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慢性阻塞性肺疾病患者 Th17／Treg 细胞失衡与肺功能相关性研究
目的研究慢性阻塞性肺疾病（ COPD）患者Th17细胞和Treg细胞介导的免疫应答变化及免疫失衡与肺功能下降程度的可能内在联系。方法选择2009年1月-2012年12月在本院门诊及住院治疗的COPD中重度、极重度患者和肺功能正常的吸烟者及不吸烟的正常对照者作为研究对象，分别测定肺功能，并采集外周血和诱导痰。采用流式细胞仪技术测定外周血中Th17细胞和Treg细胞比例，ELISA方法测定血清及诱导痰上清液相关细胞因子，荧光定量 PCR方法测定相应的转录因子ROR-γt 和Foxp3表达水平，并分析Th17/Treg细胞平衡与肺功能下降程度的相关性。结果与肺功能正常组和正常对照组相比，COPD患者外周血Th17细胞比例、相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17 A、TGF-β及转录因子ROR-γt表达水平升高，且重度和极重度患者升高更加明显；而Treg细胞比例、细胞因子IL-10及转录因子Foxp3表达水平则明显降低。诱导痰上清液相关细胞因子变化趋势与外周血Th17和Treg细胞的变化趋势一致。 Th17/Treg细胞比值与FEV1、FVC和FEV1/FVC呈显著负相关。结论 Th17/Treg细胞平衡失调与COPD患者的肺功能下降密切相关，可能参与了COPD的疾病进展过程。
关键词： 慢性阻塞性肺疾病 Th17细胞 调节性T细胞(Treg) 肺功能 免疫失衡 -
131I和甲巯咪唑对Graves病患者外周血Treg细胞及IL-10水平的影响
目的 观察131I和甲巯咪唑治疗Graves病(GD)前后调节性T细胞(Treg)和白细胞介素-10(IL-10)的变化,并探讨其相关的临床意义.方法 选取2013年4月～2015年11月笔者医院收治的GD患者88例,随机分为131I治疗组和甲巯咪唑治疗组,每组44例.选择同期笔者医院健康体检者40例作为正常对照.血清IL-10的检测使用ELISA法,流式细胞仪检测Treg细胞.比较两组治疗前后FT3、FT4和TSH.结果 GD患者Treg细胞比例为3.25％±0.84％,显著低于正常对照组的7.14％±2.13％(P＜0.01),GD患者IL-10因子表达为8.22±1.73μmol/L,也显著低于正常对照组的15.64±3.17μmol/L(P＜0.01).131I和甲巯咪唑组治疗前GD患者Treg细胞比例和IL-10因子表达差异无统计学意义(P＞0.05),治疗后131I组Treg细胞比例和IL-10因子表达出现显著升高(P＜0.05),但甲巯咪唑组上述指标治疗前后无显著性差异(P＞0.05).131I和甲巯咪唑组治疗前GD患者FT3、FT4和TSH差异无统计学意义(P＞0.05),治疗后两组FT3和FT4均显著减低(P＜0.01),TSH均显著升高(P＜0.05).但131I组对FT3和FT4的减低作用以及对TSH的升高作用显著优于甲巯咪唑组(P＜0.05).结论 131I可提高Graves病患者Treg细胞比例和IL-10因子表达,临床疗效显著.
