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三七皂苷对人骨髓造血细胞凋亡相关蛋白表达的影响
本文研究观察三七皂苷(PNS)对造血细胞促进凋亡相关蛋白(Daxx、Fas)和抑制凋亡的核转录因子(NFkB、c-Rel)表达的影响,探讨PNS促进造血细胞增殖,支持生长存活的作用机制.采用半固体集落培养法观察PNS对人骨髓红系、粒系祖造血细胞(CFU-GM、CFU-E)的增殖作用,台盼蓝拒染法观察细胞的存活率,涂片染色法观察细胞形态学的变化,用流式细胞术分析细胞凋亡状况.同时,用PNS处理粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-01 4种细胞株后,提取胞浆蛋白和核蛋白,Western免疫印迹观察Daxx、Fas、NFkB和c-Rel蛋白的表达水平.结果发现:①PNS能够刺激人骨髓红系、粒系祖细胞和HL-60等4种细胞株增殖.②HL-60等4种株细胞经PNS和饥饿处理后,活性良好,镜下未观察到凋亡的形态学特征;AnnexinV分析也未见凋亡的阳性细胞.③Western blot结果显示,经PNS处理的4株细胞Daxx蛋白表达水平与对照相比,下降幅度分别为33.3%-61.5%;HL-60细胞本身表达Fas蛋白低下,PNS处理后也无明显下降,而K562、CHRF-288和Meg-01细胞Fas蛋白表达与对照相比,下降幅度分别为33.3%-71.4%.④NFkB、c-Rel蛋白除HL-60细胞对PNS诱导无明显变化外,其余细胞均出现不同程度地增加,分别提高了2.0-2.7倍和1.5-2.3倍.结论:PNS在某种程度上能够抑制Daxx、Fas蛋白表达,而相应减少造血细胞的凋亡,同时也能通过上调NFkB、c-Rel转录因子,促进细胞增殖,并阻止半胱天冬酶(caspase)连锁链的活化而抑制造血细胞凋亡,这为PNS应用于临床治疗凋亡过度的疾病如再生障碍性贫血提供了可能性.
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Daxx和NF-κB在儿童急性白血病中的表达及其相关性
目的 探讨Daxx在儿童急性白血病(AL)骨髓细胞中的表达及其与NF-κB的相关性,同时观察其与AL临床分型和预后的关系.方法 骨髓涂片取自华中科技大学同济医学院附属同济医院2005--2006年收治的AL患儿和骨髓正常的非恶性血液病患儿,应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测50例儿童AL骨髓细胞Daxx和NF-κB的表达,对照组为20例非恶性血液病且骨髓正常患儿.结果 在50例AL患儿中,Daxx和NF-κB蛋白阳性表达率分别为38.0%和56.0%,显著高于正常骨髓组织中的表达(P＜0.05);Daxx与NF-κB表达呈强相关(P＜0.05);急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿高危组Daxx和NF-κB的表达率分别为55.6%和77.8%,标危组分别为0和16.7%,两组之间差异均有显著性(P＜0.05).结论 Daxx、NF-κB在儿童AL中过度表达,在白血病细胞凋亡和增殖的调控过程中可能起协同作用,且与AL的某些临床特征、疗效和预后密切相关.
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Daxx与蛋白质相互作用对转录调控影响研究进展
死亡结构域相关蛋白(Daxx)是一种多功能的核蛋白,与PML相互作用共定位PML-NB,维持细胞的正常形态与功能.Daxx与PML、SUMO-1、Zacl、ATRX、H3.3、SF-1、AIRE和CREB等蛋白或受体相互作用,发挥转录调控作用,且与这些蛋白质在细胞亚核结构内的定位有关.
