首页 > 文献资料
-
肝细胞癌中磷酸化p27kip1与JAB1的表达及意义
p27kip1(p27)是重要的细胞周期负性调控因子,其蛋白表达水平和亚细胞分布改变与肝细胞癌的发生密切相关[1-2].在肿瘤细胞中存在多种转录后途径抑制p27蛋白的表达,磷酸化是重要的途径之一[3].
-
荧光显微成像技术在光敏剂亚细胞定位及损伤研究中的应用
一、光动力学疗法的基本原理及光敏剂亚细胞定位研究的重要意义 光动力疗法( photodynamic therapy, PDT)是指静脉或局部给予光敏剂,应用可见光或近红外光照射后吸收光子能量,在有氧状态下传递能量,产生对细胞有毒性的物质如单线态氧和其他氧自由基 [1] .这些物质能和细胞内成分发生反应而造成细胞损伤.激发态单态氧寿命极短,在细胞内扩散不超过 10～ 20 nm.因此,靶细胞光动力损伤主要位点和光敏剂的亚细胞分布紧密相关 [2].
-
肿瘤光动力学疗法的机制
光动力学疗法(PDT)是指利用光敏剂和光治疗浅表肿瘤的一种非手术疗法,近20多年已应用于许多肿瘤的临床治疗.关于PDT的作用机制、影响疗效的因素和如何提高肿瘤细胞的应答是当今研究的主要内容.本文综合了国外近年在此方面的研究动态,着重讨论了光敏剂和其亚细胞分布、光和氧等影响PDT效应的主要因素及线粒体、细胞表面受体、凋亡相关蛋白和细胞间质在PDT中的作用和机制,并对未来的研究方向做一概述.
-
柔红霉素在耐药细胞株K562/ADR内的异常分布
目的了解化疗药物在糖蛋白(Pgp)耐药细胞株K562/ADR亚细胞结构的异常分布及其与耐药的关系。方法采用共聚焦激光扫描显微镜、荧光法和RT-PCR等方法, 研究柔红霉素(DNR)在K562/ADR细胞亚细胞结构的分布及其与耐药的关系，以及维拉帕米尔(verapamil)、布雷菲尔得菌素(brefeldin A)、氯喹对细胞内DNR异常分布的影响。将3种特异染色线粒体、高尔基体、溶酶体的荧光物质Rh123、NBD-ceramide、中性红作为探针，鉴定分隔储留DNR的细胞器。结果在K562/ADR细胞中，DNR荧光主要集中在核周和周边胞浆，核内及胞浆其他部位荧光很少。这种分布方式与Rh123荧光在该细胞的分布极其相似，与DNR在敏感细胞K562/S细胞核、浆均匀分布不同。verapamil可逆转DNR在K562/ADR的异常分布，而氯喹、brefeldin A无此作用。结论 DNR在耐药细胞的异常分布参与了肿瘤细胞耐药的形成，Pgp在此过程中发挥了重要作用。
关键词： 柔红霉素 多药耐药 细胞株K562/ADR 亚细胞分布 -
HER-2反义寡核苷酸对靶基因抑制作用的时相变化与微观分布研究
目的:研究靶向HER-2基因、具有不同活性的反义硫代寡核苷酸(S-ODNs)在SK-BR-3细胞内的微观分布差异,以及与靶基因转录和翻译抑制作用的关系.方法:运用实时定量PCR和Western印迹方法检测反义寡核苷酸对细胞靶基因转录和翻译抑制的时相性变化,用激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察6-羧基荧光素标记S-ODNs在靶细胞内的分布.结果:反义S-ODNs能够在mRNA与蛋白水平抑制HER-2的表达.不同序列的抑制活性各不相同,但大抑制强度均出现于转染后48～72 h之间,此后靶基因表达逐渐恢复.高活性序列主要均匀分布于细胞核,且持续时间长,低活性序列呈点状分布于胞质,少量分布于细胞核且持续时间短.结论:活性不同的S-ODNs亚细胞分布有显著区别,且分布变化与对靶基因的抑制效应具有对应关系.
