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AML-M2a细胞体内外诱导TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖情况的研究
为了解AML-M2a细胞体外诱导TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性增殖情况,利用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)体外获取AML-M2a细胞诱导的T细胞,并以RT-PCR扩增4例M2a患者外周血单个核细胞和4例AML-M2a细胞诱导的T细胞中的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3(CDR3).阳性产物进一步经基因扫描分析从而确定AML-M2a细胞体内外诱导的TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖情况.结果显示:4例AML-M2a细胞体内外诱导的Vβ亚家族T细胞表达情况相似,其中3例AML-M2a细胞体内外诱导的一个或两个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖特点.结论:AML-M2a细胞体内外选择性诱导不同的TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖可能是患者T细胞对AML-M2a细胞相关抗原刺激所产生的一种特异性细胞免疫反应.体内外环境的不同对Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖情况有一定的影响.
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TCR Vβ亚家族分析法识别小鼠亚临床MHC 缺失诱导的移植物抗宿主病
目的：研究T细胞抗原受体（ TCR） Vβ亚家族分析法用于亚临床主要组织相容性复合体（MHC）缺失相关的移植物抗宿主病（GVHD）的检测。方法 BALB／c小鼠给予9．5 Gy（950 rad）全身放射，放射后回输T细胞去除的C57BL／6或DBA／2骨髓细胞。将小鼠分为两组：WT组：回输来自野生型骨髓细胞106个／只；MHC－／－组：回输来自MHCⅡ类分子缺失的骨髓细胞106个／只。移植后观察小鼠GVHD典型症状，病理切片确诊GVHD。结果典型的MHCⅡ类分子缺失相关的GVHD可以在异基因（H-2b→H-2d）C57BL／6动物模型中诱导。在DBA ／2模型，MHCⅡ类分子缺失诱导的是亚临床的GVHD。 TCR Vβ亚家族分析提示TCR Vβ6与病理符合度好，可识别该模型亚临床GVHD。结论利用TCR Vβ亚家族分析法发现TCR Vβ6升高可作为识别小鼠亚临床MHC缺失诱导的移植物抗宿主病的指标。
关键词： 移植物抗宿主病 TCR Vβ亚家族 主要组织相容性复合体 克隆清除 动物模型 -
SARS患者康复期淋巴细胞功能状态及T细胞受体Vβ24个亚家族表达的格局
背景:严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是由SARS相关冠状病毒感染引起的急性传染性疾病.但目前其康复期患者细胞免疫状态仍有待进一步研究.目的:观察SARS患者康复期淋巴细胞功能状态和T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族表达的格局.设计:前后对照观察.单位:广东省中医院中心实验室.对象:选择2003-01/04在广州中医药大学第二附属医院收治的76例治愈的SARS患者,全部病例均符合"非典型肺炎的临床诊断标准"、"非典型肺炎重症病例诊断标准、出院标准"及《中医临床诊疗术语证候部分》的诊断标准,男30例,女46例,平均(32±11)岁.选择10名同期健康到院体检者,女5名,男5名,平均(32±7)岁,所有受试对象对检测项目知情同意.方法:①TCR Vβ 24个亚家族的表达检测:取受试对象全血2 mL,用EDTA-K2抗凝管抗凝.在流式细胞术检测专用管中,分别加入各种荧光素标记的mAb:抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD28、抗HLA-DR、PC5-抗CD3mAb、TCR Vβ1 (PE+FITC)、Vβ2(PE+FITC)、Vβ3(FITC)、Vβ4(PE+FITC)、Vβ5.1(PE+FITC)、Vβ5.2(PE),Vβ5.3(PE)、Vβ7.1(PE+FITC)、Vβ7.2(FITC)、Vβ8(FITC)、Vβ9(PE)、vβ11(PE)、Vβ12(FITC)、Vβ13.1(PE)、Vβ13.2(PE)、Vβ13.6(PE+FITC)、Vβ14(FITC)、Vβ16(FITC)、Vβ17(PE+FITC)、Vβ18(PE)、Vβ20(FITC)、Vβ21.3(FITC)、Vβ22(PE+FITC)和Vβ23(PE)10 μL,然后加入抗凝血50 μL.