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IRF5基因多态性与山东汉族人群系统性红斑狼疮的相关性研究
目的 研究山东地区汉族人群干扰素调节因子5(IRF5)基因rs2004640、rs10954213单核苷酸多态性,探讨其与系统性红斑狼疮(SLE)易感性之间的关系.方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性等方法对92例SLE患者和88名健康对照IRF5基因rs2004640 G/T、rs10954213 G/A多态性进行分析,计算基因型和等位基因频率.结果 SLE患者IRF5 rs2004640GG、GT、TT基因型频率分别是0.198、0.521和0.281,与对照组比较差异有统计学意义(X2=8.73,P<0.05);SLE患者IRF5 rs10954213 GG、GA、从基因型频率分别是0.318、0.409和0.273,与对照组间差异有统计学意义(X2=6.36,P<0.05).结论 山东汉族人群IRF5基因位点rs2004640、rs10954213的多态性,可能与山东地区汉族人群SLE的易感性有关,需进一步累积更多数据证实.
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干扰素调节因子5通过调节M1型巨噬细胞极化促进小鼠心肌梗死后心脏重构
目的:探讨干扰素调节因子5(IRF5)在心肌梗死后心脏重构中的作用及机制.方法:取30只,雄性,C57BL/6J小鼠随机分为假手术组和心肌梗死手术组各15只;通过结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,术后第7天检测小鼠心功能,收取心脏组织,通过Masson染色检测心脏纤维化;利用流式细胞术、免疫组化染色以及实时定量-聚合酶链式反应检测巨噬细胞分化、炎症因子及IRF5的表达;体外培养骨髓来源的巨噬细胞,给予缺氧/复氧刺激后,采用实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞标记物(iNOS、IL-1β、IL-6)以及IRF5的mRNA表达水平.结果:假手术组小鼠存活率100％(15/15),心肌梗死组术后7d存活率为66.7％(10/15).与假手术组相比,心肌梗死组小鼠LVEF[(72.72±3.55) ％vs.(29.77 ±6.63)％,P=0.0001]和缩短分数[(42.53 ±2.64) ％vs.(14.63±5.44)％,P=0.0001]均显著降低,心功能明显恶化,纤维化水平明显加重[(0.90±0.29) ％vs.(24.54±5.43)％,P=0.0001],巨噬细胞浸润增加[(2.25±1.89)％vs.(96.5±7.90)％,P=0.0001],M1型巨噬细胞标志物表达均明显增加iNOS [(1.01 ±0.20)vs.(2.00±0.26),P=0.0066],IL-1β[(1.07 ±0.54)vs.(10.74 ±3.87),P=0.0085],IL-6[(1.01 ±0.14) vs.(21.42±8.58),P=0.0101],并且IRF5表达明显增加[(1.01±1.89)vs.(12.91 ±1.34),P=0.0001].体外实验中,通过缺氧/复氧刺激培养的骨髓来源巨噬细胞,与对照组相比,刺激组M1型巨噬细胞标记物表达均明显增加,iNOS[(0.87±0.07)vs.(1.07±0.09),P=0.0403],IL-1β[(1.00±0.09)vs.(1.60±0.26),P=0.0199,IL-6[(0.88 ±0.07)vs.(1.07±0.09),P=0.0403],IRF5表达增加[(0.97 ±0.04)vs.(1.28±0.13),P=0.0191].利用siIRF5转染巨噬细胞,再次给予缺氧/复氧刺激后,M1型巨噬细胞标记物表达降低iNOS [(1.09±0.44)vs.(0.07±0.07),P=0.0165],IL-1β [(1.08±0.42)vs.(0.09 ±0.08),P=0.0157],IL-6 [(1.09±0.43)vs.(0.07±0.06),P=0.0152].结论:IRF5可能通过调节巨噬细胞向M1型极化,促进小鼠心肌梗死后心脏重构.