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JNK/SAPKs信号转导通路在榄香烯抗肝癌效应中的作用
目的:探讨JNK/SAPKs信号转导通路在榄香烯抗肝癌效应中的作用,为阐明榄香烯抗癌效应的分子机制提供参考.方法:气相色谱法检测榄香烯在Hca-F肝癌细胞内的分布.透射电镜观察SMMC7721凋亡细胞的超微结构变化.利用Western-blotting对榄香烯处理的HepG2肝癌细胞JNK/SAPKs进行的活性分析.利用RT-PCR检测榄香烯处理的SMMC7721肝癌细胞的DAXX基因表达.结果:榄香烯标准品在8.42 min时出现洗脱峰.榄香烯处理3 h后,SMMC7721细胞开始发生具有凋亡特征的变化.榄香烯处理组HepG2细胞的JNK/SAPKs激酶活性次于热休克处理组,高于对照组.榄香烯处理的SMMC7721细胞组未见DAXX基因的表达.结论:榄香烯能够进入细胞内.其引起的肿瘤细胞凋亡可能是通过活化JNK/SAPKs来诱导的.DAXX传人途径在榄香烯诱导的JNK/SAPKs活化过程中可能不起主要作用.
关键词： 信号转导JNK/SAPK 榄香烯 肝癌细胞 Daxx -
胃癌组织中Daxx和Fas蛋白的表达
目的:检测胃癌组织中Daxx和Fas蛋白的表达情况并探讨其临床意义.方法:利用组织芯片技术联合免疫组织化学方法检测71例胃癌组织(男44例,女27例;高分化腺癌14例,中分化腺癌21例,低分化腺癌36例)和19例癌旁正常胃黏膜组织中Daxx和Fas蛋白的表达.结果:共制作1个组织芯片蜡块,含90个位点,有效位点86个(95.6%),包括70个胃癌组织位点和16个癌旁正常胃黏膜组织位点.癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中Daxx蛋白的阳性表达率分别是51.4%和18.8%,Fas蛋白的阳性表达率分别是70.0%和100.0%,差异均有统计学意义(P均<0.05).胃癌组织中Daxx与Fas蛋白的表达呈负相关(rs=-0.387,P<0.05).胃癌组织中Daxx和Fas蛋白表达与患者性别、年龄、胃癌组织分化程度均无关(P均>0.05).结论:Daxx和Fas蛋白的异常表达可能在胃癌发生发展过程中起重要作用,对胃癌组织中2者的联合检测可能为胃癌的发病机制研究及寻找肿瘤治疗方案提供新思路.
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Daxx的转录抑制及激活调控功能
Daxx定位细胞核PODs,可在转录调控中行使转录抑制或转录激活双重功能.Daxx通过转位、化学修饰、染色体调节、直接与转录因子或转录相关蛋白相互作用等多种方式发挥转录调控作用.其中,Daxx通过转位,转录后化学修饰,染色体调节,与转录因子或转录相关蛋白相互作用行使转录抑制功能,但相关研究表明Daxx同样可通过与相关因子相互作用激活转录,但具体作用机制尚不清楚.
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Daxx在转录调控及凋亡中的作用
Daxx是细胞核内的一种新型转录调控蛋白,它与早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemiaprotein,PML)在体内相互作用共定位PML癌基因结构域(PML oncogenic domains,PODs).人Daxx(human Daxx,hDaxx)和PML作为PODs主要蛋白质,关系到PODs球状结构的形成、维持及其它蛋白质在该区的定位.hDaxx能结合Fas死亡结构域(death domain,DD),激活Jun氨基端激酶通路诱导细胞凋亡.hDaxx与PML、Fas等多种蛋白质相互作用,与细胞周期调节及凋亡相关,这将为某些疾病发病机理研究提供一定的理论与实验基础.
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Daxx蛋白在儿童急性白血病中的表达及其临床意义
目的 通过检测Daxx蛋白在儿童急性白血病骨髓细胞中的表达,探讨其与急性白血病临床分型和预后的关系,为进一步研究抗白血病治疗新靶点提供思路.方法 应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测50例儿童急性白血病骨髓细胞Daxx蛋白的表达,对照组为20例非恶性血液病且骨髓正常患儿.结果 在50例急性白血病患儿骨髓细胞中,Daxx蛋白阳性表达率为38.0%,显著高于正常骨髓组织(P＜0.05);Daxx在急性非淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞中的阳性表达率为62.5%,显著高于正常骨髓组织(P＜0.05)和急性淋巴细胞白血病患儿(P＜0.05);Daxx在急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞中的阳性表达率为26.5%,与正常骨髓组织比较差异无显著性(P＞0.05);Daxx在高危(HR)、标危(SR)急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞中的阳性表达率为55.6%和0,两者比较差异有显著性(P＜0.05).结论 Daxx蛋白在儿童急性白血病中异常表达,并且与儿童急性白血病的某些临床特征密切相关,可能在儿童急性白血病的发生发展过程中起重要的作用.
