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NAC1、FOXQ1在不同级别卵巢浆液性癌组织中表达及其临床意义
目的 通过检测伏隔核相关因子1(NAC1)、FOXQ1在卵巢浆液性癌中的表达情况,探讨NAC1、FOXQ1在卵巢浆液性癌发生、发展及侵袭中的可能作用和临床意义.方法 选取卵巢浆液性癌标本80例,其中低级别浆液癌36例,高级别浆液性癌44例.选取同期卵巢肿瘤40例患者,其中20例为卵巢浆液性囊腺瘤,20例为卵巢交界性浆液性囊腺瘤;另取正常卵巢组织标本20例进行对照.采用免疫组化法检测NAC1、FOXQ1各组织中的表达情况,并分析其与病理分期、淋巴结转移及其患者预后生存率的关系.结果 NAC1在浆液性囊腺瘤、正常组织中无表达,在交界性囊腺瘤呈弱阳性,在低、高级别卵巢浆液性癌组织中表达率分别为44.4%、59.1%,差异有统计学意义(P<0.05);FOXQ1在恶性卵巢肿瘤、交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中均有表达,FOXQ1在高级别浆液性卵巢癌、低级别浆液性卵巢癌、交界性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤、正常卵巢组织中的阳性表达分别呈逐渐降低趋势(P<0.05);NAC1、FOXQ1在高级别浆液性癌组织中不同病理分期阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),随病理分期增加阳性表达呈递增趋势;NAC1、FOXQ1在高级别浆液性癌阳性表达淋巴结转移情况大于低级别,差异有统计学意义(P<0.05);高级别卵巢浆液性癌中NAC1、FOXQ1阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05),而5年生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 NAC1、FOXQ1在卵巢高级别浆液性癌中阳性表达强,二者可能参与了卵巢高级别浆液性腺癌的发病过程,NAC1、FOXQ1过表达与高级别卵巢浆液性癌患者的生存率有关,可作为一个独立的卵巢癌不良预后指标.
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利用微阵列芯片技术探究基因FOXQ1与大肠癌的关系
目的:应用全基因组表达谱芯片和microRNA芯片检测人结肠癌细胞DLD1在敲低FOXQ1基因前后mRNA和microRNA的表达改变.方法:抽提两组细胞的RNA,分别与WholeHuman Genome Oligo Microarray(4×44 K,Agilent Technologies)全基因组表达谱芯片和mi RCURYTM LNA Array(v.18.0,AgilentTechnologies)microRNA芯片进行杂交,应用genespring、genepix软件对芯片结果进行统计,对全基因组表达谱芯片进行GO、pathway分析,并应用qRT-PCR对部分结果进行验证.应用Microsoft Excel和SPSS17.0软件进行统计学分析.结果:全基因组表达谱的检测结果表明,敲低FOXQ1基因后,在芯片所涵盖的41093个基因中,共有255个基因上调,176个基因下调.qRT-PCR的验证结果与全基因组表达谱芯片的结果基本相符.MicroRNA芯片的检测结果表明,敲低FOXQ1基因后,共有31个microRNA上调,12个microRNA下调.结论:本研究了解了FOXQ1基因敲低前后mRNA和microRNA的表达改变,为后续FOXQ1在结肠癌的发生发展中的作用机制研究提供了重要的线索和实验依据.
关键词： FOXQ1 癌基因 全基因组表达谱芯片 microRNA芯片 -
慢病毒载体PLKO.1-shFOXQ1的构建及在基底样乳腺癌细胞中的功能研究
目的:构建降表达FOXQ1的慢病毒载体,并探索FOXQ1对基底样(basal-like)亚型乳腺癌细胞增殖转移能力的影响.方法:体外合成FOXQ1干扰片段并与PLKO.1-puro连接构建重组慢病毒质粒PLKO.1-shFOXQ1,构建重组慢病毒颗粒,分别感染MDA-MB-231和BT549细胞.通过RT-qPCR、Western blot检测细胞中FOXQ1表达情况.通过MTT、克隆形成实验观察稳定降表达FOXQ1后细胞增殖能力的变化情况,采用Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力的变化,并用RT-qPCR、Western blot检测增殖转移相关基因表达量的变化.结果:利用重组慢病毒颗粒PLKO.1-shFOXQ1感染MDA-MB-231和BT549细胞,FOXQ1表达量显著降低,导致MDA-MB-231和BT549细胞的增殖以及迁移侵袭能力显著降低.同时增殖相关基因cyclinD1、c-Myc,转移相关基因fibronectin 1、vimentin的表达下调.结论:沉默FOXQ1的表达能够抑制MDA-MB-231和BT549细胞的增殖和转移.
