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重症监护病房环境与临床分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的REP-PCR分型研究
目的 调查上海市重症监护病房(ICU)环境中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的流行型别,并分析ICU的环境分离株与临床分离株的同源性.方法 对上海市21所医院ICU环境分离到的61株CRAB及其中一所医院(S医院)ICU临床分离到的14株CRAB,采用DiversiLab自动化重复序列(REP) -PCR分型系统,进行基因分型.结果 61株ICU环境分离的CRAB共分7型,其中G1型又分3个亚型,共46株细菌,占全部细菌的75.4％,分布于上海市的13所医院；G2、G3、G4、G5、G6和G7型分别为8株(13.1％)、2株(3.3％)、1株(1.6％)、1株(1.6％)、2株(3.3％)和1株(1.6％).在检出CRAB的13所医院中,除了D医院外,其他医院均分离到G1型CRAB.上海市S医院ICU共检出25株CRAB(14株临床株和11株环境株),分4型:其中G1型17株,为主要流行型别.由临床株和环境株的分布示意图显示:在外科ICU(SICU)中,环境株和临床株均以G1型为主,多个邻近床位病人检出G1型CRAB；心外科ICU(CICU)环境株以G1型为主,临床株以G2型为多,其中19床的病人及周围环境均检出G1型CRAB.结论 上海市ICU环境中普遍存在G1型CRAB流行株,各医院ICU环境中存在流行株交叉污染的现象,ICU临床分离的CRAB与环境分离株有较高的相关性.应加强ICU环境消毒和手卫生,防止医院感染的暴发和流行.
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REP-PCR技术在光滑假丝酵母菌基因分型中的应用价值
目的 评估重复序列PCR (REP-PCR)技术在光滑假丝酵母菌基因分型中的作用.方法 收集深部真菌感染患者体内分离的光滑假丝酵母菌34株,以API 20C AUX酵母菌鉴定板条鉴定菌种及生化表型.采用REP-PCR对34株光滑假丝酵母菌进行基因分型:提取真菌基因组DNA,以Care-2重复元件设计引物,PCR扩增产物电泳后运用NTSYS软件进行聚类分析,聚类树状图相似系数(SI)≥97％且无明显条带差异定为同一基因型,SI≥97％且仅相差一条条带定为亚型.比较REP-PCR分型与多位点序列分型(MLST)的辨别力指数(DP),分析具有不同生化表型光滑假丝酵母菌的REP-PCR基因分型情况.结果 REP-PCR基因分型结果显示:34株光滑假丝酵母菌分为17个基因型,其中A型8株,B型6株,C、D型各3株,E型2株,F～Q型各1株,未发现亚型.REP-PCR和MLST基因分型的DP (95％ CI)分别为0.911(0.770～0.980)和0.369(0.220～0.560),两者比较差异有统计学意义(x2 =21.68,P＜0.01).34株光滑假丝酵母菌有两种生化表型,生化表型代码分别为2000040(32株)和6000040(2株),生化表型代码为60000402的2株经REP-PCR分型结果分别为D型和K型(SI =0.43).结论 REP-PCR对光滑假丝酵母菌基因分型的辨别力较强且操作简便,适用于临床实验室对光滑假丝酵母菌的流行病学研究.
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对同一地区分离的单增李斯特菌进行DiversiLab分型及同源性分析
目的 对同一地区食品污染中分离出的单增李斯特菌进行DiversiLab分型,研究其同源性关系,为保障食品安全和进行食源性疾病溯源提供科学依据.方法 应用DiversiLab分型系统对2005年-2007年从哈尔滨地区食品样品中分离出的21株单增李斯特菌进行分型,其中分型流程包括DNA提取、rep-PCR、微电泳芯片分离检测和数据分析.结果 经DiversiLab分析软件聚类分析,相似度为97％时,21株菌被分成了11组,这11组中的菌株在遗传水平不可区分;相似度为95％时,21株菌被分成了9组,这9组中的菌株在遗传水平具有相关性.结论 DiversiLab分型结果较准确地揭示了21株菌株间的遗传特征和亲缘性关系;自动化的DiversiLab分型是一种分辨率高、重复性好、操作简单的基因分型方法,可以作为食源性疾病同源性分析的分型工具.
