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大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及分子分型
目的：研究大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及分子分型。方法2007-2011年从杭州市3家医院分离到22株对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌。琼脂稀释法测定抗生素低抑菌浓度（ MIC）；接合试验、PCR扩增和序列分析等研究细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的分子机制。脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分型（MLST）和系统发育分型（phylogenetic typing）等对菌株进行分子分型。结果22株大肠埃希菌亚胺培南和美罗培南的MIC范围为1～16μg/ml，厄他培南为2～64μg/ml。所有菌株产KPC-2型碳青霉烯酶及各种β-内酰胺酶，部分菌株同时产质粒介导的AmpC酶。22株大肠埃希菌均可通过接合试验或转化试验将碳青霉烯耐药性传递给大肠埃希菌EC600，使后者获得blaKPC-2基因及与供体菌相似的耐药性。 PFGE显示仅少数菌株为相同克隆或密切相关；MLST显示常见的序列类型为ST131（9株）和ST648（5株）， ST38和ST405各2株；系统发育分析显示9株ST131菌株均为B2群，另有11株属于D群，B1群和A群各1株。结论杭州地区产KPC-2大肠埃希菌主要为世界范围流行的多重耐药菌株ST131，其次为ST648。
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采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产KPC大肠埃希菌ST131和ST405分型的研究
目的 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速检测产KPC大肠埃希菌ST131、ST405,并对该方法的可行性进行评价.方法 收集浙江省人民医院临床分离46株大肠埃希菌,扩增blaKPC耐药基因,采用多位点序列分型方法(MLST)进行分型.MALDI-TOF MS对大肠埃希菌进行鉴定并对不同克隆的峰图进行主成分分析和算法统计,获得分型区分的特征峰.结果 46株KPC型大肠埃希菌均携带KPC-2耐药基因,MLST方法检测到2种ST型,分别为ST131和ST405.主成分分析图显示ST131和ST405可分为2簇,其中2株ST131和3株ST405分类错误.ClinProTools软件4种算法结果基本相似,方法特异度和灵敏度分别为93.27％和97.92％.用于区分ST131和ST405的特征峰主要为8 331.84、4 166.44、4 860.21和2 783.66 Da.这4个峰区分具有统计学意义,有较高准确性.结论 采用MALDI-TOF MS可快速区分产KPC大肠埃希菌ST131和ST405,具有操作简单、耗时短、区分灵敏度和特异度高以及成本低等优点,能用于大肠埃希菌克隆分型研究.
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上海市一区级医院老年患者尿路致病性大肠埃希菌分子分型和耐药性分析
目的：了解上海市普陀区老年患者分离的尿路致病性大肠埃希菌（UPEC）的分子流行病学特征和耐药特征。方法收集上海中医药大学附属普陀医院2013年1月至2015年3月自泌尿道感染住院老年患者分离的72株 UPEC ，进行多位点序列分型（MLST ），检测β‐内酰胺酶基因和质粒介导的喹诺酮耐药基因（PMQR），检测 gyrA 和 parC 基因喹诺酮耐药决定区（QRDR）基因突变，并进行体外药物敏感试验。均数比较采用 t 检验，率的比较采用χ2检验或 Fisher 确切概率法。结果UPEC 对环丙沙星、头孢噻肟、复方磺胺甲口恶唑的耐药率分别为76．4％、73．6％、65．3％，而对亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、哌拉西林‐他唑巴坦仍保持高度敏感。72株 UPEC 中，55株（76．4％）为超广谱β‐内酰胺酶（ESBL）阳性菌株，其中49株（68．1％）携带 blaCTX‐M 基因。在55株对环丙沙星耐药的菌株中，51株（92．7％）UPEC gyrA 和 parC 基因 QRDR 均有3～4个位点的错义突变，突变热点为 gyrA的83位、87位氨基酸和 parC 的80位、84位氨基酸。72株 UPEC 中常见 ST 型为 ST131（18／72，25．0％）、ST1193（7／72，9．7％）、ST405（7／72，9．7％）、ST38（5／72，6．9％）和 ST648（3／72，4．2％）。ST131为导致社区获得性泌尿道感染的优势 ST 型。 ST131、ST405、ST38和 ST648表现出多重耐药特性，大多数为产 CTX‐M 型 ESBL 。结论本研究的社区老年患者携带的 UPEC 中存在以 ST131克隆为代表的多重耐药菌株流行，需要加强监测，预防其广泛流行。
关键词： 尿路致病性大肠埃希菌 老年患者 多位点序列分型 耐药性 gyrA parC 超广谱 β-内酰胺酶 ST131 -
尿路感染B2-ST131大肠埃希菌菌株毒力和耐药性分析
目的 分析B2-ST131大肠埃希菌克隆菌株在尿培养中的分布、耐药性和毒力特点.方法 收集2012年尿培养大肠埃希菌162株,多重PCR对大肠埃希菌进行种系分型;对B2型菌株进行多位点序列分型法(MLST)鉴定B2-ST131克隆菌株;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行遗传相关性分析;PCR分析毒力基因iutA、ompT、fyuA 、fdeC 、fimH、traT、cvaC、pap、kpsMT、pAI、usp、aer、hlyA、cnf和chuA的流行性;分析B2-ST131菌株和非B2-ST131菌株在耐药性和毒力基因分布的差异.结果 162株大肠埃希菌中35株为B2型,其中17株经鉴定为B2-ST131克隆菌株.PFGE显示162株细菌具有很大的遗传多样性.毒力基因ompT、usp和chuA在B2-ST131克隆菌株中的流行性显著高于非B2-ST131组(P均＜0.05).B2-ST131组细菌对左氧氟沙星的耐药率高于非B2-ST131(88.2％ vs60.7％,x2 =3.867,P=0.049).结论 B2-STI31大肠埃希菌克隆菌株在我院尿培养中有一定的流行性,对左氧氟沙星的耐药率略高,主要携带ompT、usp及chuA等毒力因子.
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血流感染O16-ST131和O25b-ST131型大肠埃希菌的流行、系统发育群及耐药性
目的 探讨大肠埃希菌ST131型菌株的流行,及其与非ST131耐药性是否存在差异,ST131感染者与非ST131感染者临床特征是否存在差异.方法 通过收集中南大学湘雅医院2016年1月～12月血流感染患者大肠埃希菌非重复菌株144株,采用多重PCR方法进行系统发育分群,采用等位基因特异性PCR进行ST131菌株筛选及O血清型分型,收集144例患者的临床信息,比较ST131感染者与非ST131感染者的临床特征有无差异,采用Vitek2 compact药敏分析仪检测细菌的耐药性.结果 系统发育分群结果显示,144株大肠埃希菌菌株以B2群为主,占41.0％(59/144),其次分别为F群、B1群和E群,分别占16.7％(24/144)、13.9％(20/144)和13.2％(19/144);其中9株(6.3％)属于ST131型,包括8株O25b-B2-ST131和1株O16-B2-ST131;9例ST131患者中,医院感染患者有7例,占77.8％.ST131感染者的人口特征和临床特征与非ST131感染者相似.ST131型菌株对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、厄他培南、阿米卡星耐药率较低,但对头孢唑林、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素以及复方新诺明耐药率>50％,ESBLs阳性率达77.8％,多重耐药率高达88.9％,并高于非ST131型菌株,但差异并无统计学意义.结论 本地区血液分离大肠埃希菌中,B2群和F群为常见系统分群,ST131型菌株检出率较低,国内首次在血流感染中分离出O16-ST131菌株,ST131感染者的临床特征与非ST131感染者相似,ST131型菌株多重耐药率及ESBLs阳性率高,应引起重视.