-
胆固醇基修饰的普鲁兰纳米粒的摄取机制及亚细胞分布研究
目的 研究胆固醇基修饰的普鲁兰(CHSP)纳米粒的体外HepG2细胞的摄取机制及亚细胞分布.方法 采用异硫氰酸荧光素(FTTC)标记CHSP,透析法制备FITC标记的CHSP(FITC-CHSP)自组装纳米粒并进行表征.采用MTT法考察CHSP纳米粒对HepG2细胞的毒性.选用选择性的内吞途径抑制剂氯丙嗪、菲律宾菌素和阿米洛利来研究HepG2细胞摄取CHSP纳米粒的机制.后,采用细胞免疫荧光法对内质网、高尔基体和溶酶体进行染色,使用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察不同的孵育时间CHSP纳米粒的亚细胞分布.结果 成功合成了FITC-CHSP,且FITC-CHSP能在水介质中自组装成纳米粒,该纳米粒呈规则球形,平均粒径为(63.0 ±1.9) nm.MTT结果表明CHSP纳米粒对HepG2细胞无明显的细胞毒性.内吞抑制实验表明网格蛋白介导的内吞途径以及巨胞饮途径共同参与了CHSP纳米粒的入胞过程.纳米粒的亚细胞分布实验表明:在研究的孵育时间(4 h)内,并未发现CHSP纳米粒进入高尔基体和内质网;当纳米粒与HepG2细胞孵育30 min时,没有纳米粒定位于溶酶体中,随着孵育时间的延长,大量纳米粒分布于溶酶体中.结论 CHSP纳米粒有望成为细胞内递送治疗剂的一种通用载体.
关键词： 胆固醇基修饰的普鲁兰 纳米粒 异硫氰酸荧光素 摄取机制 亚细胞分布 -
槲皮素逆转HL-60/ADR多药耐药机制的研究
目的探讨槲皮素在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADR的多药耐药.方法以HL-60/ADR细胞为研究对象,用RT-PCR法检测耐药基因MRP1的表达及槲皮素对其表达的影响;采用共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞HL-60/ADR内亚细胞结构分布的改变.结果 HL-60/ADR中有MRP1的过量表达,且槲皮素能下调该基因的表达;槲皮素能恢复DNR在HL-60/ADR细胞中的异常分布,回归其作用靶点,逆转耐药.结论 DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药基因形成有关,槲皮素在体外直接抑制MRP1功能,恢复DNR在细胞内的分布.
关键词： 槲皮素 细胞株HL-60/ADR 多药耐药 亚细胞分布 -
水通道蛋白3、8和9的异常亚细胞分布参与大鼠酒精性肝病的发病
目的 研究水通道蛋白(aquaporin,AQP)3、8和9在大鼠酒精性肝病模型中的表达和亚细胞分布的情况.方法 将18只SPF级雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组,配对对照组和酒精造模组,每组各6只,分别给予正常啮齿类固体饲料、配对液体饲料和含酒精的液体饲料,喂养6周.通过免疫组化染色、Western blot、实时荧光定量PCR和免疫电镜等方法研究大鼠酒精性肝病动物模型中AQP3、8和9的表达水平及亚细胞分布情况.结果 AQP8、AQP9分布于毛细胆管膜、线粒体内膜等亚细胞结构.酒精摄入可以使大鼠肝脏细胞膜AQP8、AQP9的表达增加;减少AQP8在肝细胞毛细胆管膜和线粒体内膜上的分布并且增加AQP9在肝细胞毛细胆管膜上的分布;增加回肠AQP3和AQP8的膜浆表达比;而在结肠,慢性酒精摄入使AQP8和AQP9的膜浆表达比均下降.结论 AQP3、AQP8和AQP9在大鼠酒精性肝病模型中亚细胞分布异常可能参与酒精性肝病的发病过程.
-
槲皮素逆转柔红霉素在耐药细胞株K562/ADR内的异常分布
目的研究槲皮素处理前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞株K562/ADR亚细胞结构的不同分布.方法利用蒽环类抗生素固有的荧光,通过共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用后DNR在耐药细胞株K562/ADR内亚细胞结构分布的改变.结果与DNR在敏感细胞株K562/S细胞核、胞浆均匀分布不同,在K562/ADR细胞,DNR主要集中在核周及周边胞浆,核内DNR荧光很少;经槲皮素处理后,可恢复DNR在K562/ADR内细胞核、胞浆中的弥漫分布.结论DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药的形成有关,槲皮素能逆转DNR的这种异常分布.
