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丁苯酞对大鼠急性一氧化碳中毒后半胱氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸蛋白酶-9表达的影响
目的 研究丁苯酞对大鼠急性重度CO中毒后脑组织中半胱氨酸蛋白-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响.方法 通过数字表法将大鼠随机分为3组:正常组、模型组和实验组(均n=10).用CO染毒法制作大鼠急性重度CO中毒模型.实验组大鼠给予丁苯酞80 mg·kg-1,灌胃1次/天,连续7d,正常组和模型组给予等量的0.9％ NaCl.在7d后,用免疫组化染色法观测Caspase-3和Caspase-9阳性细胞数,用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测Caspase-3和Caspase-9mRNA和蛋白的表达水平.结果 正常组大鼠脑组织中Caspase-3和Caspase-9的阳性细胞数分别为4.98±1.34,8.65 ±1.89,mRNA表达水平分别为0.19 ±0.02,0.18 ±0.03,蛋白表达水平分别为0.09 ±0.01,0.08 ±0.01;模型组大鼠脑组织中Caspase-3和Caspase-9阳性细胞数分别为29.43 ±4.53,40.45±5.23,mRNA表达水平分别为0.47±0.05,0.75±0.05,蛋白表达水平分别为0.78 ±0.05,0.86 ±0.07.与正常组对比,模型组的Caspase-3和Caspase-9mRNA和蛋白表达水平显著增高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).实验组大鼠脑组织中的Caspase-3和Caspase-9阳性细胞数分别为22.26 ±3.12,25.09±4.25,mRNA表达水平分别为0.35±0.05,0.41 ±0.05,蛋白表达水平分别为0.37±0.02,0.45±0.02,与模型组对比,Caspase-3和Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平较明显下调,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 丁苯酞可通过下调Caspase-3和Caspase-9的表达水平来抑制神经细胞凋亡进程,从而减轻CO对大鼠脑神经的损害.
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Survivin抑制剂YM155对甲状腺癌B-CPAP细胞凋亡的影响及机制研究
目的:探讨人生存素(Survivin)抑制剂YM155{4,9-二氢-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(2-吡嗪甲基)-1H-萘并[2,3-d]咪唑鎓溴化物}对甲状腺癌B-CPAP细胞活力和凋亡的影响以及凋亡相关酶半胱氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Cysteinyl aspartate specific proteinase-8,Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)表达的变化,探讨其诱导B-CPAP细胞凋亡的可能机制.方法:体外培养B-CPAP细胞,分别以0、0.5、1、2、4、8 nmol/L浓度的YM155进行处理24 、48和72 h,采用CCK-8检测试剂盒检测YM155对B-CPAP细胞活力的抑制作用;B-CPAP细胞随机分为4组:分别以0、1、2 nmol/L YM155和5 μmol/L 顺铂(Cisplatin,阳性对照组)处理24 h.分别采用TUNEL染色和流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI法检测凋亡的情况;采用RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;采用比色法和Western blot检测Survivin和Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性和表达.结果:与0 nmol/L组比较,YM155对B-CPAP细胞活力具有明显抑制作用,并诱导B-CPAP细胞凋亡(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组比较,YM155显著降低B-CPAP细胞Survivin的表达,并上调Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达(P<0.05或P<0.01).结论:YM155对B-CPAP细胞活力具有抑制作用,诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达有关.
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骨肉瘤组织中XIAP mRNA、Caspase-9mRNA的表达变化及意义
目的 观察X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA和Caspase-9 mRNA在骨肉瘤中的表达变化及其与骨肉瘤临床病理指标的联系.方法 采用原位杂交技术检测51例骨肉瘤组织中XIAP mRNA和Caapase-9mRNA,并以10例骨软骨瘤(骨良性病变)组织为对照(对照组).结果 在51例骨肉瘤中XIAPmRNA和Caspase-9 mRNA的表达水平与骨肉瘤的临床病理特征无明显关系,XIAP mRNA的阳性表达率显著高于对照组(P<0.05);Caspase-9 mRNA则显著低于对照组(P<0.05);XIAP mRNA与Caspase-9 mRNA的表达呈等级负相关(r=-0.467,P<0.05).结论 XIAP、Caspase-9 mRNA可能与骨肉瘤的发生、发展有关.以XIAP和Caspase-9为靶点进行诱导骨肉瘤细胞凋亡的治疗,将可能成为临床提高保肢手术成功率及患者生活质量的新治疗思路.
关键词： 骨肿瘤 X染色体连锁凋亡抑制蛋白 半胱氨酸蛋白酶-9 -
黑果枸杞原花青素对小鼠衰老皮肤抗氧化作用及凋亡相关蛋白的影响
目的 探讨黑果枸杞原花青素(PC)对D-半乳糖联合紫外线(UV)辐射后小鼠皮肤氧化应激指标及凋亡相关蛋白的影响.方法 将50只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、维生素E组、PC低剂量组、PC高剂量组各10只.除正常对照组,其余各组每日颈背部皮下注射5％D-半乳糖10 mL/kg,隔日进行UV辐照,连续40 d,建立小鼠皮肤衰老模型.从开始注射D-半乳糖后第11天起,维生素E组给予维生素E50 mg/kg、PC低剂量组、高剂量组分别给予黑果枸杞PC50、100 mg/kg灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积生理盐水灌胃,连续30 d.完成造模后,取小鼠颈背部皮肤,检测皮肤含水量;将皮肤组织匀浆,离心取上清液,采用酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力和丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)水平,ELISA法检测半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、caspase-3水平.结果 与正常对照组比较,模型对照组皮肤组织上清液中SOD、GSH-PX活力和Hyp水平降低,MDA、caspase-3、caspase-9水平升高(P均<0.05);与模型对照组比较,维生素E组、PC低剂量组、PC高剂量组皮肤组织上清液中SOD、GSH-PX活力和Hyp水平升高,MDA、caspase-3、caspase-9水平降低(P均<0.05);且PC低、高剂量组指标变化大于维生素E组(P均<0.05).结论 黑果枸杞PC能够抑制UV照射联合皮下注射D-半乳糖对小鼠皮肤的氧化损伤,并下调caspase-3、caspase-9表达,抑制细胞凋亡,延缓皮肤衰老.
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FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究
目的 观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制.方法 体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组.采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达.结果 模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高.模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低.结论 FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关.
