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死亡相关蛋白激酶1在慢性淋巴细胞白血病中的表达
目的:研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)在慢性淋巴细胞白血病中的表达水平.方法:用慢性淋巴细胞白血病MEC1细胞系及慢性淋巴细胞白血病患者血液标本提取的B淋巴细胞以研究DAPK1基因表达水平,应用mRNA定量检测和免疫蛋白印迹方法检测mRNA的转录和蛋白的表达情况.结果:mRNA定量和免疫蛋白印迹方法结果表明,慢性淋巴细胞白血病患者体内的DAPK1基因沉默.因此,无论细胞有或没有进行INF-γ处理,MEC1细胞系中DAPK1和自噬相关基因蛋白表达均无明显差异.结论:慢性淋巴细胞白血病中DAPK1基因沉默性表达,使得自噬行为异常,导致疾病发生.
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DAPK1在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达及其作用
目的 探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达及在炎症失控中的作用.方法 将30只雄性C57小鼠按随机数字表法分为5组:正常对照组、LPS诱导急性肺损伤3、6、12、24h组.应用2 mg/kg DAPK1抑制剂TC-DAPK 6预处理小鼠后,再用10 mg/kg LPS诱导小鼠肺损伤.HE染色光镜观察小鼠肺组织病理改变;免疫组化检测肺组织中DAPK1的表达和分布;应用RT-PCR和Western blot检测肺组织DAPK1和NF-κB p65的表达;ELISA检测血清炎症因子TNF-α、IL-6水平变化;Kaplan-Meier生存分析对各组小鼠存活时间进行分析.结果 LPS致伤组肺组织可见明显病理损伤改变且随时间进展加重,而DAPK1蛋白在正常对照组小鼠肺组织仅少量表达,在急性肺损伤小鼠肺组织中表达随时间进展明显增加;与正常对照组相比,LPS组肺组织DAPK1 mRNA蛋白表达水平均明显增高(P＜0.05),血浆炎症因子TNF-α、IL-6均明显升高(P＜0.05).抑制小鼠肺DAPK1表达可明显降低LPS诱导的肺组织中DAPK1和NF-κB p65蛋白水平、血清炎症因子TNF-α、IL-6的水平(P＜0.05).此外,抑制DAPK1可延长LPS致急性肺损伤小鼠的生存期(P＜0.01).结论 DAPK1通过调控NF-κB炎症通路参与了LPS诱导的小鼠急性肺损伤,其可作为潜在的治疗靶点.
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死亡相关蛋白激酶1和CD147在食管鳞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)、CD147在食管鳞癌中的表达状态及其与食管鳞癌预后的关系.方法 应用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应检测DAPK1、CD147在食管鳞癌和正常食管上皮组织中的表达水平,结合临床病理特征进行统计学分析.结果 DAPK1蛋白在食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为31.3％和58.5％,CD147蛋白的表达分别为57.5％和25.0％,差异均有统计学意义(均P＜0.01).不同浸润深度、淋巴结转移状态、TNM分期、分化程度的食管鳞癌患者DAPK1蛋白表达情况不同,差异有统计学意义(均P＜0.01)；不同浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度的食管鳞癌患者CD147蛋白表达情况不同,差异有统计学意义(均P＜0.01).DAPK1 mRNA在52例食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达水平分别为0.236±0.049和0.395±0.058,CD147 mRNA的表达水平分别为0.942±0.204和0.821±0.171,差异均有统计学意义(均P ＜0.01).在无淋巴结转移、分化程度高、病理分期低的食管鳞癌组织中DAPK1mRNA表达水平高；在淋巴结转移、分化程度低、病理分期高的食管鳞癌组织中CD147 mRNA表达水平高.结论 DAPK1、CD147蛋白的表达与食管鳞癌的临床病理学特征有关,DAPK1、CD147可能参与了食管鳞癌的转移过程,DAPK1、CD147作为预测食管鳞癌预后的重要指标.