关键词： 槲皮素 多药耐药 共聚焦激光扫描显微镜 细胞株K562/ADR 亚细胞分布 -
3条硫代寡核苷酸的亲和性与内皮细胞吸收的比较研究
目的研究硫代寡核苷酸的亲和性及其在内皮细胞株的吸收与亚细胞分布.方法利用电泳迁移分析法检测硫代寡核苷酸的亲和性;将同位素标记的硫代寡核苷酸与ECV304细胞直接孵化,24h后测定内皮细胞的吸收率及亚细胞分布.结果3条硫代寡核苷酸(T21GTa、T14Gta及T15Gta)的亲和性(Kd值)分别为2.3×10-9、3.8×10-9及1.5×10-8(M),细胞吸收率分别为11.9%、10.8%、11.1%,核沉淀放射活性分别为77.25%、76.75%、69.32%.结论3条硫代寡核苷酸能够与内皮细胞TF基因SSRE的3个Egr-1/Sp1位点结合,具有较好的透膜性、耐酶性及稳定性,能够透过内皮细胞膜和核膜,抵达核内靶基因部位.
-
细胞药代动力学研究进展
经典的药物代谢动力学理论是建立在血浆药物浓度测定的基础上,常难以真实有效地预测体内药物的药效.很多药物必须穿透多重生物屏障,与细胞内的靶点相结合才能发挥药效.因此药代动力学研究迫切需要从“宏观”的血浆药物浓度深入到“微观”的细胞/亚细胞水平.综述细胞药代动力学研究领域取得的进展,重点介绍细胞药代动力学理论的提出、技术体系的建立及其在药物研发、筛选、临床方面的应用.
-
P-糖蛋白与多药耐药的关系
肿瘤多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)是指一种药物作用于肿瘤使之产生耐药性后,该肿瘤对未接触过的、结构无关、机制各异的多种抗肿瘤药也具有交叉耐药性的现象.耐药的产生取决于作用靶点部位的药物浓度、靶点本身的量和质以及靶点和药物之间的相互作用,而MDR产生的机制比较复杂,涉及到药物的外排增加和亚细胞分布改变;药物作用靶标如拓扑异构酶改变;代谢转化改变;损伤修复增强;凋亡相关通路改变;细胞增殖速率变化;体内药代动力学因素等.这些机制常可同时存在,但以一种为主,且不同机制间常相互影响.本文就近年来MDR产生机制研究较集中的药物转运泵P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)进行综述,旨在为抗肿瘤MDR的药物研究和应用提供参考.
-
肾癌转移相关基因CXC趋化因子受体4核定位信号的结构分析与功能鉴定
目的 分析肾癌转移相关基因CXC趋化因子受体4(CXCR4)核定位信号序列的组成结构,并鉴定其功能.方法 首先通过生物信息学方法检索Ensembl和PSORTⅡPrediction在线数据库,分析CXCR4核定位信号序列的组成和结构.然后根据生物信息学分析结果,通过重叠延伸聚合酶链反应和基因克隆技术构建含有CXCR4核定位信号序列突变基因与绿色荧光蛋白基因的融合基因质粒,并将其转染入肾癌细胞表达,在荧光和激光共聚焦显微镜下观察CXCR4核定位信号序列突变体蛋白的亚细胞分布情况.结果 CXCR4蛋白的核定位信号序列为其第146 ～149位氨基酸,组成为精氨酸-脯氨酸-精氨酸-赖氨酸(RPRK).荧光和激光共聚焦显微镜下,核定位信号序列突变的CXCR4蛋白分布于肾癌细胞膜和细胞质,不再分布于细胞核,而野生型CXCR4蛋白除细胞膜和细胞质外,仍可分布于肾癌细胞核.结论 CXCR4蛋白的核定位信号序列确为其第146 ～ 149位氨基酸,该突变序列中任一碱性氨基酸位点均可导致CXCR4核分布能力丧失.
关键词： 肾细胞癌 CXC趋化因子受体4 亚细胞分布 核分布 -
饮食因素对大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的影响
随着生活方式的改变,2型糖尿病的发病率逐年增加.Maianu等[1]发现,2型糖尿病患者的脂肪细胞表现出富含葡萄糖转运蛋白4(Glucose Transporter 4,GLUT4)囊泡的亚细胞分布及转位异常.胰岛素抵抗是2型糖尿病的始动因素和关键环节之一.
