首页 > 文献资料
-
慢性髓系白血病细胞中SphK-1/S1P信号通路的初步研究
慢性髓系白血病(CML)是一种以髓系细胞受累为主的多能造血干细胞的克隆性疾病.为探讨SphK-1/SIP信号通路元件在CML细胞中的表达情况,研究P210bcr/abl是否涉及到SphK-1/S1P信号通路,首先采用RT-PCR检测bcr/abl阳性的K562细胞和bcr/abl阳性的原代CML细胞中sphK-1和S1P受体mRNA的表达.进一步利用P210bct/abl特异抑制剂甲磺酸伊马替尼处理bcr/abl阳性的K562细胞和CML原代细胞,然后通过32P-ATP掺入法测定细胞内SphK-1的酶活性.结果表明:K562细胞经2.5 μmol/L甲磺酸伊马替尼处理0.5、2、6、24和48小时后,对sphK-1活性抑制强度分别为0.007%、38.9%、34.6%、28.1%和76.1%;CML原代细胞在使用2.5 μmol/L甲磺酸伊马替尼处理后SphK-1活性较对照下降(16.8-41.9)%.结论:CML细胞中存在SphK-1和SIP的表达,P210bcr/abl具有激活SphK-1的作用.
-
鞘氨醇激酶1对结肠癌细胞血管生成拟态的影响及其机制
目的:研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,Sphk1)对人结肠癌HT-29细胞生成血管拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响及其可能的机制.方法:将人结肠癌HT-29细胞分为Sphkl抑制组、Sphk1激活组、对照组.Sphk1抑制组加入N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl-D-erythro-sphingosine,DMS)50 μmol/L; Sphk1激活组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol 12-myristate-13-acetate,PMA)100nmol/L;对照组加入等量的培养基.采用MTT法检测细胞生长增殖；透射电镜观察细胞形态学变化；Matrigel三维培养法观察VM形成能力；Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力的变化,QT-PCR、Western blot及ELISA技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:DMS显著抑制细胞的增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡；透射电镜可见典型的凋亡特征；三维培养中不能形成管状VM;明显减弱VEGF mRNA及蛋白表达.PMA则显著促进HT-29细胞的增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡；透射电镜可观察到细胞增殖特征；促进三维培养中管状VM的形成；明显增强VEGF mRNA及蛋白表达.对照组、DMS组及PMA组的侵袭细胞数:112.00±6.25 vs 57.00±8.00,142.00±5.57;迁移细胞数:69.33±4.04 vs 42.00±4.16,111.00±8.03; VEGF mRNA表达量:1.000 vs 0.740±0.122,1.220±0.075; VEGF蛋白表达:0.39±0.05 vs 0.23±0.02,0.65±0.06; VEGF蛋白分泌:103.00±8.96 vs 63.89±8.44,201.01±17.93,均P＜0.05.结论:Sphk1可促进HT-29细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡,诱导VM的形成,其机制可能是通过增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力并促进VEGF表达而发挥作用.
-
鞘氨醇代谢物——肿瘤治疗的新靶点
神经鞘脂类是细胞膜的结构成分之一.其代谢产物如神经酰胺、鞘氨醇、1-磷酸鞘氨醇亦是具有生物活性的信号分子,可作为第一和(或)第二信使调控着细胞的生命活动,如细胞的增殖、存活、迁移、新生血管形成.鞘氨醇激酶1是调节神经酰胺、1-磷酸鞘氨醇平衡的限速酶.近年研究表明,神经酰胺、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇可调控肿瘤细胞代谢的多个环节,由此提示神经鞘脂类代谢产物可作为肿瘤治疗的新靶点.