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FOXQ1稳定表达乳腺癌细胞系的建立及鉴定
目的：建立稳定过表达FOXQ1乳腺癌细胞系，为进一步研究FOXQ1在体内乳腺癌转移、血管生成、抗凋亡机制，以及以FOXQ1为靶点开发抗肿瘤药物提供细胞研究模型。方法：采用脂质体转染的方法将真核表达质粒FOXQ1转染至MDA-MB-231-luc细胞，经G418筛选及克隆化培养，获得稳定过表达FOXQ1蛋白的细胞系。通过RT-qPCR、Western blot对细胞系中FOXQ1的表达进行鉴定。通过Transwell迁移侵袭等实验，观察过表达FOXQ1后对231-luc细胞EMT相关蛋白表达、231-luc细胞迁移侵袭等生物学特性的影响。结果：获得过表达FOXQ1的稳定细胞系，迁移侵袭实验表明该细胞系恶性化程度明显高于野生型。结论：成功建立稳定过表达FOXQ1的乳腺癌细胞系，FOXQ1在细胞核中高表达，进而增加EMT间质标志物Fn1、Vim的表达，增强231-luc的迁移侵袭能力。
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FOXQ1在卵巢高低级别浆液性癌中的阳性表达与淋巴结转移及其远期生存率的关系
目的 分析FOXQ1在卵巢高、低级别浆液性癌中的阳性表达与淋巴结转移及其远期生存率的关系.方法 选取我院80份卵巢浆液性癌标本,选取同期收治的卵巢肿瘤患者40例;另选取子宫肌瘤切除术中切除正常卵巢组织标本20例进行对照.采用免疫组织化学法染色,统计FOXQ1在卵巢不同组织中的阳性表达,分析其与淋巴结转移及其患者预后生存率的关系.结果 FOXQ1在恶性卵巢肿瘤、交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中均有表达,FOXQ1在高级别浆液性卵巢癌、低级别浆液性卵巢癌、交界性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤、正常卵巢组织中的阳性表达呈逐渐降低趋势(P＜0.05);FOXQ1在高级别浆液性癌阳性表达患者的淋巴结转移情况大于低级别浆液性癌,差异有统计学意义(P＜0.05);高级别卵巢浆液性癌中FOXQ1阳性表达患者3年生存率与阴性表达患者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高级别浆液性卵巢癌FOXQ1阳性表达强,且与卵巢高级别浆液性癌生存率存在紧密联系,而与低级别浆液性癌生存率无明显相关性,可作为患者不良预后的独立指标.
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Foxq1与E-cadherin蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义
目的：探讨Foxq1与E-cadherin在大肠癌中的表达及其与大肠癌发病和转移的临床病理关系。方法收集大肠癌的临床病理标本62例，采用免疫组织化学法和Western印迹检测Foxq1与E-cadherin蛋白在标本中的定位与表达水平。结果 Foxq1与 E-cadherin 蛋白均在细胞质中表达， Foxq1表达在癌组织、癌旁组织、正常黏膜组织中梯度降低；E-cadherin表达在癌组织、癌旁组织及正常膜组织居中梯度升高（ P＜0.05）。二者的表达在大肠癌中呈负相关（ P＜0.05）。结论 Foxq1和E-cadherin参与了大肠癌的发病，可作为大肠癌早期诊断的联合指标之一，并且为大肠癌的治疗提供新靶点。
关键词： FOXQ1 E-cadherin 大肠癌 转移 相互作用 -
转录因子叉头框Q1与肿瘤相关性的研究进展
转录因子叉头框Q1 (forkhead box Q1,FOXQ1)是叉头框(forkhead box,FOX)超家族的成员之一,广泛存在于人体的多种组织和器官,参与胚胎干细胞和脊椎动物的发育过程.作为转录因子,FOXQ1蛋白通过作用于靶基因的启动子或与其他转录因子相互作用激活靶基因的转录,并从上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)和细胞信号转导等多方面影响肿瘤的发生、发展、侵袭和转移过程.鉴于FOXQ1与肿瘤具有明显相关性,其表达水平可作为某些肿瘤预后评估的指标,并有望成为肿瘤治疗的新靶点.本文通过综述新文献,着重阐述了FOXQ1在肿瘤发生和发展过程中的作用及其可能的机制,以期为肿瘤治疗和研究提供一些参考.
