首页 > 文献资料
-
慢性髓系白血病患者CD34+CD38-细胞水平JunB和CDH13基因启动子区域的甲基化状态研究
慢性髓系白血病(CML)是骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病,在CML患者细胞水平由于JunB和CDH13基因启动子区甲基化而使这2个抑癌基因的表达受损.为了探讨正常人和CML患者CD34+CD38-细胞水平JunB和CDH13(cadherin-13)基因启动子区域甲基化状态及表达水平的差异,应用流式细胞仪分选出CD34+CD38-细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测5例正常人和8例CML患者骨髓CD34+CD38-细胞JunB和CDH13基因启动子区域甲基化状态,用实时定量PCR(RT-PCR)检测JunB和CDH13基因的表达情况.结果表明:JUNB和CDH13基因在正常人骨髓CD34+CD38-细胞中呈完全性非甲基化状态,CML患者骨髓CD34+CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区甲基化比例分别为87.5%(7/8)和50%(4/8),明显高于正常人(P＜0.05).CML患者骨髓CD34+CD38-细胞中JunB和CDH13基因mRNA相对表达水平与正常人的相比明显降低(2-△CT 分别为1/5.21和1/10.63).结论:在CML患者骨髓CD34+CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区域都发生了高度的甲基化,它们的mRNA表达水平也明显降低,JunB和CDH13基因启动子区域甲基化在CML的发病机制中起到一定的作用,甲基化检测对CML的靶向治疗及新的治疗方法具有重要意义.
关键词： JunB CDH13 DNA甲基化 慢性髓系白血病 CD34+CD38-细胞 -
八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364活化蛋白-1活性和JunB表达的影响
目的 研究八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子-α(rumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)活性和JunB表达的影响.方法 分别采用凝胶迁移试验、Western blot法和RT-PCR法检测CCK-8对TNF-α诱导RSC-364细胞中AP-1活性、JunB蛋白表达和JunB基因mRNA水平的影响.结果 TNF-α可激活RSC-364细胞中AP-1,CCK-8对其具有抑制作用.静息的RSC-364细胞中JunB蛋白表达很少;经TNF-α处理2h,JunB表达增加,而CCK-8对TNF-α的上述效应具有明显的促进作用;FsK(一种cAMP诱导剂)与CCK-8作用类似,对TNF-α的上述效应亦有促进作用;CR1409(CCK-A受体)、CR2945(CCK-B受体结抗剂)和H89(PKA特异性抑制剂)均可部分逆转CCK-8的上述作用.CCK-8可促进TNF-α引起JunB基因mRNA表达的增加.结论 CCK-8引起AP-1活性降低,促进TNF-α诱导JunB蛋白和基因表达增加,该作用是由CCK-A受体和CCK-B受体共同介导的,cAMP/PKA通路可能参与其信号转导途径.
-
AP-1在皮肤肿瘤中的表达及其意义
背景与目的:转录激活蛋白AP-1与细胞的分化、增生、调亡以及肿瘤转化密切相关.本研究探讨AP-1亚单位在皮肤肿瘤及邻近皮肤组织中的表达及其与这些肿瘤发生、发展的关系.方法: 采用免疫组织化学卵蛋白-生物素-辣根过氧化物酶法对皮肤基底细胞癌、鳞形细胞癌、原位癌、角化棘皮瘤及相邻皮肤组织中的c-jun,p-c-jun、 JunB、 JunD, c-fos、Fra-1和Fra-2进行分析 .结果:c-jun和p-c-jun在皮肤基底细胞癌、鳞形细胞癌、原位癌和角化棘皮瘤肿瘤中表达明显增强,JunB在皮肤基底细胞癌中表达明显减弱.结论:c-jun是皮肤肿瘤形成及细胞增生的促进因素,JunB则是抑制因素.
-
《转录因子JunB/AP-1调节多发性骨髓瘤在骨髓微环境中的细胞增殖与耐药》解读
1 研究背景多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种浆细胞肿瘤,表现为骨髓中恶性浆细胞的过度克隆性增殖[1].MM的发病机制,既包括肿瘤细胞本身的遗传改变,也包括由骨髓微环境提供的选择性支持条件.二者都通过激活MM细胞内的重要致癌信号通路,包括Raf/MEK/MAPK、PI3K/Akt、JAK/Stat、NFκB、Wnt、MYC等,来调控MM细胞的增殖、生存、归巢和耐药性[2].对骨髓微环境和MM细胞相互作用的研究,以及对MM骨髓微环境的功能重要性的认识,促进了新的分子靶点的发现.由此衍生的新药和新的治疗方案使MM的治疗发生了根本性的变化.