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Daxx在介导ox-LDL诱导巨噬细胞凋亡中的作用
目的 初步探讨Daxx在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡中的作用.方法 通过MTT比色法检测ox-LDL对小鼠源性巨噬细胞(RAW264.7)细胞生长的影响:用AO/EB染色、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究ox-LDL诱导的细胞凋亡.eal time PCR检测细胞内Daxx mRNA的表达情况.结果 ox-LDL能抑制RAW264.7细胞的生长,抑制作用呈剂量-效应关系;50 mg/L ox-LDL处理RAW 264.7细胞48 h后,AO/EB染色细胞呈凋亡特征性改变,并且DNA断裂片段分析显示电泳图出现梯形条带;流式细胞检测显示相同时间不同浓度ox-LDL(0、12.5、25、50、75 mg/L)处理RAW264.7细胞48 h和相同浓度不同时间(50 mg/L,48、72 h)处理细胞,细胞凋亡率逐渐升高;Real time PCR结果表明不同时间和不同浓度的ox-LDL处理RAW264.7细胞后,Daxx mRNA表达水平呈时间和浓度依赖性增加,其中50 mg/L ox-LDL处理细胞48 h组Daxx mRNA表达高.结论 ox-LDL有诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡的作用,其机制可能与Daxx表达增高从而启动细胞凋亡有关.
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Daxx与PML在HeLa和Caski细胞株中的定位观察
目的 分析宫颈癌细胞内早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和死亡域相关蛋白(Daxx)的定位,为进一步研究高危型HPV16和HPV18的致癌机制奠定试验基础.方法 培养HeLa细胞和Caski细胞,利用间接免疫荧光试验,在激光共聚焦显微镜下观察并分析PML和Daxx在细胞内的定位;分析Caski细胞中Daxx与HPV16 E6蛋白定位.结果在HeLa细胞和Caski细胞,PML红色信号和Daxx绿色信号在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;Daxx绿色信号与PML红色信号重叠时,依然显示各自的绿色信号与红色信号.在Caski细胞,HPV16 E6和Daxx在细胞中分布不均匀,呈区域性聚集;表达红色信号的HPV16 E6与表达绿色信号的Daxx重叠成黄色信号.结论 在Caski细胞和HeLa细胞,PML定位于细胞核的PML-NBs;Daxx在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;两者未发生共定位.Daxx与HPV16 E6蛋白在Caski细胞共定位于胞浆与胞核.
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异丙酚对H2O2刺激下细胞内ASK1蛋白激活的影响
目的 探讨在H2O2刺激下,异丙酚对细胞中Daxx-ASK1信号通路的影响.方法 对体外培养的HEK293细胞分为对照组、H2O2刺激组以及H2O2刺激合并异丙酚处理组.采用免疫荧光、Western blot及MTT等方法,观察异丙酚预处理对H2O2刺激下的HEK293细胞存活率以及细胞中Fas死亡结构域相关蛋白(Daxx)的亚细胞定位以及凋亡信号调节激酶1(ASK1)激活的影响.结果 在200～500 μmol/L H2O2刺激下,异丙酚在一定程度上能有效保护细胞,缓解抗氧化应激损伤.进一步实验发现,H2O2刺激细胞后,与H2O2刺激组相比,异丙酚处理组细胞中Daxx蛋白大部分仍然聚集在细胞核中,只有少部分移人到细胞浆中,相应ASK1的激活程度也较低.结论 氧化应激刺激下,异丙酚可通过抑制细胞中Daxx蛋白的出核,进而抑制胞浆中ASK1蛋白的激活,从而起到保护细胞、抑制细胞死亡的效能.
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细胞凋亡通路及转录调控中的Daxx
Daxx是90年代末期发现的蛋白质家庭中的新成员,初发现它是一种Fas受体胞浆死亡结构域结合蛋白.
