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SIRT1启动子表达调控载体的构建和活性分析及AML1-ETO对其转录活性的影响
目的:本研究旨在分析AML1-ETO阳性白血病中SIRT1基因的表达及调控机理,寻找SIRT1核心启动子区域.方法:利用实时定量PCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株和白血病临床样本中研究SIRT1基因的表达情况;构建SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,分析其在293T细胞中的活性.采用PCR方法从含有SIRT1基因转录起始位点5'区的基因片段中扩增SIRT1基因核心启动子序列,插入经Xho Ⅰ和HindⅢ双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-Basic,采用阳离子脂质体SuperFect包裹荧光素酶报告重组子转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1-ETO对SIRT1启动子转录活性的调节作用.结果:AML1-ETO的表达与SIRT1的表达呈正相关;成功构建了6种SIRT1基因序列的荧光素酶报告重组子,并通过了酶切以及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告重组子在293T细胞中的荧光素酶活性明显高于阴性对照,明确了SIRT1基因核心启动子位置;研究结果证明融合蛋白AML1-ETO可以正向调控SIRT1启动子活性,SIRT1对AML1-ETO阳性白血病发生发展的影响.研究表明:SIRT1可能是AML1-ETO的靶基因之一.结论:成功构建了SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,找到了SIRT1基因核心启动子区,且核心启动子在293T细胞中有较高的活性.AML1-ETO通过促进SIRT1启动子的活性对其进行转录调控.
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SIRT1基因沉默对DLBCL细胞放射敏感性影响
目的 探究SIRT1基因沉默对DLBCL放射敏感性影响.方法 利用免疫组织化学观察SIRT1在DLBCL组织中的蛋白表达情况,蛋白印迹法检测SIRT1在DLBCL细胞系OCI-Ly3、SU-DHL-2、SU-DHL-4及人正常B细胞永生化细胞系HMy2.CIR中的表达情况.利用Lipofectamine 2000转染试剂盒将si-SIRT1及si-NC转染到SU-DHL-4细胞中并检测转染后SIRT1的表达;MTT法和克隆形成实验检测经放射处理后细胞放射敏感性的变化.成组t检验差异或单因素方差分析.结果 SIRT1在DLBCL组织中的阳性率为72.6%(103/140),明显高于SIRT1在RLH中的阳性率(26.5%,8/25)(P=0.001);SIRT1在DLBCL细胞系中的表达水平显著高于人正常B细胞永生化细胞系HMy2.CIR细胞(P=0.020);SIRT1基因沉默后,SIRT1在SU-DHL-4细胞中的表达量明显降低(P=0.008).放射处理后,SIRT1基因沉默组的细胞增殖率和克隆形成率显著低于对照组(P=0.030).结论 SIRT1基因沉默明显提高了DLBCL细胞的放射敏感性,为DLBCL细胞的治疗提供了一个新的靶标.
关键词： SIRT1基因 基因敲除 弥漫性大B淋巴瘤细胞 放射敏感性 -
单染与复染在观察SIRT1基因敲除小鼠骨关节炎切片中的差异比较
目的 通过SIRT1基因敲除建立相关小鼠膝关节骨关节炎模型,在此基础上观察各种不同单独染色或复合染色技术在观察软骨组织切片形态学中的差异.方法 将小鼠膝关节组织标本分为2组:SIRT1-/-小鼠假手术组(n=6,A组),SIRT1-/-小鼠骨关节炎模型组(n=6,B组).通过前交叉韧带横断加内侧半月板切除术建立膝关节骨关节炎模型,行HE染色、番红O-固绿染色、番红O-阿利新蓝染色、番红O染色、固绿染色、阿利新蓝染色,6种单独染色或复合染色方式观察膝关节软骨组织形态学变化.结果 番红O-固绿染色、番红O-阿利新蓝染色在观察软骨细胞的细胞形态、软骨分层结构的情况、II型胶原纤维的显示、潮线及软骨下骨的改变中,效果更好;而番红O染色、阿利新蓝染色在观察软骨组织缺失方面有一定的优势.结论 在观察SIRT1基因敲除小鼠膝关节骨关节炎软骨组织切片中,与单独染色相比,复合染色在获得软骨结构的各种信息方面优势更加明显.