关键词： Graves病 131I 甲巯咪唑 调节性T细胞(Treg) 白介素-10 -
肿瘤微环境中靶向调节性T细胞免疫治疗策略
调节性T细胞(Treg)是一群具有负调节机体免疫反应的淋巴细胞.可抑制肿瘤相关抗原T细胞免疫,影响肿瘤免疫治疗效果以及疫苗活化.清除CD4+CD25+T细胞(Treg)可抑制肿瘤生长,但会引起自身免疫性疾病,这与Treg细胞维持自身免疫耐受有关.Treg根据来源可分为胸腺来源的天然调节性T细胞(nTreg)和外周诱导型调节性T细胞(iTreg).虽然调节性T细胞在不同癌症类型和组织中表型多样且具有异质性,但都共表达CD4、CD25、foxp3分子标记.由于其肿瘤异质性和器官异质性,因此在肿瘤免疫治疗中靶向Treg细胞策略也不同.肿瘤免疫治疗中可清除Treg或清除限制Treg细胞免疫抑制的功能蛋白例如GITR、T-bet、Neoropilin-1、CTLA-4、IDO或PD-1.在清除Treg细胞时为防止引起自身免疫性疾病通常加入OVA疫苗;目前已获FDA批准Ipilimumab治疗黑色素瘤的分子机制就是靶向Treg细胞的CTLA-4.本文通过对Treg的表型、异质性及靶向Treg的肿瘤治疗策略的综述,为将来针对Treg治疗时,避免免疫紊乱提供研究思路.
关键词： 调节性T细胞(Treg) 肿瘤免疫治疗 肿瘤微环境 -
Treg抑制DC活性调控小鼠肺部炎症发生发展
目的 探讨调节性T细胞(Treg)在变态反应性肺泡炎中的作用及Treg对变态反应性肺泡炎发生发展过程中树突状细胞(DC)活性影响.方法 腹腔注射抗CD25单克隆抗体建立小鼠Treg消除模型,通过气管灌注1-3-β葡聚糖建立小鼠变态反应性肺泡炎模型,采用流式细胞术检测小鼠肺门淋巴结中树突状细胞活性;苏木素-伊红染色进行病理观察,比较各组小鼠肺组织切片中炎症反应和肉芽肿程度.结果 与葡聚糖模型组小鼠比较,Treg消除小鼠肺门淋巴结中CD4+ CD25+ Treg百分比[(6.76±1.0)％]明显降低(P＜0.05);组织病理观察显示,Treg消除小鼠肺组织局部炎症反应程度明显重于葡聚糖模型组小鼠;流式细胞术检测发现,葡聚糖灌注后早期,小鼠肺门淋巴结中CD80+ MHCⅡ+ DC的比例较对照组明显增加;Treg消除小鼠肺门淋巴结和脾细胞中CD80+ MHCⅡ+ DC比例[(37.3±5.8)％]较葡聚糖模型组小鼠[(24.3±1.9)％]显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 Treg参与抑制变态反应性肺泡炎的发生发展,其机制可能与抑制DC活性发挥免疫抑制作用有关.
关键词： 调节性T细胞(Treg) 免疫调控 肺部炎症 -
IL-21对慢性粒细胞白血病患者调节性T细胞的影响
目的:观察白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的作用,为CML的免疫治疗提供新思路.方法:收集兰州大学第二医院血液科初诊CML患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),免疫磁珠法分选出CD4+T细胞.分别加入50、100、200 ng/ml IL-21与CD4+T细胞共培养72 h后,流式细胞术检测Treg的比例,并设生理盐水空白对照组.Real-time PCR法检测Treg细胞中Foxp3 mRNA的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中IL-10、TGF-β的水平.结果:与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml IL-21组CD4+ CD25+ Treg占CD4+T细胞的比例均降低[(3.42±0.76)％、(6.81±0.33)％、(7.98±0.76)％vs(12.09±0.91)％,P＜0.05]；且3组的Foxp3 mRNA均降低[(0.05±0.02)、(0.16±0.02)、(0.25±0.02)vs 1,P＜ 0.05]；Treg分泌IL-10量减少[(26.13 ±7.28)、(44.88 ±3.72)、(79.77±3.94) vs(133.00±12.32) pg/ml,P＜0.05],分泌TGF-β量也减少[(9.25 ±0.84)、(16.70±1.00)、(20.47±1.60)vs (26.05±1.81) pg/ml,P＜0.05].结论:IL-21在体外可减少CML患者外周血中Treg的比例,并抑制其功能.