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Daxx亚细胞定位研究进展
死亡域相关蛋白(death domain-associated protein,Daxx)是一种高度保守的核蛋白,在转录调控、致癌、抵抗病毒感染等方面有重要作用.Daxx可定位于早幼粒细胞白血病蛋白核体、核质、核仁、胞浆和异染色质.Daxx通过修饰或与其他蛋白相互作用后能在亚细胞区室之间发生转位.应激条件下,Daxx与多种分子相互作用并发生转位,进而影响下游信号通路.本文综述了Daxx在不同条件下的亚细胞定位及在各亚细胞区室之间的转位.
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糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织中FADD、Daxx的表达及其意义
目的:研究Fas相关死亡域蛋白(FADD)、死亡域相关蛋白(Daxx)在糖尿病缺血再灌注脑组织损伤中的作用.方法:36只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、脑缺血再灌注组和糖尿病脑缺血再灌注组.大鼠腹腔内注射链脲佐菌素制作糖尿病模型,之后再应用栓线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.于缺血1h再灌注12h后对各组大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色测定梗死体积,Tunel法检测细胞凋亡数目,免疫组化染色及Western blot检测缺血半暗带侧皮质区FADD、Daxx的表达.结果:与脑缺血再灌注组相比,糖尿病脑缺血再灌注组的神经功能缺损评分、梗死面积及凋亡细胞数均有明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).糖尿病脑缺血再灌注组免疫组化染色检测FADD灰度值为110.18±4.21、Daxx为101.26±3.27;Western blot检测FADD蛋白定量为1.191±0.041、Daxx为1.389±0.052.脑缺血再灌注组免疫组化染色检测FADD灰度值为131.46±3.24、Daxx为123.16±2.19;Western blot检测FADD蛋白定量为1.035±0.032、Daxx为1.146±0.083.与脑缺血再灌注组相比,糖尿病脑缺血再灌注组FADD及Daxx蛋白的表达均明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:FADD、Daxx可能参与了糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的病理生理过程,FADD、Daxx表达增加可能是糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的机制之一.
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肝细胞癌组织中Daxx的表达及临床意义
目的 探讨人肝细胞癌中死亡结构域相关蛋白(Daxx)的表达情况及其临床意义.方法 组织芯片联合免疫组化法及Western blot检测Daxx在肝细胞癌中的表达情况;结合患者临床病理参数和随访资料进行统计学分析.结果 Daxx的表达主要定位于肝细胞癌的细胞质,正常肝组织的细胞核;Daxx的表达与AFP、肝炎史、肝硬化史、肿瘤分化程度、TNM分期、门静脉癌栓及Ki67表达相关(P＜0.05);Kaplan-Meier生存曲线显示Daxx阴性组患者的总生存期(OS)与无进展生存期(PFS)更短;单因素生存分析显示Daxx表达程度、TNM分期、门静脉癌栓及Ki67表达程度与术后生存期相关;多因素COX比例风险回归模型分析进一步显示Daxx的表达程度、TNM分期及Ki67表达程度为患者独立的预后因素.结论 Daxx的异常表达可能与肝细胞癌的发生、发展及预后有着密切的关系.
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Daxx抗病毒感染的研究进展
死亡结构域相关蛋白(death domain associate protein,Daxx)[1] 是一种多功能蛋白,能与多种细胞因子、细胞蛋白或病毒蛋白相互作用,抑制病毒转录.Daxx与早幼粒细胞白血病蛋白(promyleocytic leukaemia protein,PML)相互作用共定位PML核体(PML nuclear bodies,PML-NBs),即PML癌基因结构域( PML oncogenic domains,PODs)或核结构域10(nuclear domains 10,ND10).Daxx具有内在的抗病毒防御作用,但它与病毒之间的相互作用的关系及机制还不清楚.正常情况下,Daxx定位细胞核ND10,与PML一起维持ND10的结构与功能.当细胞被病毒感染后,某些病毒蛋白进入ND10,破坏其稳定性,有利于病毒基因的转录与病毒的复制[2].因此,Daxx不仅参与病毒的转录调控,而且参与细胞内的抗病毒作用.现就近年Daxx在人巨细胞病毒( human cytomegalovirus,HCMV)等病毒感染中的作用做一简要概述.
