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耐核糖核酸酶内含HCV RNA病毒样颗粒的表达
目的构建可以表达耐核糖核酸酶(RNase)的内含HCV RNA病毒样颗粒的载体质粒. 方法将表达载体pI NCCL用HindⅢ酶切后,与用相同内切酶酶切的HCV RNA非编码区(5′-UTR)扩增产物,在T4 DNA连接酶的存在下连接,构建一新的表达载体pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR,再转化BL21-DE3 E.coli进行原核表达. 结果成功构建得到了新的表达载体pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR,经原核表达为耐RNase的内含HCV RNA病毒样颗粒. 结论得到的pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR表达载体及原核表达系统,可作为一个耐RNase的HCV RNA标准品和质控品的构建和制备表达载体平台.
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不同混合方式检测丙型肝炎病毒核酸的研究
目的研究不同混合方式检测丙型肝炎病毒核酸含量(HCV cDNA)的方法.方法以未混合标本为对照,使用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术研究提取阶段混合,反转录阶段混合以及提取和反转录阶段均混合等不同实验条件下的HCV cDNA含量.结果提取阶段混合组的HCV cDNA含量与对照组相比未见显著性差异(P＞0.05);反转录阶段混合组以及提取和反转录阶段均混合组的HCVcDNA含量低于对照组(P＜0.05),且在低浓度时出现假阴性结果.阴性标本在提取阶段混合未见假阳性.结论在对混合血清进行HCV cDNA测定时,应将混合安排在提取阶段,不宜为增大混合标本数而在提取和反转录阶段均混合.
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献血感染丙型肝炎人群转归分析
目的 研究献血感染丙型肝炎病毒(HCV)人群16年后的转归.方法 对该人群问卷收集一般情况,肝脏B超检查;采集5 ml静脉血,进行丙型肝炎病毒抗体、RNA、谷丙转氨酶(ALT)和血清生化指标(透明质酸、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原)检测.结果 162名研究对象尚未出现晚期肝病患者.抗-HCV阳性率95.68%,RNA阳性率77.78%,ALT异常率20.37%.不同急性期症状感染者,16年后抗-HCV阳性率、ALT异常率和RNA阳性率差异无统计学意义.经性别分层分析,女性感染年龄＞40岁抗体较易阴转(x2MH=8.26,P=0.04).结论 HCV感染16年后,不同急性期症状感染者转归无差异,病毒清除与性别和初始感染年龄有关.
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多指标联合检测在丙型肝炎诊断中的应用
本研究拟探讨在丙型肝炎诊断中丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)联合丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)、HCV核心抗原(HCV-cAg)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测的临床应用价值.
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丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸含量与丙型肝炎病毒抗体和丙氨酸氨基转移酶的相关性
[目的]探讨丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量与丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)间的相关性.[方法]采用实时荧光定量PCR检测302例丙型肝炎患者血清中HCV RNA含量,同时采用ELISA法检测抗-HCV水平,利用全自动生物化学检测仪测定ALT水平.[结果]302例丙型肝炎患者血清标本中,抗-HCV均呈阳性,其中199份标本HCV RNA含量高于检测上限(103 U/mL),2种检测方法的符合率为65.9％.ALT异常率随HCV RNA含量的增高而升高,两者呈显著正相关(r=0.155,P＜0.05);而ALT水平变化与HCV RNA含量无相关性(r =0.001,P＞0.05).[结论]HCV RNA含量与抗-HCV水平是诊断HCV感染的重要指标,HCV RNA含量结合ALT水平测定可帮助临床了解HCV在体内复制的状况及肝脏损伤情况.
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荧光定量PCR联合ELISA检测丙型肝炎病毒的临床应用研究
目的:探讨荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)联合检测丙型肝炎病毒的临床意义.方法:用FQ-PCR联合ELISA方法检测117例临床已确诊为丙型肝炎患者的血清,同时检测它们的丙氨酸氨基转移酶(AAT).结果:①抗-HCV阳性率随着HCV-RNA含量的升高而增高,其阳性率与HCV-RNA含量呈正相关.②87例HCV-RNA阳性标本中,有50例ALT异常,其异常率随着HCV-RNA含量的升高而增高,ALT异常率与HCV-RNA含量呈正相关, ALT水平和HCV-RNA含量之间呈正相关.③FQ-PCR检测敏感性为74.4%(87/117),漏检率为25.6%(30/117).ELISA法检测敏感性为76.9%(90/117),漏检率为23.1%(27/117).两种方法联合检测敏感性为92.3%(108/117),漏检率为7.7%(9/117).结论:两种方法联合检测,互相补充,大大提高了丙型肝炎病毒的检出率,为临床早期,准确诊断丙型病毒肝炎、监测病情、观察疗效提供了有力的依据,为献血人员筛选和血制品安全提供了有力保障.