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成人特发性膜性肾病患者外周血中调节性T细胞和辅助性T细胞17的比例变化研究
目的 研究特发性膜性肾病(IMN)患者外周血和肾组织中调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)的比例变化,探讨Treg和Th17比例失衡参与IMN发病的可能机制.方法 选取于上海交通大学医学院附属新华医院就诊经肾活检确诊为IMN的患者(IMN组,n=30)、健康志愿者(健康对照组,n=20)及行肾癌手术者(肾癌对照组,n=10)为研究对象.采用流式细胞仪测定IMN组和健康对照组外周血单核细胞(PBMC)中Treg和Th7的表达;实时聚合酶链反应(PCR)法检测PBMC中叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)和维甲酸相关孤核受体(RORγt)的表达水平;采用免疫组化法检测IMN组和肾癌对照组肾组织中IL-17的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,与健康对照组相比,IMN组PBMC中CD4+Foxp3+Treg表达水平降低(P＜0.05),Th17表达水平升高(P＜0.05),Treg/Th17比值显著降低(P＜0.01).PCR检测结果显示,与健康对照组相比,IMN组PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平明显下调(P＜0.01),RORγt mRNA水平明显上调(P＜0.01).免疫组化结果显示,IMN组患者肾组织中IL-17的表达较肾癌对照组患者显著升高(P＜0.05),主要体现于肾小管处.相关性分析显示,IMN组患者外周血Treg/Th 17比值与24 h尿蛋白定量水平呈明显负相关(r =-0.537,P＜ 0.05),与血清白蛋白水平呈明显正相关(r=0.669,P＜0.05).结论 IMN患者外周血中存在Treg表达水平降低和Th17表达水平升高的比例失衡,而Treg/Th 17比例失衡与IMN的发病机制有关.
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膀胱癌患者术前外周血调节性T细胞及细胞毒性T淋巴细胞表达水平比较
目的 分析膀胱癌患者术前外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及CD8+CD28+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的表达水平.方法 选取病理为低级别尿路上皮癌患者43例,高级别尿路上皮癌患者43例,以及未合并感染的肾囊肿患者20例为对照组.采用流式细胞技术检测外周血中CD4+CD25+Treg及CD8+CD28+CTL的表达水平,并探讨其表达与病理分级的关系.结果 低级别和高级别尿路上皮癌患者外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例分别为(6.58±2.93)％和(6.29±3.55)％,较对照组(4.55±2.83)％更高,差异具有统计学意义(P＜0.05);低级别和高级别尿路上皮癌患者外周血中CD8+CD28+CTL占淋巴细胞比例分别为(6.57±3.30)％和(6.54±3.46)％,较对照组(8.81±3.78)％更低,差异具有统计学意义(P＜0.05).不同病理分级患者组间比较表明,低级别与高级别患者外周血中上述两种T细胞的比例差异无统计学意义(P＞0.05).结论 膀胱尿路上皮癌患者外周血中CD4+CD25+Treg的表达增加,而主要的抗肿瘤效应细胞CD8+CD28+CTL表达降低,通过调节上述两类T细胞的表达水平,有望成为膀胱癌免疫治疗的新方向.
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IL-2调控免疫耐受及其在慢性移植物抗宿主病治疗中的应用研究
慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是异基因造血干细胞移植术后常见的并发症,该病与移植后供体来源T细胞和B细胞激活的一系列免疫反应及免疫耐受缺失有关.白介素-2 (IL-2)是维持具有免疫调节功能的CD4+Foxp3+调节性T细胞分化、存活及其功能的关键因子.本文综述IL-2通过特异性增加调节性T细胞数量从而增强其免疫抑制功能的相关研究,以及重建移植后T细胞稳态在cGVHD预防和治疗中的研究进展.