混匀后,于室温避光孵育15 min,再加入溶血素溶血、洗涤.后将沉淀溶在300 μL PBS中,用Coulter ESP流式细胞仪进行检测.②T细胞亚群,T、B细胞的活化状态及Ts细胞和Tc细胞百分率的检测:每次收集5 000个细胞,用仪器所带软件分别计算T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)、活化的T、B细胞(CD3+/ CD25+、CD3+/HLA-DR+、和CD3-/HLA-DR+)、Ts细胞和Tc细胞(CD8+/CD28+、CD8+/CD28-)的百分率.主要观察指标:①T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)的表达.②活化的T、B细胞(CD3+/CD25+、CD3+/HLA-DR+、和CD3-/HLA-DR+)的表达.③Ts细胞和Tc细胞(CD8+/CD28+、CD8+/CD28-)的百分率.④TCR Vβ 24个亚家族的表达.结果:所有受试对象均进入TCR Vβ 24个亚家族检测结果分析,74例SARS患者及健康对照者10名均进入其余检测结果分析.①T细胞亚群的检测结果:CD4+细胞的百分率均数低于参考值[(33.33±6.64)%,(43±9)%.P＜0.01],CD8+细胞的百分率高于参考值[(34.07±6.40)%,(30±9)%,P＜0.01].②活化的T、B细胞表达检测:表达HLA-DR的T、B细胞增加,而表达CD25的T细胞减少.有53例CD25+细胞的百分率低于正常参考值,有64例CD3+/CD25+ T细胞的百分率低于正常参考值.只有CD3+/HLA-DR+和CD3_/HLA-DR+细胞的百分率高于正常参考值,其中表达CD3+/HLA-DR+的T细胞增加36例,表达CD3-/HLA-DR+的T细胞增加30例.③Ts细胞和Tc细胞的百分率:Ts细胞(CD8+/CD28-)的百分率较参考值增高[(28.75±7.31)%,(15.99±5.1)%,P＜0.01];Tc细胞(CD8+/CD28+)的百分率则低于参考值[(5.99±3.60)%,(13.2±4.1)%,P＜0.01].其中有39例Tc细胞的百分率降低,有48例Ts细胞的百分率升高,CD4+与CD8+T细胞的比值均在正常参考值范围内.④TCR Vβ24个亚家族表达:康复期SARS患者TCR Vβ24个亚家族表达中,TCR Vβ14的表达高,TCR Vβ5.3、和23表达次之,出现TCR Vβ24个亚家族表达的不同.正常对照组中只有TCR Vβ14表达高,与SARS患者的结果相一致,但TCR Vβ 24个亚家族的分布格局不同.两组进行比较,Vβ1、Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ11、Vβ13.1、Vβ13.2、Vβ17、Vβ18、Vβ22和Vβ23的表达差异显著,康复期SARS患者组均高于正常对照组(P＜0.05-0.01).结论:康复期SARS患者CD8+CD28- T细胞数的升高可导致CD8+ T细胞数升高;而Ts细胞数的增加,因其分泌的抑制因子增多,从而造成CD3+和CD4+ T细胞数降低.SARS患者康复期TCR Vβ 24个亚家族在T细胞上的表达不同.CD3+/HLA-DR+和CD3-/HLA-DR+ T细胞数的升高,可能与T、B细胞的活化较晚有关.
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CML患者CD4+和CD8+T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析
目的:了解慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者外周血CD4+和CD8+T细胞中TCR Vβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性.方法:利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞(PBMCs)、CD4+和CD8+细胞TCR Vβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性.结果:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞分别表达部分(1～21个)Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8+细胞中,分别以Vβ21(CD4+)和Vβ11(CD8+)亚家族的克隆性增殖多见.结论:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞的TCR Vβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4+和CD8+T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用.
