首页 > 文献资料
-
哈族食管鳞癌中PLCE1基因启动子甲基化水平的实验研究
目的 探讨PLCE1基因启动子甲基化与食管鳞癌发生发展的关系.方法 分别用免疫组化(IHC)和甲基化特异PCR(MSP)方法检测51例新疆哈萨克族食管鳞癌及相应癌旁正常组织中PLCE1蛋白表达水平及其启动子甲基化水平,分析其与病理资料相关性;分别用Western blot及MSP检测食管鳞癌细胞在5-aza-dC作用前后PLCE1蛋白表达及启动子甲基化变化情况.结果 新疆哈萨克族食管鳞癌组织中PLCE1蛋白表达高于癌旁正常组织,而其基因甲基化水平则较低(P<0.001),且蛋白高表达的癌组织中其甲基化水平低于蛋白低表达的癌组织(P=0.028),PLCE1甲基化水平与其蛋白表达水平具有明显的相关性(χ2=4.791,P=0.028),并与患者的淋巴结及远处转移(χ2=7.242,P=0.027)和TNM分期(χ2=7.883,P=0.019)明显相关;在食管鳞癌细胞系中PLCE1甲基化程度同样与蛋白表达水平成反比,5-aza-dC处理可抑制TE-1和Kyse150的PLCE1甲基化,提高其蛋白表达.结论 食管鳞癌组织中PLCE1甲基化低与其蛋白表达高、淋巴结和远处转移及TNM分期相关,5-aza-dC处理可抑制PLCE1甲基化程度,增高其蛋白表达.
-
CDKN2/p16甲基化的研究与结直肠癌
抑癌基因CDKN2/p16在结直肠癌等多种肿瘤中缺失、点突变及甲基化,导致肿瘤的发生发展.甲基化是其失活的主要机制.应用甲基化特异PCR,检测恶性肿瘤患者外周血中的甲基化改变,在早期诊断、监测术后复发和判定预后方面,具有重要的临床意义.
关键词： CDKN2/p16基因 结直肠癌 DNA甲基化 甲基化特异PCR -
BRCA1基因启动子异常甲基化与散发性乳腺癌的关系
目的探讨散发性乳腺癌BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其与散发性乳腺癌关系.方法用甲基化特异PCR(MSP)法对散发性乳腺癌病人癌组织、癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织进行BRCA1异常甲基化检测.结果在58例散发性乳腺癌中有17例癌组织检出了BRCA1基因启动子异常甲基化,甲基化频率为29.3%(17/58),相应的癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织均只检出未甲基化的BRCA1.在组织分型中,浸润性导管癌与浸润性小叶癌无显著差异(P＞0.05),二者各自与髓样癌+黏液腺癌有显著差异(P＜0.05).有淋巴结转移的BRCA1基因启动子甲基化率高于无淋巴结转移组(P＜0.005).BRCA1甲基化与散发性乳腺癌的肿瘤分级及病人绝经与否均无显著差异(P＞0.05).结论在散发性乳腺癌中,BRCA1基因启动子具有很高的甲基化率,并与散发性乳腺癌的组织分型、恶性转移等方面有一定的关系.
-
大肠癌组织p16基因甲基化与临床病理特征的关系
目的研究p16基因启动子CpG区甲基化的改变与大肠癌发生及其临床病理特征的关系.方法采用甲基化特异PCR技术(MSP法)研究大肠癌组织p16基因甲基化,并分析其与临床病理特征的关系.结果30例大肠癌组织中有12例(40.0%)呈p16 CpG区甲基化阳性.Dukes C、D期组织p16 CpG区甲基化发生率明显高于Dukes A、B期.有转移的大肠癌组织p16甲基化发生率(84.6%)明显高于无转移者(5.9%).结论p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活,参与大肠癌的发生和发展.大肠癌组织p16 CpG区甲基化与Dukes分期、肿瘤转移有关.p16甲基化可作为评估大肠癌患者预后的1个指标.
-
乳腺癌p16基因甲基化及与蛋白表达的关系
目的:探讨散发性乳腺癌中p16基因异常甲基化状况及其与蛋白表达的关系,进而研究散发性乳腺癌中p16基因异常的表遗传学作用.方珐:用甲基化特异PCR(MSP)和SP法研究68例乳腺癌组织及相应癌旁正常组织中p16基因启动子甲基化状况及蛋白表达情况.结果:p16基因在68例散发性乳腺癌组织中的甲基化率为29%,且其甲基化与肿瘤组织分型、患者居住地及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤患者绝经与否及组织分级无关(P>0.05);P16蛋白在所有肿瘤标本中的表达下降率为51%,在相应癌旁组织中均呈阳性表达,二者有显著性差异(P<0.05),P16蛋白表达下降与肿瘤患者淋巴结转移及患者居住地明显相关(P<0.05),与患者绝经、组织分级和分型无关(P>0.05);在20例p16甲基化的癌组织标本中,P16蛋白表达下降率(95%),显著高于48例未发生甲基化的乳腺癌标本下降率(33%),两者有显著性差异(P<0.05),乳腺癌患者组织p16基因甲基化检出率与P16蛋白表达下降率具有良好的一致性(Kappa=0.506),而p16未发生甲基化的正常乳腺组织和乳腺良性病变组织其蛋白均呈阳性表达.结论:在散发性乳腺癌中p16启动子甲基化改变会明显降低P16蛋白表达,p16基因启动子甲基化是其蛋白表达下降的重要原因,这种机制更倾向于农村乳腺癌患者.