-
优势表达SphK-1基因对K562细胞生物学特性的影响
目的:了解优势表达鞘氨醇激酶-1(SphK-1)对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞生物学特性的影响.方法:使用pLXSN、pLXSN-SphK-1的重组逆转录病毒液感染K562细胞并用终浓度1 000 ng/ml的G418筛选感染pLXSN和pLXSN-SphK-1基因的K562细胞;取对数生长期的K562-pLXSN和K562-SphK细胞提取蛋白收集胞浆蛋白,应用BCA-200蛋白检测试剂盒进行蛋白定量.根据蛋白定量取蛋白含量相同的蛋白提取上清行γ-32P-ATP掺入法检测K562-pLXSN和K562-SphK细胞SphK-1活性;并应用MTT法检测K562-pLXSN和K562-SphK细胞的增殖情况及对不同剂量格列卫的敏感性.结果:K562细胞转染SphK-1基因比转染空载体后的细胞SphK-1酶活性显著增高;K562-pLXSN细胞和K562-SphK细胞培养24 h、48和72 h后细胞增殖无显著性差异;当格列卫浓度为0.1和0.25 μmol/L时,K562-PLXSN和K562-SphK细胞培养72 h后的细胞存活率无明显差异;当格列卫浓度为0.5至10 μmol/L时,K562-SphK细胞存活率显著低于K562-PLXSN细胞(P＜0.05).结论:优势表达SphK-1基因对K562细胞自然增殖无显著影响,但增加了细胞对浓度高于0.5 μmol/L格列卫的敏感性.
-
妊娠高血压血管生成素样蛋白6的表达和意义
目的：探讨血管生成素样蛋白6（Angptl 6）在妊娠高血压（PIH）患者的表达和意义。方法收集妊娠高血压患者和对照组血糖、血脂等生化指标和血压，ELISA方法检测血浆Angptl 6的表达。结果 PIH孕妇妊娠第1~3个月收缩压显著高于对照组，舒张压从妊娠第2~3个月明显高于对照组；妊娠24周、32周，PIH患者血浆Angptl 6的水平明显增加（P＜0.05）；妊娠24周空腹血Angptl 6和收缩压与PIH的发生有相关关系。结论妊娠24周血Angptl 6和收缩压升高是PIH发生的危险因素，Angptl 6可能参与了PIH的发生发展。
-
S1P/S1P1信号通路在糖尿病心肌病大鼠心肌损伤中的作用与机制
目的 探讨S1P/S1P1信号通路在糖尿病心肌病大鼠心肌损伤中的作用与机制.方法 40只SD大鼠分为正常对照组和2型糖尿病心肌病,每组各20只,链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导老鼠建立2型DCM模型,STZ处理8周后,给予老鼠S1P1受体激动剂、S1P1受体拮抗剂干预,观察S1P1受体激动剂、S1P1受体拮抗剂对DCM心肌损伤的影响;HE染色检测心肌组织病理改变,免疫印迹法检测心肌组织Sphk1和S1P1的表达,ELISA法检测组织匀浆液S1P的表达,组织SphK1激酶活性定量检测试剂盒测定SphK1酶活性.结果 与正常对照组比较,DCM组大鼠心脏凋亡增多、心肌肥大,同时SphK1及其产物S1P表达增加,S1P1受体下调,S1P1受体拮抗剂干预加重DCM心肌损伤,而S1P1受体激动剂能减轻心肌凋亡、心肌肥大、胶原沉积等.结论 S1P/S1P1信号通路被抑制可能是DCM心肌损伤的机制之一,调控该通路可能是DCM心肌损伤的防治靶点.
关键词： 鞘氨醇激酶-1 1-磷酸鞘氨醇 1-磷酸鞘氨醇受体1 糖尿病心肌病 凋亡 -
鞘氨醇激酶-1、C-反应蛋白对急性胰腺炎严重程度的预测价值
目的：比较 C-反应蛋白(CRP)和鞘氨醇激酶-1(SphK1)在预测急性胰腺炎(AP)严重程度方面的价值。方法选取2012年12月—2013年7月收治的30例 AP 患者,分为轻型 AP(MAP)组17例和重型 AP(SAP)组13例,另外纳入10例健康者作为健康对照组。 AP 患者在症状发生后、健康者在被选入组后48 h、72 h、5 d、7 d 时分别检测血清 CRP、外周血白细胞中 SphK1 mRNA 及其活性。结果 MAP 组和 SAP 组患者血清 CRP 的水平、外周血白细胞中SphK1 mRNA、SphK1活性4个时间都高于健康对照组(P <0.05),但血清 CRP 的含量在 MAP 组和 SAP 组之间均无统计学差异(P >0.05)。48 h、72 h、5 d 时,SAP 组外周血白细胞中 SphK1 mRNA、SphK1活性都高于 MAP 组(P <0.05)；7 d 时 SAP 组和 MAP 组的 SphK1 mRNA、SphK1活性均无统计学差异(P >0.05)。在48 h 时,SphK1的诊断灵敏度和诊断准确性高,而且 ROC 曲线下面积高达0.946。结论在早期预测 AP 严重程度方面,与血清 CRP 相比,测定外周血白细胞中的 SphK1是一个更好的方法。
-
鞘氨醇激酶-1在结肠癌中的作用研究进展
鞘氨醇激酶(Spk)是一种新近发现的脂类激酶.近年来的研究逐渐阐明了Spk结构特征及其功能,并发现Spk1对肿瘤尤其是结肠肿瘤的发生发展具有促进作用.抑制Spk1不但能促进肿瘤细胞的凋亡,还能提高结肠肿瘤对化疗药物的敏感性.