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晚期缺血预适应(IPC)联合半乳糖凝集素-9通过上调调节性T细胞减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤
目的 研究晚期缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)联合半乳糖凝集素-9(galectin-9,Gal-9)对小鼠肾脏缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的预防作用及可能的机制.方法 75只雄性C57BL/6N小鼠随机分为5组.(1)IR组:d1仅分离两侧肾蒂,不进行预缺血,d5夹闭两侧肾蒂造成缺血35 min.(2)IPC-IR组:d1夹闭两侧肾蒂造成18 min预缺血,d2～d5每天PBS皮下注射,d5给药后立即夹闭两侧肾蒂造成缺血35min.(3) IPC-Gal9-IR组:d1夹闭两侧肾蒂造成18 min预缺血,d2～d5每天给予Gal-9 5 μg皮下注射,并于d5给药后夹闭两侧肾蒂造成缺血35 rmin.(4) IPC-Gal9-PC61-IR组.:d1夹闭两侧肾蒂造成18 min预缺血,d2～d5每天给予Gal-9 5 μg皮下注射,d3和d5分别给予调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)特异性拮抗剂PC61腹腔注射200 μg,并在d5给药后夹闭两侧肾蒂造成缺血35 min.(5) sham-sham组:不进行预适应,不给药,不给予IR损伤.以上5组于IR或第2次sham术后24h、72h和7天取样评价肾功能,并采用流式细胞术比较外周血、脾脏和肾脏中Treg的表达量和肾脏固有免疫系统反应程度及炎性因子的分泌.结果 缺血再灌注24h及72h小鼠血肌酐IPC-IR组显著低于IR组(P＜0.01),同时IPC-Gal9-IR组显著低于IPC-IR组(P＜0.05),而给予Treg特异性拮抗剂的IPC-Gal9-PC61-IR组与IR组差异无统计学意义(P＞0.05).缺血再灌注24 h肾小管间质损伤指数IPC-IR组显著低于IR组(P＜0.05),同时IPC-Gal9-IR组显著低于IPC-IR组(P＜0.05).IPC-Gal9-IR组肾脏局部中心粒细胞浸润减轻(P＜0.05)且CD4+T细胞分泌的IFN-γ减少(P＜0.05).IPC-Gal9-IR组外周血、脾脏和肾脏Treg占CD4+T细胞的比例较IR组显著升高(P＜0.05).结论 晚期IPC联合Gal-9干预对小鼠缺血再灌注肾损伤的保护作用优于单纯缺血预适应,可能与系统上调Treg表达有关.
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环氧化酶-2(COX-2)抑制剂联合白细胞介素-2(IL-2)增强小鼠肾癌免疫治疗敏感性的研究
目的 探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂联合白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对小鼠肾癌免疫治疗的作用及其机制.方法 以Renca细胞建立Babl/c小鼠异位肾癌模型,共28只,随机等分成4组,不同组别予以不同给药,分别为IL-2组、NS-398(一种COX-2抑制剂)组、IL-2+ NS-398组和空白对照组.在第14天、28天提取各组荷瘤小鼠外周血,用流式细胞术检测调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的变化；切取荷瘤小鼠瘤体及脾脏,免疫组化检测小鼠脾脏和肿瘤局部Treg的变化.结果 小鼠异位肾癌在不同药物处理后,肿瘤体积出现明显变化,联合用药组肿瘤体积减小明显,经多组t检验,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.05).同时,COX-2抑制剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤及脾脏中Treg的表达,且与IL-2联合有协同作用(P＜0.05).结论 COX-2抑制剂联合IL-2可显著抑制荷瘤小鼠异位肾癌的发展,说明Treg的下调是抑制肾癌生长的可能机制之一.
关键词： 肾癌 COX-2抑制剂 免疫治疗 调节性T细胞(Treg) 小鼠 -
HIV gp41融合多肽对抗原特异性Treg活化的抑制作用
目的 探讨HIV gp41融合多肽(fusion peptide,FP)与机体免疫细胞的相互作用,观察FP能否影响抗原特异性的调节性T细胞活化.方法 用免疫磁珠分离DO11 10小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD4+CD25-效应性T细胞(Teff)共培养,3d后采用CCK-8法分析FP对OVA 323-339抗原激活的Treg抑制Teff细胞增殖的影响.另外,ELISA法检测FP对Treg细胞IL-10分泌的影响,荧光共聚焦分析FP多肽在Treg细胞表面与TCR的共分布.结果 25 mg·L-1的FP能降低Treg的抑制活性和IL-10分泌,在活化的Treg细胞表面有FP和TCR荧光的重叠.结论 FP降低抗原特异性Treg细胞的抑制功能,可能与其抑制IL-10合成有关;它与TCR在细胞膜的相互作用也可能影响APC向Treg细胞递呈活化信号,干扰Treg的活化.