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高压氧预处理抑制神经元细胞外信号调节激酶活化及与死亡相关蛋白激酶1的相互作用研究
目的 研究高压氧预处理对类缺血神经元细胞外信号调节激酶(ERK)和死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)的影响. 方法(1)体外实验部分:将培养的小鼠神经元分为5组,即对照组、类缺血组、高压氧预处理组、空质粒组、ERK过表达组.对照组不做任何处理,类缺血组细胞经95％NO2+5％ CO2混合气体处理30 min,高压氧预处理组细胞预先经98％O2+2％CO2的混合气体处理2h后同类缺血组细胞处理,空载质粒组转染p3XFlag-CMV空质粒,ERK过表达质粒组细胞转染p3XFlag-CMV-ERK质粒.噻唑蓝(MTT)法检测不同时间点前3组细胞的生长情况,Western blotting法检测前3组细胞中磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达,以及对照组、空质粒组、ERK过表达组细胞中活化caspase-3蛋白及DAPK1的表达.同时采用免疫共沉淀的方法检测前3组细胞中ERK与DAPK1分子的相互作用.(2)体内实验部分:将BALB/c小鼠分为对照组、类缺血组和高压氧预处理组,每组15只.采用免疫共沉淀的方法检测小鼠海马区神经元中ERK与DAPK1分子复合体的表达情况. 结果 细胞分组后24h、48 h、72 h及96h,对照组、类缺血组、高压氧预处理组细胞存活率差异均有统计学意义(P＜0.05),高压氧预处理可以显著抑制类缺血处理引起的细胞存活率的下降.同时3组细胞内p-ERK表达水平差异亦有统计学意义(P＜0.05),高压氧预处理可以显著抑制类缺血处理引起的p-ERK的升高.此外,过表达ERK基因能促进细胞中活化caspase-3的表达,而高压氧预处理可以降低ERK与DAPK1的相互作用. 结论 高压氧预处理可通过抑制ERK的活化及其与DAPK1相互作用,阻断细胞凋亡的激活,从而诱导细胞缺血耐受.
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胃癌中DAPK1表达及其与临床病理因素的相关性研究
目的 检测胃癌中死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因表达水平,并研究其与临床病理因素间的相关性.方法 采用免疫组织化学法(SP)检测胃癌肿瘤组织和癌旁正常组织中DAPK1基因表达,采用半定量评分法评估,分析DAPK1表达水平与胃癌临床病理因素间的相关性.结果 胃癌肿瘤组织标本中,DAPK1蛋白质低、中和高表达分别有52、19、5例,评分为(3.7±1.3)分,癌旁正常组织标本中,低、中表达和高表达分别为4、15、57例,评分为(9.4±2.1)分,胃癌肿瘤组织和癌旁正常组织评分差异具有统计学意义(P<0.01).胃癌肿瘤组织中DAPK1表达在性别、年龄和不同肿瘤部位间差异无统计学意义(P>0.05),而组织学分级、TNM分期、肿瘤大径、淋巴结转移及远处转移对DAPK1表达的影响具有统计学意义(P<0.05);胃癌肿瘤组织DAPK1表达评分与组织学分级、TNM分期、肿瘤大径、淋巴结转移和远处转移呈负相关(P<0.05).结论 DAPK1在胃癌中的表达与肿瘤细胞的生长、浸润及转移紧密相关,可作为胃癌诊断、病情及预后评估的指标.
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死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义
目的 研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系.结果 宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05).结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物.
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甲基化寡核苷酸灭活死亡相关蛋白激酶1基因对白血病K562细胞增殖的影响
目的 探讨互补甲基化寡核苷酸诱导灭活K562白血病细胞死亡相关蛋白激酶1基因(DAPK1)及对其增殖的影响.方法 应用Lipo2000将与DAPK1基因启动子序列互补的甲基化寡核苷酸转染进K562白血病细胞,分别应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和反转录PCR(RT-PCR)检测转染前后DAPK1基因启动子甲基化状态和mRNA表达改变.应用噻唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖变化.结果 正常组K562细胞的DAPK1基因启动子表现为未甲基化状态,可检测到相应mRNA表达;对照组寡核苷酸转染后,DAPK1基因启动子表现为未甲基化状态,mRNA表达和细胞增殖速度与正常组无明显差异;互补甲基化寡核苷酸转染后,DAPK1基因启动子呈甲基化状态,mRNA呈低表达状态,细胞增殖速度较正常组、甲基化对照寡核苷酸转染组显著增加.结论 互补甲基化寡核苷酸可诱导灭活K562白血病细胞DAPK1基因并抑制其mRNA表达,促进细胞增殖.