-
SphK1及其抑制剂对人胃癌裸鼠移植瘤的作用
目的 研究鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,SphK1)及其抑制剂在人胃癌裸鼠移植瘤生长中的作用,并探讨其作用机制.方法 对数生长期SGC7901细胞注射于裸鼠皮下建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,建模成功后将裸鼠随机分为4组(每组8只),分别用生理盐水、SKI-Ⅱ、顺铂(DDP)、SKI-Ⅱ联合DDP进行治疗,每周注射1次,共3次.定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤时间-体积生长曲线.在治疗结束后的第7天脱颈处死裸鼠,取瘤体组织,免疫组化法检测瘤体内SphK1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 成功构建了人胃癌裸鼠移植瘤模型.SKI-Ⅱ联合DDP较SKI-Ⅱ、DDP更显著地减少肿瘤组织SphK1、Bcl-2蛋白的表达(P<0.05),并增加Bax蛋白的表达(P<0.05),且更明显地增加了肿瘤细胞的凋亡率并抑制了肿瘤的生长(P<0.05).结论 SphK1通过引起胃癌细胞内Bax/Bcl-2比值的降低,在胃癌的生长过程中发挥了抑制胃癌细胞凋亡、促进肿瘤生长的作用,SphK1抑制剂SKI-Ⅱ与DDP有协同抗肿瘤作用.
-
siRNA下调鞘氨醇激酶-1对结肠癌LOVO细胞凋亡和侵袭的影响及其机制的研究
目的研究siRNA下调鞘氨醇激酶-1(Sphk1)的表达对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭以及ERK和p38通路的影响.方法采用siRNA抑制Sphk1的表达；采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,Western杂交检测蛋白的表达；采用RT-PCR法检测细胞Sphk1 mRNA 表达,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌.结果Sphk1 siRNA显著抑制Sphk1 mRNA和蛋白表达,并可诱导细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭.抑制Sphk1的表达可降低ERK和磷酸化ERK蛋白的表达,并促进p38和磷酸化p38蛋白的表达,同时可抑制细胞MMP4、MMP9和uPA的分泌.结论抑制Sphk1可能是通过抑制ERK并激活p38 MAPK通路,下调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭并促进细胞的凋亡.
-
Bag-1和Spk-1在进展期胃癌组织中的表达及作用
目的 研究Bcl-2结合抗凋亡基因(Bag-1)和鞘氨醇激酶-1(Spk-1)在胃癌组织中的表达及作用.方法 128例胃癌患者,用免疫组化的方法检测Bag-1、Spk-1蛋白在胃癌组织中的表达,探讨两种基因的表达与胃癌临床病理之间的关系.结果 Bag-1、Spk-1在胃癌细胞的胞浆和胞核中均有不同程度的表达,其中前者阳性表达较强,后者相对较弱.两种基因的表达与胃癌的分化程度和淋巴转移相关.结论 Bag-1及Spk-1上调可以抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌的分化和淋巴转移,两种基因具有协同作用.