-
内皮素-3基因启动子甲基化及其表达在乳腺癌中的临床意义
目的 检测内皮素-3(EDN-3)基因启动子甲基化及其表达在乳腺癌组织中的变化,并分析其临床意义.方法 采用甲基化特异PCR(MS-PCR)和实时定量PCR(RT-PCR)方法检测42例乳腺癌组织(实验组)及50例正常乳腺组织(对照组)EDN-3基因启动子甲基化发生率及其mRNA表达,比较以上两指标变化在乳腺癌各临床参数之间的统计学差异.结果 实验组EDN-3启动子甲基化检出率为64.29％(27/42),对照组EDN-3启动子甲基化检出率为8.00％ (4/50),差异有统计学意义(x2 =42.17,P＜0.01),该检出率在患者不同年龄,不同肿瘤组织类型和大小,有否区域淋巴结转移及远处转移之间差异均无统计学意义(P＞0.05).实验组EDN-3 mRNA表达较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=-8.21,P＜0.01),但这种降低在上述不同临床参数之间差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论 EDN-3基因异常甲基化与乳腺癌密切相关,它能影响其mNRA转录水平,对其进行检测能为乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助.
-
联合检测粪便ECAD基因甲基化和隐血在结直肠癌诊断中的价值
目的 探讨粪便ECAD甲基化联合隐血在结直肠癌(CRC)中的诊断价值.方法 收集50例健康体检者、50例结直肠良性病变者、50例CRC患者的粪便标本.利用甲基化特异性PCR(MSP)的方法 检测粪便中ECAD基因的甲基化情况,根据肠镜病理诊断进行验证,比较粪便ECAD甲基化率、粪便潜血实验(FOBT)及两者联合对CRC诊断的敏感性及特异性,并进行统计学分析.结果 CRC患者粪便ECAD甲基化率(78%)明显高于健康体检者(16%)和结直肠良性病变者(26%);同时,CRC患者FOBT阳性率(64%)亦明显高于健康体检者(2%)和结直肠良性病变者(26%),差异有统计学意义(P<0.001).粪便ECAD甲基化率与CRC患者肿瘤数目(P=0.048)、病理分级(P=0.006)、TNM分级(P=0.002)及淋巴结转移(P=0.002)密切相关.CRC患者粪便FOBT敏感度为64%(95%CI:49.1%~76.7%),特异度为86%(95%CI:77.3%~91.9%);而ECAD敏感度为78%(95%CI:63.7%~88.0%),特异度为79%(95%CI:69.5%~86.2%).ROC曲线分析提示ECAD的ROC曲线下面积(AUC)为0.795(95%CI为0.716~0.874),略高于FOBT的AUC(0.750,95%CI:0.661~0.839),而两种联合的AUC为0.806(95%CI:0.728~0.884),诊断效能高.结论 粪便ECAD基因甲基化的检测是早期诊断CRC的有效方法 ,其联合FOBT能有效提高诊断效能.
-
GSTM1基因多态性及启动子甲基化在结肠癌细胞系中的研究
目的 研究参与内毒物代谢的重要酶谷胱甘肽-S-转移酶M1(glutathione-s-transferase M1,GSTM1)在结肠癌细胞系中的基因表达状况与其遗传基因型及启动子甲基化的关系.方法 采用多重PCR方法检测GSTM1基因型,甲基化特异PCR(MSP)方法检测GSTM1基因启动子甲基化状态;用5-aza-dC处理结肠癌细胞系,RT-PCR方法检测GSTM1基因转录水平.结果 结肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116为GSTM1非空白基因型,而HCT116、Lovo、Colo结肠癌细胞系为GSTM1空白基因型.MSP检测发现SW1116细胞中GSTM1基因主要呈非甲基化状态,其他5个细胞系中呈甲基化状态,而且基因表达缺失.经5-aza-dC处理后,HT29和SW480细胞的GSTM1基因表达复活,而HCT116、Lovo、Colo细胞中GSTM1仍无扩增.结论 GSTM1基因转录受到遗传基因型和表观遗传启动子甲基化双重调控.
-
MGMT非细胞核酸血清学检测联合启动子甲基化实验明显提高替莫唑胺靶向治疗效果的初步研究
目的 探讨O6-甲基鸟氨酸DNA甲基转移酶(Methylation Ganinine Methylate Tranmethylases,MGMT)非细胞核酸血清学检测联合启动子甲基化实验对提高替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)临床治疗效果的新的方法学.方法 应用现代先进的实时定量PCR技术,在血液样本中鉴定MGMT基因来源的非细胞核酸,同时对手术中获得的肿瘤样本进行MGMT基因启动子甲基化修饰检查.后结合两者的结果鉴定患者是否有条件接受TMZ的化疗.结果 我们检测到27例为甲基化特异性(Methylation specific PCR,MSP)阴性同时非细胞核酸(cell free nucleoacid,cfNA)也为阴性,22例MSP阴性cfNA同时阳性,19例MSP阳性cfNA也为阳性.在临床治疗中cfNA阳性是TMZ治疗的关键决定因素.结论 通过这一方法学上的改进我们为更多的病人找回了TMZ的化疗机会,提高了胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)肿瘤病人的治疗效果.