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基于Treg细胞抑制的中医抗肿瘤作用研究
目的:探究中医是否可以通过下调Treg细胞的数量而对肿瘤治疗起到增效作用.方法:从中国知网、Pubmed等数据库中收集整理国内外相关文献,综述并分析Treg细胞与肿瘤的关系以及中药、针刺、艾灸等中医治疗手段对调节性T细胞的作用.结果:Treg细胞与肿瘤免疫逃逸密切相关,在肿瘤的发生、发展过程中起着极为重要的作用,中医治疗可通过下调Treg细胞的数量、活性等避免肿瘤细胞的免疫逃逸,提高机体免疫力.结论:中医可通过下调Treg细胞数量而发挥抗肿瘤作用.
关键词： 中医 调节性T细胞(Treg) 抗肿瘤作用 -
三叶青黄酮干预荷癌小鼠Treg细胞生成及其CD152表达的研究
目的:研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠脾脏Treg细胞生成及其CD152表达的影响.方法:将小鼠随机分为非造模组、生理盐水组、塞来昔布组、三叶青黄酮高、中、低剂量组,除非造模组外,其它各组皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,接种24 h后开始灌胃给药,每天1次,非造模组不灌胃.分别于给药14、23天后,处死半数动物,取脾脏,分离单个核细胞,流式细胞术测定脾脏单个核细胞中Treg细胞比例及CD152表达.结果:第23天时,与生理盐水组比较,塞来昔布组、三叶青黄酮高、中剂量组小鼠的瘤体明显减小,差异均有统计学意义(P＜0.01).三叶青黄酮各剂量组间瘤体比较存在差异(P＜0.05),瘤体大小依次为:三叶青黄酮高剂量组＜三叶青黄酮中剂量组＜三叶青黄酮低剂量组;塞来昔布组抑瘤效果与中剂量组相近(P＞0.05).与非造模组比较,其它各组小鼠Treg细胞比例和CD152的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).第23天时,与生理盐水组比较,各给药组小鼠Treg细胞比例和CD152的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜ 0.01).三叶青黄酮各剂量组间Treg细胞比例比较存在差异(P＜0.01),Treg细胞比例依次为:三叶青黄酮高剂量组＜三叶青黄酮中剂量组＜三叶青黄酮低剂量组;塞来昔布组Treg比例与中剂量组相近(P＞0.05).塞来昔布组下调CD152表达效果佳,与三叶青黄酮中、低剂量组比较有显著差异(P＜0.05),三叶青黄酮各剂量组间无明显差异(P＞0.05).结论:三叶青黄酮的抑瘤效果可能与下调Treg细胞比例和CD152表达有关,逆转免疫抑制,从而起到抗肿瘤的作用.
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人类白细胞抗原-G阳性的脐带间充质干细胞体外诱导调节性T细胞的实验研究
目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)-G阳性的脐带间充质干细胞在体外诱导调节性T细胞(Treg)产生的效果.方法 从新生儿脐带中分离脐带间充质干细胞,采用脂质体转染的方式将PEGFP-N1-HLA-G质粒转染到脐带间充质干细胞中,设为PEGFP-N1-HLA-G组;转染空载体PEGFP-N1质粒的脐带间充质干细胞设为PEGFP-N1组;相同条件下,未加入空载体的脐带间充质干细胞设为空白对照组.采用流式细胞仪检测脐带间充质干细胞标志物;采用蛋白质免疫印迹法鉴定各组细胞HLA-G蛋白的表达;各组细胞与健康人外周血中CD4+T细胞混合培养24 h和48 h后,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的比例.结果 脐带间充质干细胞CD45、CD34和HLA-DR呈阴性表达,CD29、CD44和CD105呈阳性表达;PEGFP-N1-HLA-G组可以表达HLA-G蛋白,与空白对照组和PEGFP-N1组比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).PEGFP-N1-HLA-G组细胞在与CD4+T细胞混合培养24 h后,CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的(15.3±1.9)%,在培养48 h后,CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的(14.3±2.1)%,与空白对照组和PEGFP-N1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 HLA-G基因修饰后脐带间充质干细胞能够有效地在体外诱导CD4+CD25+Foxp3+Treg的产生.
