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异种器官移植中猪内源性逆转录病毒的检测
猪来源的细胞、组织和器官可用于多种疾病治疗.但存在猪传染性病原体感染人体宿主的风险,包括含有3种亚型的猪内源性逆转录病毒(PERVs):PERV-A,PERV-B和PERV-C.异种器官移植的检测应包含筛选猪群的来源(PERV-A和PERV-B和PERV-C表达水平的检测)和受体的筛选(区分PERV之间的转递性和嵌合性).这些测有助于降低PERV传播感染的可能性并对提高异种器官移植的安全性具有重大的意义.
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3′-Me-DAB诱导大鼠肝癌发生过程中p53及相关基因mRNA的定量分析
背景与目的:有关肝癌中 p53基因突变及 p53蛋白表达异常已有报道 , 但其在 mRNA水平上的变化尚不清楚 . 为了解在肝癌发生、发展和预后过程中 p53、谷胱甘肽转硫酶 P( glutathione S-transferase P,GST-P) 、甲胎蛋白 ( α -fetoprotein,AFP) 和白蛋白 mRNA水平的变化 , 本研究定量分析癌前病变和癌灶中 GST-P、 AFP和白蛋白 mRNA的量 . 方法:在 3′ -甲基 -4-二甲胺偶氮苯 (3′ -methyl-4-dimethylaminoazobenzene,3′ -Me-DAB)诱发 F344大鼠肝癌过程中 , 用激光捕获显微取样仪 (LCM)准确获得大鼠肝脏中微小癌灶或癌前病变组织后 , 采用 LightCyclerTM V3 System 实时 (real-time)RT-PCR定量分析这些病灶组织中 mRNA水平 . 结果:在实验的第 6、 12和24周，癌前病变组织中p53mRNA量均显著高于正常组织(P≤0.001)。从第6周到第24周，癌前病变组织中p53mRNA逐渐降低(P<0.01)。癌组织中p53mRNA含量高于正常组织，低于同期癌前病变组织(P=0.028和0.0136)。第24周的癌前病变组织或癌组织中细胞核呈p53强染色。各实验期，癌前病变中GST-PmRNA量明显高于正常组织和癌组织(P<0.001)。癌组织中AFPmRNA的表达量显著高于癌前病变组织和正常组织(P<0.001)，白蛋白mRNA的表达量显著低于这两种组织(P<0.01)。GST-P和AFP分别在癌前病变组织和癌组织中呈灶状强表达。结论：GST-P和AFPmRNA分别在癌前病灶组织和癌组织中强表达，是这些病变组织的重要标志物。p53mRNA在早期肝癌前病变和癌灶中显示高水平的表达，而较晚期p53蛋白升高。
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两种分析miRNA相对表达量方法的比较研究
目的：基于实时反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）基因表达相对定量的分析方法：GenEx软件分析与2（-ΔΔCT）法，建立一种简便、准确的miRNA相对定量方法。方法以 HK-2细胞系 cDNA 为模板，进行PCR扩增，确定佳退火温度；再倍比稀释该模板，用荧光定量PCR测定的Ct值作miR-122和miR-16的标准曲线，计算出相应miRNA的扩增效率。用荧光定量PCR测定健康者和乙型肝炎患者血清中内参miR-16和靶基因miR-122的表达，分别采用GenEx软件分析与2（-ΔΔCT）法来评价相对表达量。结果系列稀释法制作的标准曲线呈现较好的线性相关性，两种 miRNA 的标准曲线 r2值均为0．999，miR-16的扩增效率为97％，miR-122扩增效率为107％。2（-ΔΔCT）法分析乙型肝炎患者血清中miR-122的表达较健康者增高了44．3倍，而GenEx软件分析为54．1倍。结论GenEx 软件分析考虑了更多的影响因素，其结果比2（-ΔΔCT）法更可靠，适用于临床分析。
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c-erbB-2基因表达与乳腺癌关系的研究
目的:探讨乳腺癌组织c-erbB-2 mRNA与蛋白表达之间的关系,从而明确c-erbB-2基因mRNA转录和蛋白表达在乳腺癌演化过程中的意义.方法:建立LightCycler实时RT-PCR方法,检测38例乳腺癌、17例癌旁组织、10例乳腺腺病组织c-erbB-2 mRNA的表达情况;用免疫组化SP法检测以上38例乳腺癌患者c-erbB-2表达情况.结果:乳腺癌组c-erbB-2mRNA的表达水平明显高于其他两组(均为P＜0.001).c-erbB-2mRNA表达水平与蛋白表达水平相关(P＜0.05).结论:c-erbB-2 mRNA表达水平的检测有助于乳腺癌的诊断.
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皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及其EDA、EDB表达与损伤时间的关系
目的 研究培养的皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其可变剪接片段EDA、EDB在损伤后的mRNA水平,为推断早期损伤时间提供参考指标.方法 培养人体皮肤成纤维细胞,换无血清培养液培养24 h后,采用划痕法制作细胞损伤模型,损伤后0、0.5、1、2、6、24 h收集细胞,抽提RNA,实时RT-PCR定量检测总FN及其EDA、EDB的mRNA水平的变化.结果 皮肤成纤维细胞中总FN及其EDA、EDB的mRNA水平随损伤时间的延长而升高.EDAmRNA在损伤后1h达到高峰,EDBmRNA在损伤后6h达到高峰,FNmRNA在损伤后2h达到高峰;在损伤1h后总FN及其EDA、EDB的mRNA表达变化随时间的延长而呈现一种不断上升的趋势.结论 纤维连接蛋白EDA、EDB可作为早期损伤时间推断的较理想的参考指标.