-
野生型-p53与JunB融合基因对裸鼠肝细胞肝癌移植瘤的抑制作用
目的 探讨野生型(wt)-p53与JunB融合基因抑制裸鼠肝细胞肝癌(肝癌)移植瘤的作用.方法 将18只BALB/c裸鼠按随机数字表法随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,每组6只,分别接种wt-p53与JunB融合基因质粒、携带GFP的空质粒及单纯肝癌细胞HepG2,于注射后的28 d处死荷瘤裸鼠,测量肿瘤体积、肿瘤重量,计算肿瘤抑制率.结果 3组裸鼠移植瘤位于背侧皮下,实验组裸鼠移植瘤较小,阴性对照组与空白对照组裸鼠移植瘤均明显隆起于裸鼠背部皮下.实验组移植瘤的体积、重量明显小于阴性对照组,差异均有统计学意义(LSD-t=4.63,P=0.006;LSD-t=19.56,P＜0.01);实验组移植瘤的体积、重量也明显小于空白对照组,差异均有统计学意义(LSD-t=5.74,P=0.002;LSD-t =27,22,P＜0.01);阴性对照组与空白对照组间移植瘤的体积、重量差异无统计学意义(LSD-t=1.59,P=0.171;LSDt=2.00,P=0.101).实验组平均肿瘤抑制率为84％.结论 wt-p53和JunB融合基因可明显抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长.
-
硝苯地平调控JunB表达拮抗敲除L-型电压依赖型钙通道H9c2细胞缺氧/复氧损伤的研究
目的:探讨硝苯地平(Nif)通过调控JunB的表达拮抗敲除L-型电压依赖型钙通道(CacnalC-/-)H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)损伤.方法:建立CacnalC-/-H9c2细胞H/R损伤模型,用Nif处理细胞.Western Blot检测细胞中JunB和Cleaved caspase-3蛋白的表达,Real-time PCR检测细胞中白介素-6(IL-6)mRNA的表达,比色法测定细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活力.结果:H/R增加细胞中JunB的表达,Nif能够降低细胞H/R状态下JunB的高表达,减少Cleaved caspase-3和IL-6的表达,抑制LDH从细胞中漏出.结论:Nif能通过调控CacnalC-/-H9c2细胞中JunB的表达拮抗心肌细胞H/R损伤.
关键词： 硝苯地平 JunB 敲除L-型电压依赖型钙通道H9c2细胞 缺氧/复氧 -
转录因子JunB在肝癌细胞中的表达、定位及其转录作用研究
目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用.方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定.而后将测序正确的基因片段分别亚克隆入pcDNA3.1(-)和pEGFP-C3真核表达载体中,获得重组载体pcDNA-JunB和pEGFP-JunB.采用脂质体瞬时转染法分别将pEGFP-JunB和pcDNA-JunB导入肝癌细胞HepG_2中,用Western blot法观察外源JunB在肝癌细胞中的表达;用荧光显微镜观察其在细胞内的定位;用双荧光素酶报告基因检测法观察JunB对下游靶分子VEGF的转录调控作用.结果:分别构建表达转录因子JunB和增强型绿色荧光蛋白融合JunB分子的重组表达质粒,并经Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切鉴定正确.将重组表达质粒转染HepG_2细胞后,经免疫印迹法和荧光显微镜检测,可见外源导人的JunB分子在细胞中成功表达并特异性定位定位于细胞核内.荧光素酶报告系统检测显示:JunB对VEGF分子在转录水平具有明显的激活作用.结论:成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因和转录因子JunB基因融合表达的重组质粒.在肝癌细胞中观察到外源瞬时表达的JunB定位于细胞核中,提示其可能发挥转录因子的活性.报告基因结果显示其对肿瘤血管生成密切相关的分子VEGF发挥转录激活的作用,提示JunB分子有可能成为抑制肝癌血管生成的新靶点.
-
JUNB基因和TOB1基因在肝细胞癌中的表达及意义
目的:探讨JUNB基因和TOB1基因的表达在原发性肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用.方法:应用半定量逆转录聚合酶链(RT-PCR)技术检测55例肝癌患者、55例其它肿瘤患者和33例对照组患者外周血JUNB基因和TOB1基因的表达.结果:各组间外周血JUNB基因和TOB1基因阳性表达率无差异,JUNB基因和TOB1基因在肝癌患者外周血中的表达水平明显高于其他组(分别为P=0.003和P=0.000),其他组之间无差异.结论:JUNB基因和TOB1基因在外周血中的mRNA表达水平可能与肝癌发生密切相关,提示其表达水平可能与预测HCC发生、发展有明显相关性.
-
野生型p53/junB融合基因真核表达载体的构建
目的 通过构建抑癌基因野生型p53(wtp53)与核转录因子junB的融合基因真核表达载体,为进一步研究联合基因疗法在肝癌中的应用奠定一定的基础.方法 运用PCR(polymerase chain reaction)、RT-PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)、基因重组技术构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent protein, EGFP)报告基因的wtp53/junB融合基因真核表达载体pEGFP-C1-wtp53/junB.通过观察绿色荧光定位的方法验证wtp53/junB融合基因的真核表达载体转染人肝癌细胞株HepG2的情况.结果 成功地将p53/junB融合基因克隆到pEGFP-C1质粒中,其序列与设计的完全一致;转染人肝癌细胞株HepG2后可观察到绿色荧光定位于细胞核中,证明wtp53/junB融合基因成功转染入肝癌细胞株中.结论 成功构建了携带EGFP的pEGFP-C1-wtp53/junB融合基因真核表达载体,并转染入人肝癌细胞核中,为进一步研究两者在肝癌中的协同作用奠定了基础.