关键词： DiversiLab分型系统 单增李斯特菌 重复序列PCR 同源性分析 -
产青霉素酶淋病奈瑟菌重复序列PCR分型研究
目的 研究某地区产青霉素酶淋病奈瑟菌(penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae,PPNG)的基因型特征.方法 利用重复序列引物建立重复序列聚合酶链反应(PCR)分型方法,并用此方法对12株PPNG进行基因分型.结果 重复序列PCR是一种简便、快速、可靠和分辨率高的基因分型方法,12株PPNG共分为6种基因型,其中A型6株(占50%),F型2株,B、C、D、E型各1株.结论 该地区PPNG主要流行株基因型为A型.通过重复序列PCR分型研究,可了解PPNG的基因型流行特征,为调查和控制其传播途径及传染源提供分子流行病学依据.
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武汉社区腹泻病人粪便中致病菌的构成与耐药性研究
目的 了解夏秋季武汉社区引起腹泻病原菌的流行性及耐药状况.方法 收集2004年7月1日至10月31日武汉社区4所大型医院4 536份门诊腹泻病人粪便标本进行鉴定及药敏试验;REP-PCR对主要致病菌进行基因分型.结果 4 536份粪便标本中,分离出非伤寒沙门菌64株(1.4%),志贺菌29株(0.6%),致病性大肠杆菌33株(0.7%).其中主要致病菌是鼠伤寒沙门菌33株(52%),D群志贺菌16株(55%).挑选13种抗菌药物进行体外敏感试验,并将分离的致病菌对这13种抗生素的耐药率、敏感率、中介率进行比较,其中非伤寒沙门菌对喹诺酮类的耐药率较其他两种要高,但对第三代头孢的敏感性较强.分离的3种致病菌在第三代头孢抗生素的作用中对头孢他啶的敏感性强.32株鼠伤寒沙门菌基因分型为9种,16株D群志贺菌基因分型为7种.结论 武汉社区内感染性腹泻的致病菌主要以非伤寒沙门菌、致病性大肠杆菌和志贺菌为主,其中非伤寒沙门菌占了51%,基因分型提示有社区流行趋势,而且这些致病菌对肠道杆菌常用抗生素的耐药性较为严重.本次调查结果对该社区临床用药起到一定的提示作用.
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烧伤病房鲍氏不动杆菌耐药性趋势和同源性分析
目的 监测烧伤病房鲍氏不动杆菌耐药性趋势和同源性情况.方法收集2008年11月-2009年2月、2010年6-9月笔者单位住院烧伤患者创面、血液和静脉导管分离的鲍氏不动杆菌26株,采用K-B纸片扩散法检测该菌对阿米卡星、庆大霉素等13种临床常用抗生素的耐药性,用重复序列PCR法检测基因分型.对细菌耐药率数据进行x2检验.结果 (1)26株鲍氏不动杆菌中多药耐药菌株16株、泛耐药菌株9株,菌株对庆大霉素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星、亚胺培南和美罗培南的耐药率均高达90.00%以上;对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低,为42.31%(11/26).26株鲍氏不动杆菌对13种抗生素的耐药率比较,差异有统计学意义(42.31%～100.00%,x2=97.371,P＜0.05).(2)26株鲍氏不动杆菌共分为7个基因型:A型17株,B型3株,C型2株,D、E、F、G型各1株.17株A型菌株中,2008、2009年各1株,2010年15株;创面来源11株、血液和静脉导管来源共6株.结论笔者单位烧伤病房近年来存在鲍氏不动杆菌同一克隆株A型的流行,对临床常用抗生素呈多药耐药或泛耐药趋势.目前头孢哌酮/舒巴坦是治疗烧伤患者鲍氏不动杆菌感染的首选药物.