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阿奇霉素对肺移植术后闭塞性细支气管炎小鼠Th17/Treg平衡的影响
目的 探讨阿奇霉素对肺移植术后闭塞性细支气管炎的影响及对辅助性T(Th)17细胞/调节性T细胞(Treg)平衡的作用.方法 无特定病原体(SPF)级C57BL/6小鼠24只、Balb/c小鼠48只.以C57BL/6小鼠为供体,Balb/c小鼠为受体,将Balb/c小鼠随机分成4组,每组12只,分别为实验对照组(C组)、阿奇霉素对照组(Cazm组)、移植组(T组)、移植治疗组(Tazm组).T组和Tazm组建立气管异位移植模型模拟肺移植术后闭塞性细支气管炎.于移植后1 d起,给予Cazm组和Tazm组小鼠阿奇霉素30 mg/kg每周灌胃3次,分别于移植后14 d和28 d取出移植气管,收集外周血.取出移植气管行苏木素-伊红(HE)染色观察病理学变化,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周血细胞ROR-γt和Foxp3信使核糖核酸(mRNA)的表达,采用酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆Th17、Treg相关细胞因子的水平变化.结果 气管异位移植后,与C组气管相比,T组和Tazm组移植气管出现闭塞并有炎症浸润,Tazm组程度要轻于T组.与T组相比,Tazm组ROR-γt mRNA表达水平降低(P<0.05),两者Foxp3 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).与T组相比,Tazm组细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-17水平降低(均为P<0.05).结论 阿奇霉素持续治疗可延缓移植后闭塞性细支气管炎的进展,可能与抑制Th17细胞分化及其介导的炎症作用相关.
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肾移植基础研究2017年盘点
根据肾移植领域国际核心期刊的文献,综述2017年该领域基础研究的前沿热点和新进展,包括排斥反应、免疫耐受、缺血-再灌注损伤、机械灌注、异种移植等方面,协助临床医师深入了解移植肾相关疾病的现象与本质,提高对移植肾相关疾病的认识,以改善移植肾受体长期存活.
关键词： 肾移植 基础研究 长期存活 排斥反应 免疫耐受 缺血-再灌注损伤(IRI) 机械灌注 调节性T细胞(Treg) 异种移植 -
Th17/Treg细胞失衡与乙肝病毒感染相关性肝病的关系
HBV感染相关性肝病是我国乃至全世界的一种常见性传染性疾病、发病率高、病程长、预后差,目前乙肝相关性肝病发病机制并不完全明确,HBV持续感染与机体免疫应答紧密相关,同时HBV的持续感染是引起宿主免疫调节紊乱,导致不能有效清除病毒、病情迁延不愈的原因之一,加之Th17/Treg细胞失衡可能参与了乙肝相关性肝病异常免疫反应,从而导致乙肝相关性肝病炎症慢性化、肝组织纤维化、肝硬化和癌变的形成.本文就 Th17/Treg 细胞失衡与乙肝相关性肝病的相互关系进行了综述和展望.