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IRF5、TLR-9基因多态性与山东汉族人群系统性红斑狼疮的相关性研究
目的 研究山东地区汉族人群干扰素调节因子5(IRF5)基因rs2004640、rs10954213及Toll样受体-9(TLR-9)基因rs187084、rs352139的单核苷酸多态性,探讨其与系统性红斑狼疮(SLE)易感性之间的关系.方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性等方法对92例SLE患者和88名健康对照IRF5基因rs2004640 G/T、rs10954213 G/A及TLR-9基因rs187084C/T、rs352139A/G的多态性进行分析,计算基因型和等位基因频率.结果 (1)SLE患者IRF5 rs2004640GG、GT、Tr基因型频率分别是0.198、0.521和0.281,与对照组比较差异有统计学意义(X~2=8.73,P<0.05);SLE患者IRF5 rs109542130GG、GA、从基因型频率分别是0.318、0.409和0.273,与对照组间比较差异有统计学意义(X~2=6.36,P<0.05).(2)SLE患者TLR-9 rs187084CC、CT、Tr基因型频率分别是0.185、0.413和0.402,与对照组比较差异无统计学意义(X~2=2.99,P>0.05);SLE患者TLR-9基因rs352139AA、AG、GG基因型频率分别是0.228、0.533和0.239,与对照组比较差异无统计学差异(X~2=4.54,P>0.05).结论 山东汉族人群IRF5基因位点rs2004640、rs10954213的多态性,可能与山东地区汉族人群SLE的易感性有关,而TLR-9基因rs187084、rs352139多态性与山东汉族人群SLE的易感性与无关.
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三氧化二砷对系统性红斑狼疮患者Toll样受体9及干扰素调节因子5 mRNA表达的影响
目的 了解三氧化二砷(AS2O3)对SLE患者PBMCs Toll样受体9(TLR9)及干扰素调节因子5(IRF5) mRNA表达的影响.方法 分离15例SLE患者和15名健康人外周血PBMCs,分别与不同浓度AS2O3及环磷酰胺进行体外培养12h和24h,采用实时荧光定量PCR检测TLR9和IRF5 mRNA表达.采用t检验或方差分析进行组间差异比较.结果 与健康对照组[12 h(1.05±0.35)、24 h(0.97±0.19)]相比,SLE组体外培养[12 h(1.38±0.26)和24 h(1.28±0.35)]后TLR9 mRNA的相对表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=2.37,P=0.03;t=2.44,P=0.02);与对照组[12 h(0.62±0.23)、24h(0.60±0.39)]相比,SLE组体外培养[12 h(0.95±0.27)和24 h(0.91±0.35)]后IRF5 mRNA的相对表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=3.07,P=0.01;t=3.45,P＜0.01).AS2O3可以下调SLE患者PBMCs中TLR9 mRNA表达,其效应随药物浓度和作用时间的增加而增加[0.2 mg/L AS2O3组12 h (0.430±0.110)和24h(0.290±0.050),0.4 mg/LAS2O3组12 h (0.170±0.038)和24 h(0.090±0.017),0.8 mg/L AS2O3组12 h (0.023±0.011)和24 h(0.003±0.001)],与环磷酰胺[12 h(0.814±0.081)和24 h(0.755±0.139)]相比较,AS2O3对SLE患者的作用更明显,差异有统计学意义(F=165.32,P＜0.01;F=99.20,P＜0.01);环磷酰胺与AS2O3均对PBMCs中IRF5 mRNA表达无影响,各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLE患者外周血PBMCs的TLR9和IRF5mRNA表达异常,AS2O3可明显抑制SLE患者TLR9 mRNA表达,可能是其治疗SLE的机制之一.
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IRF5 rs10954213基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究
目的 研究山东地区汉族人群干扰素调节因子5(IRF5)基因rs10954213单核苷酸多态性,探讨其与系统性红斑狼疮易感性之间的关系.方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性等方法对92 例系统性红斑狼疮患者和88名健康对照IRF5基因rs10954213 G/A多态性进行分析,计算基因型和等位基因频率.结果 SLE患者IRF5 rs10954213 GG、GA、AA基因型频率分别是0.318、0.409和0.273,与对照组间有显著差异(χ2=6.36,P<0.05);SLE患者IRF5 rs10954213 A、G等位基因的频率分别为0.609、0.391,与对照组有显著差异 (χ2=6.26,P<0.05).结论 山东汉族人群IRF5基因位点rs10954213的多态性,可能与山东地区汉族人群SLE的易感性有关.