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宫颈癌中Foxq1与NF-κB p65的表达及临床病理意义
目的:通过基因芯片技术筛查与宫颈癌发生密切相关的转录因子,并在蛋白水平进行验证;初步探讨其在宫颈癌发生中的临床病理意义.方法:对新鲜宫颈癌、癌旁组织及正常宫颈组织各2例进行人表达谱芯片(Illumine Human-6 gene chip, 含48 000个基因信息)检测,采用实时定量 RT-PCR方法验证芯片结果,筛选出调控差异基因主要转录因子.并进一步对44例宫颈癌、22例宫颈内上皮瘤变及17例正常宫颈石蜡组织进行免疫组化检测,验证基因芯片筛选的主要转录因子表达情况,分析转录因子和宫颈癌临床病理学关系.结果: 癌组织、癌旁组织与正常宫颈组织间比较共同上调基因67个,下调基因28个,RT-PCR验证了基因芯片结果.其中,NF-κB p65在癌旁组织和正常组织中低表达,在宫颈癌组织中高表达(P<0.05),NF-κB p65与宫颈癌组织分级呈正相关(P<0.05),与临床分期无关(P>0.05);Foxq1在癌旁和正常组织中高表达,在宫颈癌组织中阴性表达(P<0.05),Foxq1表达与宫颈癌组织分级、临床分期均无关(P>0.05).Foxq1与NF-κB p65表达无关(P>0.05).结论:核因子NF-κB p65与Foxq1为宫颈癌发生相关转录因子,可能分别在宫颈癌的发生中起作用.
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沉默FOXQ1基因对甲状腺乳头状癌TP C-1细胞增殖的影响
目的 FOXQ1基因在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中呈现高表达,有关FOXQ1在PTC的生物学功能尚不清楚.文中旨在探讨FOXQ1-siRAN对PTC的TPC-1细胞增殖的影响及其可能的机制.方法 通过lipofectamine TM 2000将3条人工合成的FOXQ1-siRNA和NC-siRNA分别转入到PTC的TPC-1细胞,实验分为空白对照组(加入等量的磷酸盐缓冲液PBS)、NC-siRAN组(转染无意义序列siRNA)、FOXQ1-1组(空白培养基+lipofectamine TM 2000+FOXQ1-1)、FOXQ1-2组(空白培养基+lipofectamine TM 2000+FOXQ1-2)、FOXQ1-3组(空白培养基+lipofectamine TM 2000+FOXQ1-3).利用qRT-PCR和Western blot法分别检测FOXQ1 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法观察细胞增殖活性的变化,qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中细胞周期蛋白(cyclinD1)和c-Myc的表达水平.结果 与空白对照组、NC-siRNA组FOXQ1 mRNA相对表达量比较,FOXQ1-3组明显抑制FOXQ1mRNA的表达(P<0.05).FOXQ1-1组、FOXQ1-2组、FOXQ-3组的FOXQ1蛋白相对表达量(0.54±0.07、0.40±0.07、0.26±0.06)较NC-siRNA组(0.78±0.08)明显降低,FOXQ1-3组下降为明显(P<0.05).MTT结果显示,与空白对照组、NC-siRAN组比较,FOXQ1-3组可明显抑制TPC-1细胞的增殖活性(P<0.05).FOXQ1-3组c-Myc、cyclinD1蛋白表达量(0.57±0.04、0.51±0.10)较空白对照组(1.05±0.07、0.94±0.12)、NC-siRNA组(0.92±0.06、0.91±0.11)明显降低(P<0.05).结论 沉默FOXQ1基因可以有效地抑制PTC的TPC-1细胞的增殖活性,这一作用可能通过抑制cyclinD1和c-Myc的表达水平来实现的.
