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转基因动物引领医药产业飞速发展
医药产业发展经历了天然药物和化学合成药物的漫长历史进程,随着DNA重组技术的问世,高产值、高效率的基因药物的出现给医药生产带来了巨大的变革,转基因动物的迅速发展更是医药领域日新月异发展的助推器,推动了整个医药产业的蓬勃发展.
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低氧诱导型VEGF真核表达载体的构建及其体外递送的应用与功能鉴定
目的 构建低氧诱导型的血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体,建立体外递送方法并对其效能进行鉴定.方法 应用基因重组技术,在真核表达载体pGL4.73[hRluc/SV40](pSV)启动子上游插入促红细胞生成素(EPO)增强子,构建低氧诱导型表达载体(pEPO-SV),以海肾荧光素酶(Rluc)为下游报告基因;随后以VEGF165基因取代Rluc插入到pEPO-SV质粒,同时将其插入到pSV质粒作为对照,分别获得pEPO-SV-VEGF和pSV-VEGF表达载体;在体外分别将表达Rluc或VEGF165的质粒转染人胚肾293T细胞,在正常和低氧条件下处理24h和48h后,通过Rluc或VEGF165的表达对所构建载体的低氧诱导功能进行鉴定;然后基于聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒建立质粒的细胞内递送方法,并在体外细胞缺氧模型中对上述低氧诱导型真核表达质粒的效能进行鉴定.结果 在质粒构建中,分别通过酶切、PCR扩增和DNA测序证实了EPO增强子和VEGF165基因的成功插入与正确性.表达Rluc或VEGF165的质粒分别转染293T细胞后,正常培养条件下报告基因Rluc(其一质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为2448.24±158.51和3173.97±379.92,其二质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为55500.00±3237.05和51193.18±866.32)及目的基因VEGF165表达差异无统计学意义(P>0.05),而在低氧情况下Rluc(氯化钴低氧下,质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为4857.70±1223.28和16432.64±1618.73;低氧培养箱中,质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为2504.45±213.20和17274.35±685.60)及VEGF165表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),表明所构建的pEPO-SV和pEPO-SV-VEGF质粒具有典型的低氧诱导表达活性.利用PLGA纳米颗粒在体外293T细胞中进行pEPO-SV与pSV递送后,在正常培养条件下与低氧条件下报告基因Rluc的表达变化与上述一致,即正常培养条件下,处理24h与48h后pSV、pEPO-SV质粒的荧光表达值分别为149.44±4.01、127.09±15.05与1074.91±114.78、1064.56±137.48;低氧条件下,处理24h和48h后pSV、pEPO-SV质粒的荧光表达值分别为3265.34±440.00、8828.87±637.03与3202.06±33.43、9114.75±292.06.结论 成功建立了典型的低氧诱导型VEGF真核表达系统，并建立了有效的体外递送方法；这一低氧诱导型表达载体及递送方法在缺血、缺氧等组织损伤疾病中可能具有重要的应用前景.
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重组人生长激素增加死亡风险待定
美国食品药品管理局(FDA)于2011年8月4日发布药物安全公告:尚未确定重组人生长激素可增加死亡风险[1].此次信息是针对FDA于2010年12月22日发布的相关安全信息的更新.重组人生长激素是一种使用DNA重组技术生产的与人体自身分泌的生长激素接近的蛋白质.在美国,重组人生长激素被批准用于治疗小儿由于生长激素缺乏而致的身材矮小(包括先天性生长激素缺乏)、特纳综合征、努南综合征、普瑞德威利症候群等[2].
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leptin RIA在肝病中的研究进展(文献综述)
1994年Zhang等[1]应用定向克隆法首次从肥胖和糖耐量异常的动物ob/ob小鼠中成功克隆出肥胖基因(obese gene,ob基因)和人类的同源序列,人与小鼠问0b基因的编码序列同源性高达84%,基因leptin的高同源性提示ob基因及其表达产物功能的高度保守性.1995年Halaas等[2]应用DNA重组技术,由大肠杆菌合成了人和小鼠ob基因的表达产物,因其基本作用能使动物体重降低而变瘦,故被命名为leptin.1998年Potter[3]在活化的肝星状细胞(HSC)中发现leptin的mRNA和蛋白后,人们开始注意leptin与肝脏疾病的关系.研究发现leptin对脂肪肝、肝炎、肝纤维化、肝硬化等慢性肝病的发生、发展有一定的作用.本文就leptin与慢性肝病的相关研究进展作一综述.
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计算机模拟预测治疗性抗体聚集倾向性的进展及应用
由于具有靶向性高、不良反应少等优势,治疗性抗体己成为生物技术产业的重要研究领域.诸多重大疾病如肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、糖尿病、老年性痴呆等都有望用抗体药物进行治疗,以抗体为基础的分子设计和靶向治疗也是近年生物医药产业的大增长点.但目前在抗体药物的研发和生产过程中仍然存在一些问题亟待解决.其中,抗体分子聚集是影响药物成药性的关键因素之一,筛选和设计稳定高效的抗体药物是药物研发早期阶段的重要目标.相较于传统筛选方法,应用计算机模拟技术预测蛋白质的聚集倾向为抗体药物的稳定性和高度可溶性提供了重要参考信息,将有效地提高药物的研发效率.本文重点介绍了己成功应用于治疗性抗体领域的聚集预测方法,并对这些方法的原理与应用前景进行总结,为基于计算机模拟的抗体研究提供参考.
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人类S期激酶相关蛋白2表达质粒的构建
目的:克隆人类S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因,构建其表达质粒,为今后进一步研究Skp2的生物学功能提供基础.方法:采用RT-PCR技术扩增人类Skp2 cDNA全长序列,运用DNA重组技术将其重组于pcDNA3.1/myc-His A质粒,构建Skp2表达质粒.结果:通过酶切电泳分析及DNA测序分析证实,实验成功构建了Skp2表达质粒.结论:Skp2表达质粒pcDNA3.1/myc-His A-Skp2构建成功,为进一步研究Skp2的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊断和预后中的作用奠定了基础.
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分子生物学在重组抗体中的应用
本文综述了以DNA重组技术为代表的分子生物学技术在重组抗体方面的应用.
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DNA重组技术的基本工具综述
DNA重组技术是生物工程的核心,也是现代生物学的一个重要部分,自从诞生之日起就获得了极大地关注,获得了快速地发展.DNA重组技术是基于细胞水平或分子水平的一种生物技术,所以进行基因重组就必然有着一套相应的工具,它们的发现和发展对于DNA重组技术具有着至关重大的意义.本文主要介绍DNA重组技术的基本工具,并且对于该工具的原理以及相应的作用都进行了论述.后对于DNA重组技术基本工具的未来进行了展望.
