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重组SARS-CoV核衣壳蛋白的表达及免疫原性研究
我们利用全基因合成方式及原核表达系统获得大量纯化的N蛋白,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究提供新的思路.由于长片段目的基因在原核系统中不易表达,根据抗原性预测分析将N蛋白分成两部分表达,第一部分为N-1蛋白1~549 bp,第二部分为N-2蛋白496~1269 bp,上下游分别设计BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点,并将基因中包含这两种酶切位点的基因以无义读码方式进行突变,通过全基因合成分别将两段基因克隆至原核表达载体pET32a(+),由上海生工生物工程技术公司完成,测序证实序列无误.
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肺癌患者血清中细胞角蛋白-2G2检测的临床意义
肿瘤早期发现和早期诊断是肿瘤防治的关键,肿瘤标志的研究与应用对肿瘤诊断及指导临床治疗有重要价值[1].细胞角蛋白(CK)-2G2是一种新型肿瘤标志,其为CK-19的全长片段.我们检测分析肺癌和肺结核患者及健康人血清中CK-2G2含量,以评价CK-2G2在肺癌早期诊断和辅助诊断中的临床应用价值.
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阿尔茨海默病患者线粒体CO2基因片段的突变分析
长片段和短片段的巢式聚合酶链反应(PCR)已经成为监测DNA片段缺失的常用手段,2000年,我们利用PCR及巢式PCR技术扩增了阿尔茨海默病(AD)患者29例老年人(65~84岁)的编码910 bp细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ的mtDNA片段(CO2),通过扩增片段的多态性分析和CO2片段的序列分析进一步探讨CO2基因缺失、重排和碱基突变在AD发生发展中的作用.
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利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆长片段基因的研究
目的:采用不依赖连接反应的克隆法,利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆Notch2长片段基因。方法将难以扩增的Notch2 cDNA的编码序列(7416 bp)人为分成3段,引物设计时对此3个片段和载体骨架的引物进行碱基硫代磷酸化修饰,用这些引物扩增Notch2的3个片段和载体骨架。然后用T7核酸外切酶分别处理PCR产物,产生4个具有3′互补突出末端的片段,并将此4个末端突出的片段退火复性,完成Notch2基因克隆。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示Notch23个片段和载体骨架的PCR产物大小与预期大小相符,经退火复性获得的克隆通过PCR、酶切和测序进行克隆鉴定,确定Notch2编码序列已经插入到pcDNA3.0-3?Flag载体中。结论利用T7核酸外切酶和引物的碱基磷酸化修饰进行的不依赖连接反应的克隆方法能够用于长片段基因的克隆。
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四种DNA提取试剂盒提取效果的比较
随着科学技术的不断进步,疾病的及时诊断也在不断改善.有些疾病可以通过对DNA的分析进行诊断,其中广泛使用的就是实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术[1],为了获得高质量的荧光定量PCR结果需要高质量的DNA模板.目前DNA提取试剂盒层出不穷[2],而不同的DNA提取试剂盒的提取效果及提取速度等存在较大的差异.对于不同目的和条件的实验,需要选择不同的试剂盒以满足后续的分析检测[3].本研究选取了天根公司3种DNA提取试剂盒,以及Omega公司的1种DNA提取试剂盒.实验选取了未染色石蜡切片(A1-A24)和苏木素-伊红(HE)染色石蜡切片(B1-B6) 2种类型共30例样本,以Her2(80 bp)和EGFR18(350 bp) 2个片段进行荧光定量PCR分析,比较操作时间、提取效率、扩增Ct值等因素,为短片段扩增及长片段扩增所选用的试剂盒提供实验依据.
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从滤纸血斑中抽提恶性疟原虫DNA进行长片段PCR扩增