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利用基因重组抗原研制人CD20单克隆抗体及其功能的研究
目的利用基因重组抗原免疫小鼠,制备人CD20单克隆抗体,研究其特异性和功能. 方法用表达重组人CD20基因的细胞NIH-3T3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,以间接免疫荧光法筛选杂交瘤上清.免疫沉淀法及流式细胞术鉴定其识别抗原的相对分子质量(Mr)和特异性;以MTT法、流式细胞术及形态学方法检测诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖的功能. 结果利用杂交瘤技术获得了1株抗人CD20的单克隆抗体1-28,它具有CD20抗体特异的细胞反应谱,其识别的抗原Mr为33×103.MTT实验证实1-28能显著抑制Daudi和Raji细胞生长. 结论利用基因重组抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1-28,此单抗具有抑制CD20阳性细胞增殖和诱导其凋亡的功能.
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抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究
目的观察由基因重组抗原制备的抗人CD20单克隆抗体 (CD20-McAb)1-28对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用,并探讨其作用机理.方法利用流式细胞术测定所获1-28单抗对标准CD20-FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化.结果 1-28能明显竞争标准CD20-FITC单抗与Daudi细胞表面CD20分子的结合.电镜结果证实了1-28能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论;实验结果显示Daudi细胞与1-28作用后胞内游离钙浓度明显升高(P<0.05),细胞内Bcl-2蛋白和caspase酶原的表达量下降,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加.结论 1-28能竞争结合Daudi细胞表面的CD20分子并诱导其发生凋亡.
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利用重组痘苗病毒表达人CD20基因
目的获得重组人CD20分子并研究编码人CD20的基因在痘苗病毒中的表达.方法从pGEM-T-EASY/CD20载体上酶切下编码人CD20分子的cDNA,亚克隆到pJSA1175载体上,重组质粒与野生痘苗病毒共转染TK143细胞.结果APAAP检测到重组病毒感染的细胞表面有CD20分子表达,富集后病毒滴度约为1×109pfu/ml.结论人CD20基因在痘苗病毒中表达,为研究其功能以及研制单克隆抗体奠定了基础.