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抗-HCV阳性献血者血清HCV RNA水平与ALT活性的关系
目的分析抗-HCV阳性献血者血清HCV RNA含量与ALT活性的关系.方法采用ELISA法检测抗-HCV,阳性标本用荧光PCR试剂盒测定HCV RNA,分析标本ALT活性与HCV RNA水平的关系.结果 60份抗-HCV阳性标本经PCR检测后有27份标本含有HCV RNA,HCV RNA拷贝量与ALT活性呈正相关,且标本的HCV RNA含量越多,ALT活性也越高(P<0.01).结论献血者中筛查ALT并结合PCR技术,能减少HCV经血传播的危险.
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聚合酶链反应技术在定量检测丙型肝炎病毒核酸中的应用
目的:研究丙型肝炎患者血清中的丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性.方法:应用聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测231份HCV-RNA临床标本,同时采用ELISA法检测抗-HCV,用生化分析仪测定ALT水平.结果:231份样本中有136份HCV-RNA含量高于80拷贝/ml血清,阳性率为58.9%(136/231);139份样本抗-HCV阳性,阳性率为60.2%(139/231);100份样本ALT异常,异常率为43.3%(100/231).结论:应用FQ-PCR方法检测HCV-RNA特异性强、灵敏度高,具有良好的临床应用价值.
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抗-HCV联合HCV-RNA检测在丙型肝炎患者中的应用价值
目的 探讨抗-HCV阴性和抗-HCV阳性与丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量关系及其在丙型肝炎检测中的应用价值.方法 抽取320例患者血液,分离血清标本,采用酶联免疫法检测抗-HCV,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR-荧光法)检测HCV-RNA,对两者检测结果进行比较.结果 抗-HCV总检出率为84.2％(269/320),HCV-RNA总检出率为88.2％ (282/320),差异有统计学意义(P=0.00),抗-HCV和HCV-RNA联合检测的准确率为98.8％ (316/320).结论 抗-HCV联合HCV-RNA检测能更准确、更早期地诊断HCV的感染者.
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慢性丙型肝炎患者HCV-RNA载量与ALT、AST、AST/ALT的相关性研究
目的 探讨慢性丙型肝炎患者HCV-RNA载量与ALT、AST、AST/ALT比值的相关性.方法 选取慢性丙型肝炎患者144例,运用实时荧光定量PCR技术检测患者血浆HCV-RNA载量,速率法检测血清中ALT、AST活性.结果 随着HCV-RNA载量的升高,ALT、AST、AST/ALT比值增高,经相关性分析,HCV-RNA载量与ALT、AST、AST/ALT之间存在正相关性,相关系数分别为0.49、0.75、0.57,均P＜0.05.结论 慢性丙型肝炎患者的HCV-RNA载量与ALT、AST、AST/ALT之间存在正相关性,通过HCV-RNA载量结合AST、ALT、AST/ALT比值,可以提高检测的灵敏度.
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丙型肝炎病毒的检测方法相关性分析及临床应用
目的研究丙型肝炎病毒核酸HCVRNA载量与抗-HCV以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性与符合性.方法用FQ-PCR法检测82份抗-HCV阳性的血清,同时用不同生产厂家的试剂检测抗-HCV及ALT含量.结果 82份抗-HCV阳性的血清中HCV RNA的阳性率为62.19%;51份HCV RNA阳性的血清中ALT异常率为54.90%,且ALT异常率随HCV RNA载量升高而升高,两者呈正相关性(r=0.916,P＜0.001).结论 HCVRNA、抗-HCV和ALT三者联合检测,对HCV感染者的筛选、药物治疗的评价有较高的临床应用价值.
关键词： 肝炎 丙型 丙型肝炎病毒核酸 丙型肝炎抗体 荧光定量聚合酶链反应 -
出入境人员HCV基因型与血清HCV载量及ALT相关性研究
目的 探讨出入境人群HCV的基因分型,并分析HCV不同基因型与病毒载量、ALT活性水平的相互关系.方法 对72 542名出入境人员进行HCV抗体检测,对抗-HCV阳性标本进行HCV基因分型,以荧光定量PCR测定HCV RNA载量,同时检测ALT活性.结果 共发现197份标本呈抗-HCV阳性,阳性率为0.27%,其中出境人员阳性率为0.24%,入境人员阳性率为0.31%.抗-HCV阳性标本经PCR检测基因分型后发现110份标本含有HCVRNA,共发现5种基因型,其中1b占40.0%、6a占30.0%、2a占14.5%、1a占8.2%、2b占7.3%.中国大陆人群与中国香港及其他国家人群的各基因型分布无明显差异.各基因型群间与HCV RNA载量差异具有统计学意义(P＜0.05),2a型人群HCV RNA载量明显高于其他各型人群(P＜0.05).不同基因型人群间ALT水平差异无统计学意义.HCVRNA拷贝量与ALT活性无相关性.结论 HCV-1b为优势基因型.对HCV基因分型以及PCR病毒载量和ALT活性检测,实行HCV实时监测具有重要的意义.