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FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表达及其临床意义
目的 研究叉头框蛋白Q 1(FOXQ1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在胃癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化EnVision法检测80例胃癌组织和25例癌旁组织中FOXQ1和CyclinD1的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征的关系.结果 胃癌组织中FOXQ1和CyclinD1阳性表达率均高于癌旁组织(均P＜0.05);在不同肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移及不同临床分期者之间的差异均有统计学意义(均P＜O.05),而在不同年龄、性别、肿瘤大小及分化程度者之间的差异均无统计学意义(均P ＞0.05).胃癌组织中FOXQ1阳性表达率与CyclinD1阳性表达率呈正相关(P＜0.05).结论 FOXQ1和CyclinD1高表达在胃癌的发生、发展中起作用,联合检测FOXQ1和CyclinD1可用于判断胃癌的浸润、转移潜能及患者的预后.
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构建慢病毒载体介导RNA干扰沉默肝癌细胞Foxq1的表达
目的 构建慢病毒载体将Foxq1干扰序列递达到人肝癌7721细胞中,观察该细胞中Foxq1的表达并评估慢病毒载体的有效性.方法 体外合成与筛选具有Foxq1干扰功能的核酸片段(siRNA Foxq1),通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中,利用包装细胞(293T)将三质粒系统组装为完整的逆转录慢病毒颗粒,然后感染肝癌细胞.采用Western blot和RT-qPCR分别检测Foxq1蛋白和mRNA表达.同时构建与检测不含有siRNA Foxq1序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照组.结果Foxq1-834-siRNA具有较强的抑制Foxq1 mRNA功能,其抑制效率达90.17%;基因测序证实体外合成的siRNA Foxq1基因序列成功插入到慢病毒转移质粒中;荧光显微镜观察证明肝癌细胞中持续表达Foxq1-834-siRNA的绿色荧光信号,且信号强度随时间推移逐渐增强;采用RT-qPCR和Western blot检测结果证实慢病毒载体感染的细胞中Foxq1 mRNA和蛋白表达量较对照组明显下降(P<0.001).结论 筛选到有效抑制Foxq1的siRNA Foxq1序列,通过构建慢病毒载体感染细胞能有效的将体外合成的siRNA Foxq1递达到癌细胞中,并能抑制癌细胞中Foxq1的表达,为进一步研究肝癌中Foxq1的功能提供有效的工具.
关键词： 慢病毒 FOXQ1 RNA干扰 肝癌细胞株(7721细胞) -
人非小细胞肺癌肿瘤组织中叉头框蛋白Q1的表达水平
目的 探讨叉头框蛋白Q1(FOXQ1)在人非小细胞肺癌肿瘤组织中的表达水平.方法 选取2011年1月至2012年1月我院病理科取得的非小细胞肺癌肿瘤组织,检测FOXQ1在肿瘤组织中的表达,分析影响FOXQ1表达因素,以及探讨FOXQ1表达的临床意义.结果 FOXQ1表达阳性率为90%,FOXQ1蛋白的表达与非小细胞肺癌患者的年龄、性别无关(P>0.05),与癌细胞的分化程度、病理类型、有无淋巴转移以及肿瘤分期有密切关系(P<0.05).结论 FOXQ1的表达水平与患者的预后状况呈负相关性.