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全葡聚糖颗粒促进肿瘤微环境驯化的小鼠树突状细胞成熟并抑制调节性T细胞分化
目的 体外模拟肿瘤微环境驯化免疫抑制性树突状细胞(TEDC),研究全葡聚糖颗粒(WGP)对其免疫功能的影响.方法 采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),同时加入白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)共培养,诱导得到TEDC,再加入WGP激发2d.磁珠分选出OT-Ⅱ小鼠淋巴结和脾脏中的CD4+T细胞,加入特异性抗原卵清蛋白(OVA),再与TEDC共培养.流式细胞术检测细胞的CD11c、CD86、CD40、CD80、MHC-Ⅱ的水平和CD4+ FOXP3+调节性T细胞(Treg)的分化情况.实时荧光定量PCR检测TEDC的肿瘤坏死因子α(TNF-αt)、IL-12p40、IL-10、IL-6、IL-4、TGF-β1 mRNA水平;ELISA检测TEDC培养上清中的TNF-α、IL-23、IL-12p70、IL-4水平.结果 WGP可以上调TEDC表面MHC-Ⅱ、CD86、CD80和CD40的表达,提高TNF-α、IL-12p40、IL-6水平,降低TGF-β1水平;抑制其诱导CD4+ FOXP3+T细胞分化能力.结论 β-葡聚糖可以改变TEDC的成熟和分化状态,改善其免疫抑制功能.
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短期使用雷帕霉素联合调节性T细胞可延长小鼠移植心脏时间但不能抑制受体肿瘤发生
目的 研究短期使用雷帕霉素(Rap)联合调节性T细胞(Treg)在诱导同种异体小鼠心脏移植物长期存活,同时探讨此方案对移植受体肿瘤免疫的影响.方法 免疫磁珠法分离得到受体小鼠脾脏Treg,经CD3/CD28单克隆抗体磁珠及2000 U/mL重组小鼠白细胞介素2(rmIL-2)体外扩增后,流式细胞术检测纯度;建立小鼠腹腔同种异体心脏移植模型(H-2b到H-2d),分为对照组(单纯移植)、Rap组、Rap联合Treg组.Rap组连续14 d经腹腔注射Rap 1 mg/(kg·d),Rap联合Treg组注射相同剂量的Rap,并移植当天经尾静脉过继输注扩增后的1×107个Treg,同时设同基因移植组(H-2d到H-2d),每日观察移植心脏搏动并在相应时点进行组织学评价.在受体肿瘤免疫实验中设三组同种异体心脏移植(H-2b到H-2d)小鼠,同时经尾静脉过继输注B16-F10细胞(H-2b)(受体来源),另三组同种异体心脏移植(H-2d到H-2b)小鼠经尾静脉过继输注B16-F10细胞(H-2b)(供体来源),两周后比较肺部肿瘤结节数量.结果 对照组移植心脏中位生存时间(MST)为7d,Rap组为15 d,Rap联合Treg过继输注能够显著延长移植心脏MST至93 d,组织学显示长期存活心脏淋巴细胞浸润及慢性血管病变;对于供体来源肿瘤,对照组未见肿瘤结节,Rap组为(15±8)个,Rap联合Treg组小鼠肺部肿瘤结节为(14±7)个,后2组类似无显著性差异;对于受体来源肿瘤,对照组肿瘤结节为(70±12)个、Rap组为(28±9)个、Rap联合Treg组小鼠肺部肿瘤结节为(146±12)个,与对照组、Rap组相比均显著增加.结论 短期使用低剂量Rap联合Treg能够显著延长小鼠移植心脏的存活时间,但仍不能抑制受体肿瘤的发生.
关键词： 调节性T细胞(Treg) 心脏移植 肿瘤免疫 -
免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血调节性T细胞数量减少伴随自噬的降低
目的 检测自身抗体阳性的免疫性血小板减少症(ITP)患儿CD4+ CD25+ FOXP3+调节性T细胞(Treg)数量以及自噬相关蛋白的表达.方法 通过流式细胞术分选出初诊ITP患儿和健康对照儿童外周血中的Treg,根据抗体的平均荧光强度分别统计自噬相关基因5(ATG5)和ATG7蛋白水平,Western blot法检测CD4+ CD25+ Treg的蛋白激酶B(AKT)和细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化水平.结果 与健康对照儿童相比,ITP患儿Treg数量显著降低,ATG5和ATG7表达降低,AKT和ERK的磷酸化水平均显著降低.结论 在初诊自身抗体阳性的ITP患儿中,Treg数量降低,伴随增殖相关蛋白磷酸化水平及细胞自噬水平的降低.
