM155的联合治疗效果.设空白对照组、HHT组、YM155组和联合用药组,采用Annexin V/PI双染法以流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测survivin蛋白变化,以特异性荧光底物检测caspase-3、-8活性变化.结果:HHT和YM155单药均以浓度依赖方式抑制K562细胞生长,二者联合应用具有化疗协同作用(CI＜1).联合用药组K562细胞凋亡率明显高于单独用药组,且survivin蛋白表达显著下调(均P＜0.05).HHT单药及联合用药组诱导caspase-3、-8活化,而YM155单药未引起caspase-3、-8活性变化.结论:HHT和YM155联合应用于K562细胞具有化疗协同作用,通过下调survivin诱导K562细胞凋亡.
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生存素抑制剂YM155通过诱导自噬抑制肝癌细胞增殖
目的 探讨小分子生存素(Survivin)抑制剂YM155对肝癌细胞的作用及其分子机制,为肝癌治疗提供可能的理论依据.方法 YM 155(0～ 60 nmol/L)处理肝癌细胞株SK-Hep-1细胞,噻唑蓝(MTT)检测24、48 h细胞增殖抑制率,锥虫蓝拒染法检测60 h死细胞率;20 nmol/L YM155作用于SK-Hep-1细胞12、24 h,Western blot检测Beclin 1、LC3 Ⅰ/Ⅱ和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)的表达.结果 MTT结果显示,YM 155(0～ 60 nmol/L)对肝癌细胞增殖抑制率呈时间和浓度依赖性;锥虫蓝拒染法结果显示,相对于对照组[二甲基亚砜(DMSO)],2、4 nmol/L YM155作用肝癌细胞60 h,死细胞率分别为45％、90％,差异有统计学意义(P=0.025).20 nmol/L的YM155作用肝癌细胞12、24 h后,Western blot结果显示,Beclin 1、LC3Ⅱ蛋白表达增加,Mcl-1明显下调,bcl-2表达变化不明显.结论 Survivin抑制剂YM155抑制肝癌细胞的增殖,可能与抑制Mcl-1表达,诱导肝癌细胞发生自噬性细胞死亡有关.
关键词： YM155 肝细胞癌 自噬 髓样细胞白血病-1基因 -
YM155对骨肉瘤细胞系F5M2增殖和凋亡的影响
目的:探讨YM155对人骨肉瘤细胞系F5M2的作用及其机制.方法:体外培养人骨肉瘤细胞系F5M2,不同浓度YM155处理人骨肉瘤细胞系F5M2,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测survivin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测survivin、caspase-3蛋白的表达.结果:YM155可抑制人骨肉瘤细胞F5M2的增殖,且呈剂量依赖性.随着YM155浓度的升高,人骨肉瘤细胞F5M2凋亡率明显增加,同时能够降低survivin在 mRNA水平和蛋白水平的表达,以及激活caspase-3.结论:YM155能够有效抑制人骨肉瘤细胞F5M2增殖,并诱导其凋亡,其可能机制为下调骨肉瘤细胞系F5M2 survivin的表达,继而激活caspase凋亡信号通路.
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YM155对乳腺癌细胞 MDA-MB-231凋亡影响的机制探讨
目的：研究生存素（ survivin）抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡效应及其可能的作用机制。方法采用CCK-8法实验检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响，计算其24及48 h半数抑制浓度（ the half maximal inhibitory concentration ，IC50）；流式细胞术检测细胞凋亡情况；RT-PCR法检测加药与对照组细胞的survivin 和bcl-2的mRNA的表达量；蛋白质印迹法检测sur-vivin、bcl-2、caspase-3、PARP蛋白表达变化情况。结果 YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性，24及48 h的IC50分别为（1.749±0.265）及（0.823±0.125） ng／ml。流式细胞仪检测显示YM155在0.5、1.0及1.5 ng／ml浓度对细胞的凋亡率分别是（10.93±0.94）％、（31.10±1.51）％及（46.83±2.92）％，与对照组（6.4±1.2）％相比差异具有统计学意义（P＜0.01）。 YM155可显著下调survivin的mRNA和蛋白表达，同时降低bcl-2和提高caspase-3、PARP的蛋白表达。结论 YM155能有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡，其诱导凋亡机制是通过下调survivin蛋白，激活caspase凋亡通路，切割DNA而引发凋亡；bcl-2家族基因可能参与此过程。