-
Nogo-A在皮层神经元中的亚细胞分布模式研究
目的 观察体外不同发育阶段神经元亚细胞组分中Nogo-A蛋白的含量,以及Nogo-A在神经元特化部位的分布特点.方法 体外培养的原代皮层神经元,第1天、3天、7天、14天,分别抽提细胞浆、膜组分、细胞核和细胞骨架4个组分,利用Western blot检测不同时间点,各个组分中Nogo-A的含量.利用免疫荧光化学染色考察Nogo-A在树突、轴突、生长锥以及突触部位的分布特点.结果 在不同发育时间点,Nogo-A都大量表达于细胞膜和细胞器膜组分,其次为细胞浆.在树突发育的关键阶段1～7 d,细胞核中可见相对分子质量约为80x103的Nogo-A降解片段.定位结果显示,Nogo-A大量分布于神经元的胞浆、树突和轴突,尤其富集于生长锥以及突触结构.结论 Nogo-A丰富表达于和突起生长密切相关的特化结构中.发育早期细胞核中Nogo-A的降解片段可能参与调控树突发育.
-
纳米二氧化硅在人支气管上皮细胞内的亚细胞分布和遗传毒性
背景与目的 纳米二氧化硅广泛应用于社会生产生活中,肺部是吸入暴露纳米二氧化硅的主要靶器官,因此,二氧化硅对肺部的生物毒性作用引起人们的广泛关注.本研究旨在探讨纳米二氧化硅在人支气管上皮细胞内的亚细胞分布和遗传毒性.方法 应用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察不同粒径二氧化硅在人支气管上皮细胞(immortalized human bronchial epithelium cells,BEAS-2B)内的亚细胞分布；应用单细胞凝胶电泳检测不同粒径二氧化硅处理BEAS-2B细胞24 h后的DNA损伤,了解不同粒径二氧化硅的遗传毒性作用.结果 透射电镜观察到微米二氧化硅不能进入细胞,纳米二氧化硅赋存在细胞质,纳米二氧化硅导致线粒体、内质网等细胞器损伤.纳米二氧化硅导致比微米二氧化硅更严重的DNA损伤(P＜0.05).结论 二氧化硅的粒径决定二氧化硅颗粒物是否能进入细胞及在细胞内的分布,纳米二氧化硅对细胞遗传毒性比微米二氧化硅严重.
-
瘢痕疙瘩TβRⅡ数量和亚细胞分布的研究
目的:通过对瘢痕疙瘩(K)TGF β 1及其Ⅱ型受体(Tβ RⅡ)数量、亚细胞分布研究,探讨K发生的病理机制.方法:应用组织切片免疫组织化学、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测20例K、8例正常皮肤组织及其体外培养的成纤维细胞中T β RⅡ的表达状况,比较K与正常皮肤T βRⅡ表达数量和亚细胞分布的差异.结果:免疫组化显示T β RⅡ在正常皮肤组织中主要表达于表皮的基底层、角质层、汗腺、毛囊及小血管内皮细胞、成纤维细胞的细胞膜和细胞浆,在K组织中主要表达于角质层、基底层细胞和成纤维细胞的细胞膜、细胞浆与细胞核.流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测显示体外培养的成纤维细胞T β RⅡ荧光表达强度K明显高于正常皮肤,T β RⅡ在正常皮肤成纤维细胞非连续表达于细胞膜和细胞浆,在K成纤维细胞中连续表达于细胞膜,弥散表达于细胞浆和细胞核.结论:K中T β RⅡ的数量和亚细胞分布与正常皮肤存在差异,可能为K重要的发病机制.
关键词： 瘢痕疙瘩 转化生长因子β1Ⅱ型受体(TβRⅡ) 亚细胞分布 -
ICP-MS法研究肺癌组织中微量元素亚细胞分布
目的:建立一种肺癌组织中微量元素亚细胞分布的分析方法.方法:采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)研究了肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中Cr、Mn、Fe、Co、Cu、Zn、Se、Cd 8个微量元素在细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体和细胞上清液等亚细胞组分中的分布.结果:除Se元素外,其余各元素在亚细胞组分中均呈非均匀分布,采用t检验进行统计比较,所有待测元素在肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织的亚细胞分布中均存在不同程度的显著性差异,在细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体、细胞上清液等5个亚细胞组分中,肺癌组织中Cr、Mn、Fe、Co、Zn、Cd 6个元素的含量均低于癌旁组织和正常肺组织,而Se和Cu的含量高于癌旁组织和正常肺组织.结论:采用ICP-MS法可实现肺癌组织中微量元素亚细胞分布的准确分析,微量元素的变化与肺癌的发生、发展密切相关,对肺癌过程变化的研究和指导临床治疗均具有重要意义.
关键词： 电感耦合等离子体质谱(ICP-MS) 肺癌组织 微量元素 亚细胞分布