-
SphK1高表达肝癌细胞株的筛选及PF-543对其增殖能力的影响
目的 检测鞘氨醇激酶-1(SphK1)在正常肝细胞系L02,肝癌细胞HepG2、Huh7、Bel7402中的表达,筛选SphK1高表达株,并探讨SphK1拮抗剂PF-543对其高表达株细胞增殖能力的影响.方法 体外培养正常肝细胞系L02,肝癌细胞HepG2、Huh7、Bel7402,每组设6个复孔,选对数生长期的细胞提取RNA,通过RT-PCR测定各细胞系SphK1的表达情况;体外培养SphK1高表达株细胞,分为5组:10-7、10-6、2.5×10-6、10-5 mol/L PF-543组及空白组,实验组加入含药培养液,空白组加入等量含0.5％ FBS的培养液,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活力.简单线性相关分析药物剂量依赖性.结果 以正常人肝细胞系L02为参照标准,HepG2细胞中SphK1的表达量高,是正常肝细胞L02中SphK1表达量的(3.28±0.64)倍(P＜0.01);Huh7细胞中SphK1的表达量是正常肝细胞L02中SphK1表达量的(2.07±0.26)倍(P＜0.01),BEL7402细胞中SphK1的表达量是正常肝细胞L02中SphK1表达量的(0.22±0.04)倍(P＜0.01);10-6、2.5×10-6、10-5 mol/L PF-543组的OD450均低于空白组(P均＜0.01),且具有剂量依赖性.10-7 mol/L PF-543对HepG2细胞增殖未见影响.结论 HepG2细胞系是SphK1高表达株,10-6 ～ 10-5 mol/L浓度的PF-543可剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖.
关键词： 原发性肝癌 鞘氨醇激酶-1 鞘氨醇激酶-1拮抗剂 -
抑制鞘氨醇激酶-1/1-磷酸鞘氨醇信号通路减少大鼠肢体缺血再灌注肺损伤
目的 建立肢体缺血再灌注肺损伤(URLI)动物模型,运用鞘氨醇激酶-1(S1P)特异性抑制剂FTY720预处理,观察S1P/1-磷酸鞘氨醇(Sphk-1)信号通路在LIRLI发病过程中的作用.方法 成年健康SD大鼠(300 ～350 g)采用随机数字表法分为5组(n=10).A组:假手术组;B组:生理盐水灌胃7d预处理+缺血再灌注(L/R);C组:FTY720 3 mg[3 mg/(kg.d)]灌胃7d预处理+I/R;D组FTY720 5 mg[5 mg/(kg·d)]灌胃7d预处理+I/R;E组:FTY720 10 mg[10 mg/(kg.d)]灌胃7d预处理+I/R.采用大鼠双下肢缺血3h再灌注4h制备URLI模型.结果 血气分析结果:E组pH(7.35 ±0.15)、氧分压[PaO2(253±58) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]、二氧化碳分压[PaCO2(48±5) mmHg];B组pH(7.18 ±0.11)、PaO2[(148±44)mmHg]、PaCO2[(70±10) mmHg].A组肺组织匀浆S1P和Sphk-1 mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)分别为0.17和0.19,而B组中S1P和Sphk-1 mRNA/GAPDH分别为0.63和0.68.A组湿/干重比(W/D)、中性粒细胞计数(PMN)分别为0.96和1.84;B组W/D、PMN计数分别为1.63和7.25;D组W/D、PMN计数分别为1.28和3.15;E组W/D、PMN计数分别为1.18和1.99.A组观察肺组织正常组织,而缺血再灌注组呈现严重的病变肺,表现为肺间质水肿,炎性细胞浸润,肺泡破裂出血.B组肺损伤评分为7.25分,D、E两组肺损伤评分分别为3.85和1.52分.结论 通过S1P特异性抑制剂FTY720下调S1P/Sphk-1表达能减少肢体缺血再灌注后小鼠肺部炎性细胞浸润,有效减轻肺间质水肿和肺泡破裂出血.