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献血者血清抗-HCV阳性与ALT活性的关系
目的分析献血者血清抗-HCV抗体及丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量与ALT的关系. 方法采用ELISA法检测抗-HCV抗体,阳性标本用荧光PCR试剂盒测定HCV RNA,分析ALT活性与HCV RNA水平的关系.结果 83份抗-HCV抗体阳性标本经PCR检测后有37份标本含HCV RNA,HCV RNA拷贝量与ALT活性呈正相关,且标本的HCV RNA含量越多,ALT活性也越高(P＜0.01).结论献血者中筛查ALT并结合PCR技术,能减少HCV经血传播的危险.
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慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA水平与AST/ALT比例的关系
目的 分析抗-HCV阳性患者血清水平HCV RNA与AST/ALT活性的关系;评价AST/ALT比值,HCV RNA水平在判断丙肝患者预后方而的价值.方法 采用ELISA法检测抗-HCV,阳性标本分别用荧光PCR试剂盒测定HCV RNA;全自动生化分析仪检测AST/ALT.结果 78份抗-HCV阳性标本经PCR检测后有31份标本含有HCV RNA,HCV RNA拷贝量与AST/ALT比例呈正相关.结论 动态监测AST/ALT比例和HCV RNA的水平,可用于丙型肝炎的预后估计.
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丙型肝炎病毒抗体联合核酸定量检测对丙型肝炎患者的早期诊断价值研究
目的：探讨在丙型肝炎患者早期诊断中丙型肝炎病毒抗体联合丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）检测的临床价值。方法对116例鼓楼医院住院及门诊丙型肝炎患者采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定HCV RNA、酶联免疫吸附试验（ELISA）和金标法测 HCV抗体、速率法测丙氨酸氨基转移酶（ALT ）。结果116例丙型肝炎患者中，ELISA HCV抗体阳性97例（占83．6％），HCV RNA阳性85例（占73．3％），HCV 金标阳性77例（占66．4％），ALT阳性69例（占59．5％），HCV抗体和 HCV RNA联合检测总阳性率（指任一指标阳性即为阳性）为100．0％。结论 HCV抗体和HCV RNA联合检测扩大了丙型肝炎检测范围，降低了丙型肝炎的漏诊率，有利于丙型肝炎的早期诊断。
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丙型肝炎病毒总抗原检测用于病程监测的研究
目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)总抗原检测方法在丙肝病程监测方面的临床意义.方法 对来本院就诊的40位丙肝患者于治疗前、治疗1个月时、治疗3个月时、治疗6个月(停药)时,停药6个月后等不同时期进行采血,收集血清或血浆标本,用抗-HCV检测试剂盒(酶联免疫法)、HCV核酸(RNA)扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒、HCV总抗原检测试剂盒(酶联免疫法)进行检测.结果 从患者确认感染丙肝到治疗结束抗-HCV检测均呈阳性,而HCV-RNA检测和HCV总抗原检测会随着病程的变化而变化.本次共检测了189例标本(40位患者不同时期标本总例数),其中HCV-RNA阳性51例,该51例阳性标本中,HCV总抗原检测阳性44例,阳性检出率为86.27％;138例HCV-RNA阴性标本,有3例HCV总抗原检测为阳性(2.2％).2种方法比较,差异无统计学意义(x2=1.6,P＞0.05).HCV总抗原检测其OD值会随着病程的变化而相应改变,可以较好地反应丙肝患者的病程状况.结论 HCV总抗原检测方法在丙肝病程监测方面具有很好的临床意义,适合在缺少荧光定量PCR检测能力的中小医院使用,可在一定程度上替代HCV-RNA检测,对抗-HCV阳性患者作进一步的验证检测或补充,更好地应用于丙肝患者的病程监测.
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新型TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测HCV-RNA方法学的建立
目的 建立一种快速、准确定量HCV-RNA的实时荧光定量PCR检测方法.方法 Clustal X软件对HCV核酸序列进行比对分析,在HCV-RNA的保守区域5'UTR设计引物和探针,棋盘滴定法对实时荧光定量PCR体系进行性能优化,制作假病毒颗粒作为定量标准品对新建方法进行性能评价,并与临床常用HCV-RNA定量检测试剂盒进行比对分析,探讨其应用价值.结果 建立HCV核酸定量高灵敏度方法,该方法可以检测1a,1b,2a,3a,3b,6a,6b等多个HCV基因型,检测HCV-RNA的灵敏度为50 IU/ml,精密度CV＜5％,检测结果可溯源至卫生部临床检验中心丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)血清标准物质GBW09151a.新建方法与凯杰HCV-RNA荧光定量检测试剂盒同时检测40例临床样本,阳性一致率为100％,阴性一致率为56％;自建方法检测阳性的14个样本中,凯杰试剂0个阳性,表明自建方法的检测灵敏度要高于凯杰试剂.结论 建立的HCV核酸定量新方法灵敏度高、特异性好、精密度高,可应用于临床.