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SIRT1与抑郁症关系的研究进展
目前全球共有约3．5亿抑郁症患者，每年因抑郁症自杀死亡者可能高达100万［1］。但抑郁症的具体发病机制至今仍未完全明了，近年来，一些学者致力于抑郁症的遗传学研究，发现了许多潜在的致病基因，位于10号染色体上的沉默信息调控因子2样蛋白相关酶基因（SIRT1）便是其中之一。SIRT1基因所编码的蛋白是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（N A D＋）的组蛋白去乙酰化酶，与酵母菌沉默信息调节因子（SIR2）同源，通过多种途径影响DNA损伤修复、细胞凋亡和昼夜节律，并以此影响中枢神经系统功能，导致神经精神疾病［2］。阐明SIRT1基因在抑郁症发病机制中的作用将为诊断、治疗抑郁症提供新的思路与方法，现就目前SIRT1与抑郁症的研究进展作一综述。
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SIRT1-shRNA 慢病毒表达载体转染对A549细胞生物学行为的影响
目的：探讨SIRT1-shRNA慢病毒表达载体转染对人非小细胞肺癌A549细胞SIRT1基因表达、黏附能力、迁移能力及E-cadherin、β-catenin mRNA和蛋白表达量的影响。方法构建SIRT1-shRNA慢病毒表达载体，并用其转染A549细胞。对照组转染277空载体，观察组转染277-iSIRT1。用RT-PCR法检测两组细胞SIRT1 mRNA表达，用细胞黏附实验检测两组细胞黏附能力，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-PCR法检测细胞内E-cadherin、β-catenin mRNA表达，Western blot法检测细胞内E-cadherin、β-catenin蛋白表达。结果观察组、对照组A549细胞SIRT1 mRNA分别为0．48±0．26、1．00±0．00（P＜0．05），黏附细胞数分别为（196．6±9．8）、（125．6±9．8）个（P＜0．05），细胞相对迁移率分别为65％±2％、100％±0（P＜0．05），E-cadherin蛋白表达量分别为1．27±0．16、1．00±0．00（P＜0．05），β-catenin蛋白表达量分别为1．24±0．13、1．00±0．00（P＜0．05）。结论 SIRT1-shRNA慢病毒表达载体可明显下调A549细胞SIRT1表达，提高其下游基因E-cadherin、β-catenin mRNA和蛋白表达量，增强细胞黏附能力，降低细胞迁移能力。
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SIRT1基因多态性与广西永福地区人群长寿的关联性
目的 探讨SIRT1基因多态性与广西永福地区人群长寿的关联性.方法 采用长寿对照设计,选取广西壮族自治区永福县共500人为研究对象,包括长寿组223人、平均年龄(93.17±3.08)岁,对照组277人、平均年龄(46.92±17.12)岁.应用聚合酶链反应-高分辨熔解曲线技术结合测序验证法检测SIRT1基因上的rs3758391,rs3740051,rs2273773,rs4746720和rs10997870位点的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)的分布情况,比较长寿组与对照组人群的等位基因、基因型频率的分布特征,分析SIRT1基因多态性与长寿的关联性.结果 长寿组rs4746720位点CT基因型频率高于CC和TT基因型频率,差异具有统计学意义(P=0.000,OR=2.098,95％CI:1.412-4.117),其等位基因频率在两组间分布的差异无统计学意义.rs3758391 、rs3740051 、rs2273773位点的基因型频率和等位基因频率在长寿组和对照组间分布的差异均无统计学意义.结论 SIRT1基因rs4746720单核苷酸多态性与广西永福地区长寿人群相关联.
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SIRT1基因在糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞表达的初步研究
目的:探讨SIRT1基因在糖尿病性白内障晶状体上皮细胞的表达.方法:选取2012-01/2014-10来我院治疗的糖尿病性白内障患者、年龄相关性白内障患者和外伤性白内障患者各20例,采用RT-PCR法检测各组患者晶状体上皮细胞中SIRT1基因含量,Western blot法检测晶状体上皮细胞中SIRT1蛋白含量,TUNEL法检测晶状体上皮细胞的凋亡率.结果:RT-PCR检测结果显示,外伤性白内障患者组SIRT1 mRNA相对含量高为1.000±0.078,其次为年龄相关性白内障患者组为0.427±0.067,糖尿病性白内障组为0.389±0.112,与外伤性白内障组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot检测显示,外伤性白内障患者晶状体上皮细胞中SIRT1蛋白的表达量高,其次是年龄相关性白内障组,糖尿病性白内障组SIRT1蛋白的表达量低;TUNEL法检测结果显示,外伤性白内障组和年龄相关性白内障组患者LECs细胞凋亡率分别为(4.5±2.3)％和(8.7±4.1)％,差异无统计学意义;而糖尿病性白内障组LECs凋亡率为(24.3±6.1)％,与外伤性白内障组及年龄相关性白内障组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:糖尿病性白内障患者晶体上皮细胞中SIRT1基因及蛋白表达下降,提示该基因参与了糖尿病性白内障的发生,这为我们今后进一步的研究提供了可靠的理论依据.探索调节SIRT1基因在晶状体上皮细胞中表达的有效途径,将为糖尿病性白内障的早期干预治疗提供新的思路.
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SIRT1基因的rs2273773和rs7895833突变与汉族人群冠状动脉疾病风险相关性分析
目的 旨在调查汉族人群冠状动脉疾病患者SIRT1基因rs2273773和rs7895833的单核苷酸多态性.方法 共纳入77例冠状动脉疾病患者和80例对照者.所有冠状动脉疾病患者通过血管造影术确诊.通过巢式聚合酶链反应测定SIRT1基因rs2273773和rs7895833多态性的基因分型.结果 发现在中国汉族人群中,冠状动脉疾病患者和对照组SIRT1基因rs2273773和rs7895833的基因型频率差异无统计学意义(P>0.05).本研究人群具有相比于发表的荷兰人群rs7895833的显著不同的等位基因频率.结论 SIRT1基因遗传变异体rs2273773和rs7895833与中国汉族人群冠状动脉疾病无关.