-
鞘氨醇激酶-1在急性胰腺炎中的变化
目的 观察人外周血白细胞中鞘氨醇激酶-1(SphK1)在急性胰腺炎(AP)的炎性反应中的作用.方法 选取30例AP患者,分为轻型急性胰腺炎(MAP)组17例和重型急性胰腺炎(SAP)组13例,另外纳入10例健康者作为健康对照组.在AP症状发生48、72 h 、5、7 d时分别检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6、外周血白细胞中SphK1 mRNA水平及其活性.结果 在48、72 h、5 d时,外周血白细胞中SphK1 mRNA及其活性均呈健康对照组＜MAP组＜SAP组(3组SphK1 mRNA的相对表达量:48 h:0.888±0.724、2.807±1.542、6.433±1.955;72 h:0.842±0.434、2.523±1.460、4.857±1.870;5 d:0.751±0.329、2.335±1.469、3.791±1.851; SphK1的活性:48 h:0.051 ±0.024、0.132 ±0.070、0.303±0.102;72 h:0.049 ±0.023、0.112±0.061、0.223 ±0.092;5 d:0.050 ±0.019、0.115 ±0.072、0.191±0.106,P ＜0.05);而且在48、72 h、5 d时,血清TNF-α、IL-6含量均呈健康对照组＜ MAP组＜SAP组[TNF-α(ng/L):48 h:4.72±1.69、17.48 ± 10.74、50.79±15.44;72 h:3.67 ±1.84、18.73 ±12.12、40.64±13.28;5 d:4.44 ±2.13、17.31±10.33、33.37±14.96;IL-6(ng/L):48 h:6.9±1.9、85.9±37.9、182.8±48.6;72 h:5.5 ±2.4、64.5 ±42.9、138.0±32.0;5 d:6.6±2.8、60.5 ±32.1、94.4 ±30.9,P＜0.05],这与外周血白细胞中SphK1的表达有相同的变化趋势.结论 SphK1的激活可能与AP的炎性反应密切相关.
-
鞘氨醇激酶-1激活ERK通路介导人结肠癌细胞株LoVo侵袭与迁移的实验
目的 研究Sphk1对人结肠癌LoVo细胞侵袭与迁移能力的影响并探讨其作用机制.方法 将人结肠癌LoVo细胞分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组.以Phorbol 12-myristate 13-ace-tate(PMA)为Sphk1激活剂(终浓度为100 nM),N,N-dimethyl-Deryt-hro-sphingosine(DMS)为Sphk1抑制剂(终浓度为50μM),NaCI(终浓度为0.9%)为空白试剂处理LoVo细胞24 h后,用Tramwell Boyden小室模型测定LoVo细胞的相对侵袭率与迁移率;用Western blot方法测定细胞Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2蛋白水平的变化;用ELISA方法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9及uPA的蛋白含量;用半定量RT-PER检测细胞中MMP-2、MMP-9和uPA的mRNA水平.结果 Sphk1激活剂可促进LoVo细胞侵袭与迁移,同时明显增强LoVo细胞中Sphk1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达,并促进MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌.Sphk1抑制剂则抑制LoVo细胞侵袭与迁移,同时抑制Sphkl、ERK1/2与p-ERK1/2的蛋白表达,并抑制MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌.结论 Sphk1可促进人结肠癌细胞株LoVo细胞的侵袭与迁移,其机制可能与激活ERK1/2信号通路从而促进MMP-2、MMP-9及uPA mRNA表达与蛋白分泌有关.
-
鞘氨醇激酶-1调控ERK和NF- κB通路促进HT-29细胞的增殖和侵袭
目的 探讨鞘氨醇激酶-1(Sphk1)对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和侵袭转移的影响及其作用机制.方法 采用(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)诱导人结肠癌HT-29细胞Sphk1的活化和表达,N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)抑制Sphk1的活化和表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测Sphk1的活性,Western杂交检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMp-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌.结果 PMA和DMS能分别有效地诱导和抑制HT-29细胞Sphk1活性和蛋白的表达;同时,PMA能促进细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡;DMS则抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞的凋亡.诱导Sphk1的活化以及表达可促进细胞ERK、p-ERK和NF-kBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMp-9和uPA的分泌,而抑制Sphk1则抑制ERK、p-ERK和NF-kBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌.结论 Sphk1可能是通过激活ERK和NF-k B通路,上调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡.