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miR-320a靶向FOXQ1抑制结肠癌细胞增殖和侵袭的分子机制
目的 探讨miR-320a在人结肠癌细胞中的生物学行为,并初步阐明miR-320a对癌基因FOXQ1的靶向调控机制.方法 采用qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-320a和FOXQ1的表达;用miR-320a mimics转染结肠癌细胞株HTC-116;采用CCK-8法、克隆形成试验检测miR-320a对结肠癌细胞增殖的影响,采用Transwell小室分析miR-320a对结肠癌细胞侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因和Western Bloting验证miR-320a对FOXQ1的靶向调控作用.结果 QRT-PCR结果显示miR-320a mimics明显上调miR-320a在HCT-116细胞中的表达;CCK-8法和克隆形成试验显示上调miR-320a表达显著抑制结肠癌细胞增殖;Transwell试验表明上调miR-320a可抑制HCT-116结肠癌细胞侵袭;蛋白印迹实验显示上调miR-320a降低FOXQ1蛋白在结肠癌细胞中的表达,双荧光素酶报告基因试验进一步确认miR-320a可以调控FOXQ1的表达.结论 过表达miR-320a可以抑制结肠癌细胞增殖、侵袭,这种抑制作用是通过靶向调控FOXQ1来实现的.
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慢病毒介导的FOXQ1过表达对人脐带间充质干细胞衰老的影响
目的:构建FOXQ1慢病毒载体,探究FOXQ1过表达对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)衰老的影响.方法:PCR扩增FOXQ1序列,构建慢病毒pHBLV-FOXQ1-Puro重组载体,包装病毒、感染hUC-MSCs(过表达组),感染空载体病毒的hUC-MSCs为对照,分别采用实时荧光定量PCR、Western blot检测2组细胞FOXQ1 mRNA及蛋白的表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,采用SA-β-Gal与AP染色检测hUC-MSCs衰老表型.结果:慢病毒pHBLV-FOXQ1-Puro重组载体构建成功,病毒包装后感染hUC-MSCs效果良好.过表达组FOXQ1蛋白及mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05).过表达组细胞增殖能力较强,FOXQ1过表达可以延缓hUC-MSCs衰老.结论:成功建立FOXQ1稳定过表达的hUC-MSCs细胞系,FOXQ1过表达可以延缓hUC-MSCs衰老.
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FoxQ1在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后
目的：研究FoxQ1在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法：在组织水平，应用免疫组织化学En Vision法检测91例食管鳞状细胞癌组织及相应癌旁组织FoxQ1的表达，并分析其表达与临床病理特征及预后之间的关系。结果：1) FoxQ1在食管鳞状细胞癌组织及配对正常食管组织中的阳性表达率分别为：62.6%(57/91)和23.1%(21/91)，差异有统计学意义(P<0.05)；FoxQ1的表达与肿瘤浸润深度、临床分期及预后相关(P<0.05)。经Kaplan-Meier法生存比较，FoxQ1的阳性表达者比阴性表达者生存期短(P<0.05)；多因素Cox比例风险模型分析显示，FoxQ1可以作为判断食管鳞状细胞癌预后的独立因素(P<0.05)。结论：FoxQ1在食管鳞状细胞癌组织中高表达，其表达水平与食管鳞癌发生发展及预后密切相关。有望成为评估食管鳞状细胞癌预后的有效指标。
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FoxQ1在不同级别脑胶质瘤组织的表达和临床意义
目的：研究FoxQ1在不同级别脑胶质瘤组织中的表达和临床意义。方法：在组织水平，使用免疫组织化学法检测92例不同级别胶质瘤组织中FoxQ1的表达，并分析FoxQ1表达与临床病理参数及预后的关系。结果：FoxQ1在34例低级别星形细胞瘤(WHOⅠ~Ⅱ级)、35例间变性星形细胞瘤(WHOⅢ级)和23例胶质母细胞瘤(WHO Ⅳ级)组织中的阳性表达率分别为：14.70%、65.71%和91.30%，差异有统计学意义(χ2=35.85，P<0.01)。胶质瘤组织中FoxQ1表达与WHO分级相关(P<0.05)。经Kaplan-Meier法生存比较，FoxQ1的阳性表达者比阴性表达者生存期短(P<0.05)。多因素分析显示FoxQ1表达是胶质瘤患者独立的预后指标。结论：FoxQ1异常表达可能参与胶质瘤的发生发展和预后相关，并有望成为评估胶质瘤预后的有效指标。