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变应性鼻炎与IRF5的单核苷酸多态性关系
目的:探讨变应性鼻炎与干扰素调节因子5(IRFS)的单核苷酸多态性(SNP)的相关性.方法:采用聚合酶链(PCR)和限制性片段长度多态性(RFL P)方法在新加坡华人中检测110例变应性鼻炎患者及101健康对照组IRF5位点上的3个单核苷酸多态性(rs4728142,rs11770589,rs2280714)计算基因型和等位基因频率.结果:IRF5基因的3个位点的基因型和等位基因频率在变应性鼻组和对照组间差异无统计学意义.结论:新加坡华人IRF5 rs4728142,rsl1770589,rs2280714多态性与变应性鼻炎无明显相关性.
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IRF5调控AChR特异性T细胞参与EAMG疾病发生、发展的实验研究
目的:体内外实验探讨干扰素调节因子5 (Interferon regulatory factor 5,IRF5)在乙酰胆碱受体(Acetylcholine Receptor,AChR)特异性T、B细胞中的表达情况以及与实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis,EAMG)疾病的发生存在的可能关系.方法:ELI SA法检测不同发病时相大鼠血清中1RF5的含量;流式细胞仪法检测早期晚期发病时相CD4+T细胞以及CD45R+B细胞中IRF5的表达情况;QPCR法及Western blotting法分别检测体外AChR刺激不同时间点的T、B细胞中IRF5的mRNA和蛋白水平的表达差异.结果:血清学检测结果显示,IRF5高表达于EAMG大鼠的晚期发病时相的血清中,并随着疾病进程的不断加重呈现逐渐增高的表达,与CFA对照组大鼠相比较差异显著,有统计学意义(***,P＜0.001);流式结果表明,来自EAMG大鼠早、晚期发病时相的无论是淋巴结还是脾脏中的AChR特异性T细胞均高表达IRF5,且与CFA对照组相比较,有统计学差异,而B细胞中IRF5的表达即便是在晚期发病时相也与CFA对照组无明显区别;QPCR结果发现,EAMG晚期发病时相的AChR特异性T细胞在经过AChR体外刺激0h,72 h后,均可见IRF5 mRNA水平的高表达,而B细胞中IRF5的mRNA水平则在两组中无统计学差异;Western blotting结果进一步证实,IRF5蛋白水平在AChR特异性T细胞中呈现高表达.结论:IRF5是通过对AChR特异性T淋巴细胞的调控进而参与EAMG疾病的发生和发展过程的.
关键词： 重症肌无力 干扰素调节因子5 实验性自身免疫性重症肌无力 乙酰胆碱受体 -
干扰素调节因子5、维生素D受体、β防御素1和Toll样受体4的基因多态性与汉族人群克罗恩病的相关性
目的 探讨干扰素调节因子5(IRF5)、维生素D受体(VDR)、β防御素1和 TLR4的基因多态性与汉族人群CD易感性的关系.方法 收集2007年1月至2011年5月就诊的158例CD患者与246名健康体格检查者的资料与血清标本.采用高通量质谱分析方法对 IRF5、VDR、β防御素1和TLR4这4个基因的14个标签单核苷酸多态性(SNP)的基因型进行检测.CD组与健康对照组率的比较采用卡方检验.应用多因子降维法(MDR)对上述候选基因之间的联合作用与CD易感性的关系进行分析.结果 基于等位基因或基因型的关联分析均未发现 IRF5、VDR、β防御素1和 TLR4这4个候选基因与CD易感性相关(P均> 0 .05).基于单体型的关联分析显示 ,IRF5基因单体型区域中的GTACC单体型在CD组与健康对照组中出现的频率分别为0 .046和0 .089 ,差异有统计学意义(χ2 =5 .223 ,P=0 .022 3).基因型与临床表型的分析结果显示 ,CD患者β防御素1基因rs2978880的基因型分别为C/C ,C/T , T/T ,有手术史的分布频率分别为0 .235、0 .603、0 .162 ,无手术史的分别为0 .482、0 .388、0 .129 ,其中C/C等位基因型患者的肠道手术风险相对较低(χ2 =10 .065 ,P=0 .006).MDR分析未发现上述基因位点与CD易感性之间存在交互作用(P均>0 .05).结论 IRF5的GTACC单体型与汉族CD人群的易感性相关 ,β防御素1基因rs2978880位点C/C纯合基因型与汉族CD人群的临床表型相关.