-
缺氧预处理对创伤性脑损伤大鼠SphK-1表达及血脑屏障通透性的影响
目的 探讨缺氧预处理(HPC)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织鞘氨醇激酶-1(SphK1)表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响. 方法 204只SD大鼠采用随机数字表法分TBI组(96只)、HPC组(96只)和空白对照组(CON组)(12只),其中前2组分伤后1h、4h、8h、12h、1d、3d、7d、14d8个亚组,每亚组12只.HPC组大鼠行HPC预处理3 d(-50 kPa、3 h/d)后采用Feeney自由落体打击法建立TBI模型,TBI组仅建立TBI模型.各组大鼠于相应时间点处死后RT-PCR和Western blotting检测挫伤区周围脑组织SphK-1 mRNA和蛋白的表达,免疫组化染色IgG并评分观察BBB通透性的变化. 结果 TBI组和HPC组大鼠脑组织IgG评分、SphK-1 mRNA和蛋白的表达在TBI后1h即开始升高,1d升至高点(SphK-1蛋白表达分别为0.694±0.016、0.854±0.010),伤后14d时仍高于CON组水平;与TBI组比较,伤后各个时间点HPC组大鼠脑组织IgG评分均较低,伤后1h、4h、8h、12h、1d、3d、7d挫伤区周围脑组织SphK-1 mRNA和蛋白的表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 HPC可以上调TBI大鼠脑组织SphK-1的表达,促进鞘氨醇(Sph)向1-磷酸鞘氨醇(S1P)转化,保护BBB完整性.
-
子宫内膜癌鞘氨醇激酶-1与1-磷酸鞘氨醇的表达和意义
目的 探讨鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase 1,SphK1)与1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)在子宫内膜癌的表达和意义.方法 收集正常子宫内膜和子宫内膜癌患者血浆,行子宫全切手术的子宫内膜癌和子宫肌瘤旁组织,ELISA法检测血浆或组织匀浆液S1P的表达,Western blot法检测组织SphK1的表达,组织SphK1激酶活性定量检测试剂盒测定SphK1酶活性.结果 和正常对照组相比,子宫内膜癌患者血浆S1P的水平和组织S1P的表达明显增加(P＜0.01),子宫内膜癌SphK1酶活性约是正常子宫组织的2.6倍.结论 被激活的SphKl/S1P信号通路可能参与子宫内膜癌的发生发展.
-
HT-29人结肠癌细胞缺氧对鞘氨醇激酶-1表达的影响
目的: 研究体外缺氧对HT-29人结肠癌细胞鞘氨醇激酶-1(SK-1)表达及细胞迁移的影响.方法: 模拟体外缺氧环境,应用RT-PCR及Western blot检测缺氧对HT-29细胞SK-1表达的影响,以及观察细胞迁移能力的情况.结果: 缺氧状态下HT-29细胞SK-1 mRNA及蛋白表达增强,细胞迁移能力增强;且U0126具有抑制SK-1表达增强的作用.结论: 缺氧状态下HT-29细胞迁移能力和SK-1基因表达存在一定关系.
-
si RNA靶向沉默鞘氨醇激酶-1对前列腺癌 PC-3细胞生物学行为的影响
目的：探讨siRNA靶向沉默SPHK1基因对前列腺癌PC‐3细胞生物学行为的影响。方法使用脂质体介导的方法转染人前列腺细胞株PC‐3细胞，通过RT‐PCR和Western‐blot方法分别检测特异性siRNA对SPHK1基因在mRNA和蛋白水平上的沉默效果，CCK‐8法测定细胞生长曲线并观察细胞增殖被抑制情况，Annexin V‐PI法检测细胞凋亡情况，采用 Transwell小室法检测细胞在侵袭力方面的变化。结果经SPHK1 siRNA转染后，PC‐3细胞中SPHK1的表达均低于阴性对照组（NC）和空白组（P＜0．05）；并且SPHK1 siRNA抑制细胞的增殖能力，使其凋亡率增加，侵袭力降低。结论通过抑制前列腺癌PC‐3细胞SPHK1基因的表达，抑制细胞增殖并降低侵袭力，使其凋亡增加，显示出在前列腺癌的发生发展中SPHK1基因发挥着重要的作用。