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SLE患者干扰素调节因子5和Toll样受体9 mRNA的表达
RNA的表达分别是0.232±0.076、0.189±0.054,正常人对照组两基因mRNA的表达分别是0.081±0.040、0.066±0.023;两组比较,SLE组IRF5、TLR-9 mRNA表达水平升高(P均<0.05).SLE患者抗ds-DNA抗体阳性组IRF5、TLR-9基因表达水平有增高的趋势,但与阴性组相比差异无统计学意义.结论 SLE患者外周血IRF5、TLR-9表达异常,可能在发病中起一定作用.
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丁酸钠对IRF5基因表达的影响
目的 探讨不同浓度丁酸钠(NaB)对干扰素调节因子5(IRF5)基因表达的影响.方法 体外培养人肺腺癌细胞A549和人胚肾细胞HEK293,分别用去离子水(对照组)和浓度为1.0、2.5和5.0 mmol/L的NaB处理细胞(实验组),采用双荧光素酶报告基因技术检测IRF5基因启动子活性,采用RT-qPCR及Western blot法检测IRF5基因mRNA及蛋白表达水平.结果 与对照组相比,实验组NaB可降低A549细胞及HEK293细胞中IRF5基因启动子活性、抑制A549细胞中IRF5基因mRNA及蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01).随着NaB处理浓度的增加,IRF5基因启动子活性、mRNA及蛋白表达均呈下降趋势.结论 NaB对体外IRF5基因表达具有抑制作用.
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干扰素调节因子5 rs4728142基因多态性与变应性鼻炎相关性研究
目的 研究上海汉族人群干扰素调节因子5(IRF5)rs4728142的单核苷酸多态性(SNP),探讨其与变应性鼻炎(AR)的相关性.方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测100例AR患者及80例健康对照组的IRF5上的rs4728142位点,计算并比较两组人群基因型和等位基因频率.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 IRF5基因的rs4728142位点的基因型在AR组和健康对照组间差异均无统计学意义(x2=0.16,P＞0.05);等位基因频率在AR组和健康对照组间差异均无统计学意义(X2=0.16,P＞0.05).结论 上海汉族人群IRF5基因rs4728142多态性与AR无明显相关性.
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干扰素调节因子5下调PARP-1抑制鼻咽癌细胞的侵袭力
[目的]探讨干扰素调节因子5(IFR5)是否通过下调DNA修复酶PARP-1,进而抑制鼻咽癌细胞的侵袭能力.[方法]本研究使用的临床标本是经病理确诊的鼻咽癌患者组织标本46例和正常组织51例.免疫组化检测鼻咽癌组织和正常组织中IRF5和PARP-1的表达.构建IFR5过表达质粒,上调鼻咽癌细胞CNE-2中IFR5表达,荧光定量PCR(QPCR)和免疫印迹确定建立IRF5过表达细胞.上调IRF5表达后,划痕和transwell实验检测细胞侵袭能力的改变,QPCR和免疫印迹检测PARP-1表达量的变化.上调IFR5表达的同时加入PARP-1过表达质粒,观察PARP-1是否可逆转IFR5对侵袭能力的影响.[结果]免疫组化结果表明IRF5在癌组织中的表达量低于正常组织,而PARP-1则相反.QPCR和免疫印迹确定建立IRF5 mRNA和蛋白过表达的细胞株CNE-2/IFR5.细胞划痕实验显示CNE-2/IFR5愈合率较对照组降低(P<0.01),transwell实验表明CNE-2/IFR5细胞穿过基底膜的数目小于对照组(P<0.01),提示上调IFR5可抑制鼻咽癌细胞的侵袭能力.上调IFR5后,PARP-1 mRNA和蛋白的表达量降低(P<0.01);上调IFR5表达的同时过表达PARP-1,可逆转单独上调IRF5对细胞侵袭能力的改变.提示IFR5可通过下调PARP-1进而抑制鼻咽癌癌细胞的侵袭能力.[结论]IFR5可通过下调PARP-1进而抑制鼻咽癌癌细胞的侵袭能力.本研究可能为降低鼻咽癌侵袭能力提供新的靶点.
