首页 > 文献资料
-
JAK2 V617F点突变的研究进展及其与ETS2 mRNA表达的相关性
慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)是一组造血干细胞克隆性疾病,在骨髓细胞普遍增生的基础上,某一个系列细胞增生尤其突出,呈持续不断的过度增殖.世界卫生组织(WHO)新关于 cMPDs 分类包括如下7 类:慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、嗜酸细胞性白血病(CEL)和高嗜酸细胞综合征(HES)、真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(IMF)、原发性血小板增多症(ET)和 CMPD(不能分类型)[1].
-
hTERT基因启动子区单体型遗传变异对转录活性影响的研究
目的 个体的端粒长度受到遗传和环境因素的共同调控,遗传度为35％～80％.人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT是端粒酶活性的限速成分,hTERT基因的序列变异与人类衰老相关的疾病风险密切相关,本研究拟探讨hTERT基因启动子区遗传变异对转录活性影响的功能研究.方法 根据生物信息学预测和文献分析,本研究选择hERT基因启动子区的两个单核苷酸多态性位点rs2735940 (-1327T/C)和rs2853669 (-190T/C),构建含有4种单体型的荧光素酶报告载体,包括野生型T-T,突变型T-Z,C-T,C-C.由于rs2853669位于转录因子Ets2和c-Myc的结合位点,与c-Myc、Ets2真核表达载体共转染Hela细胞,检 测荧光素酶活性变化,比较不同单体型对hTERT基因启动子转录活性的影响.结果 研究结果表明,hTERT启动子区rs2853669携带C等位基因的单体型荧光素酶活性较低.与野生型T-T比较,单体型T-C的荧光素酶活性降低31％,单体型C-C的荧光素酶活性降低43％(P＜0.001).转录因子Ets2和c-Myc协同作用,显著增强hTERT基因启动子的活性(P＜0.001).结论 hTERT基因启动子区单体型遗传变异C-C (rs2735940-rs2853669)通过影响与转录因子Ets2和c-Myc的结合效率,降低该基因的转录活性和表达.
-
ETS2在乳腺癌细胞中调控CXCR4转录的机制研究
背景与目的：肿瘤转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。趋化因子受体CXCR4与乳腺癌转移密切相关。本研究探讨转录因子ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)对人乳腺癌细胞中趋化因子受体CXCR4表达的影响，以及ETS2调控CXCR4转录的分子机制。方法：在MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中，本研究通过瞬时转染技术，以及RNAi技术，检测过表达ETS2或抑制ETS2的表达。然后分别应用RT-PCR以及ELISA检测CXCR4 mRNA的表达和蛋白水平，荧光酶素报告基因实验检测启动子活性，ChIP实验检测结合到CXCR4启动子上的ETS2的量。并且对CXCR4启动子上的2个ETS结合位点进行突变，通过荧光报告基因实验，检测突变对CXCR4启动子活性的影响。结果：转染了ETS2过表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中，CXCR4的表达在mRNA和蛋白水平都升高；报告基因实验结果提示，ETS2通过激活CXCR4启动子的活性提高CXCR4的表达；通过ChIP实验发现，在转染了ETS2表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中，结合到CXCR4启动子上的ETS2的蛋白量増高，提示ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上，从而提高CXCR4启动子的活性；利用RNA干扰技术，抑制ETS2的表达，可以显著减弱CXCR4启动子的活性，降低CXCR4的表达和结合到CXCR4启动子上的ETS2的量；荧光酶素报告基因的结果显示，任意一个位点的突变都降低了CXCR4启动子的活性，2个位点的同时突变使CXCR4启动子的活性进一步降低。结论：在人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231细胞中，ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上的2个结合位点(-540到-535和-240到-235)，活化CXCR4启动子活性，从而对CXCR4发挥转录调控的作用。
-
下调 Ets2表达对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长及 mTOR／p70S6K信号通路的影响
目的：探讨下调Ets2表达对裸鼠Eca109移植瘤生长及mTOR／p70S6K信号通路的影响。方法：选择已筛选出的在体外靶向下调Ets2基因表达的siRNA片段，构建包含此片段的慢病毒（LV-siEts2）并感染Eca109，15只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和LV-siEts2组，分别背部皮下接种Eca109、LV感染的Eca109和LV-siEts2感染的Eca109，形成移植瘤，之后观察肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤抑制率。应用qRT-PCR检测肿瘤组织中Ets2 mRNA的表达，TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡，Western blot法检测肿瘤组织中Ets2、Caspase-3、Bcl-2、E-cadherin以及mTOR／p70S6K信号通路蛋白的表达。结果：LV-siEts2组肿瘤生长速度明显变慢，肿瘤体积和质量显著小于空白对照组和阴性对照组（P＜0．05）；LV-siEts2组肿瘤组织中Ets2 mRNA及蛋白表达水平均显著降低；LV-siEts2能引起Eca109细胞的凋亡，且上调Caspase-3和E-cadherin蛋白表达水平，而下调Bcl-2蛋白表达水平（P＜0．05）；LV-siEts2能显著降低mTOR及p70S6K的蛋白表达。结论：LV-siEts2在体内通过抑制mTOR／p70S6K信号通路促进细胞凋亡，从而抑制裸鼠Eca109移植瘤的生长。
-
Ets2 siRNA 转染对 EC9706细胞增殖、侵袭、周期和凋亡的影响?
目的：：探讨 Ets2 siRNA 转染对 EC9706细胞增殖、侵袭能力、周期和凋亡的影响。方法：利用 Western blot检测正常食管上皮细胞系 Het-1A 和食管鳞状细胞癌细胞系(EC1、Eca109、EC9706)中 Ets2蛋白的表达。将 EC9706细胞分为4组：阴性对照组、空白对照组、转染试剂对照组和 Ets2 siRNA 组,处理48 h 后,采用 EdU 荧光标记法和CCK-8法检测4组细胞增殖率和增殖抑制率,Transwell 小室法检测细胞侵袭能力,Western blot 检测 E-cadherin、Caspase-3和 Bcl-2蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC/ PI 双染法检测早期细胞凋亡。结果：与 Het-1A 细胞相比,EC1、Eca109和 EC9706细胞中 Ets2蛋白的表达量增加(F =1177.764,P <0.001),且EC9706细胞中增加为显著。转染后,与阴性对照组相比,Ets2 siRNA 组细胞增殖率降低、增殖抑制率升高(F =64.733和144.741,P <0.05),侵袭能力减弱(F =104.065,P <0.001),细胞周期无明显变化(P >0.05),早期凋亡细胞增加(F =37.986,P <0.001),E-cadherin 蛋白和 Caspase-3蛋白表达增加(F =62.223和81.015,P <0.05),而Bcl-2蛋白表达减少(F =104.439,P <0.001)。结论：Ets2下调后能有效抑制 EC9706细胞增殖,降低侵袭能力,诱导凋亡；Ets2可能成为食管鳞状细胞癌的有效治疗靶点。
-
下调Ets2表达对肾癌786-0细胞迁移及侵袭的影响
目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six 2,Ets2)对肾癌细胞786-0迁移、侵袭的影响及其机制.方法:设计并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达;并利用划痕实验及Transwell实验检测其迁移及侵袭能力的变化;通过Western blot检测下调Ets2表达后基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达水平变化.结果:siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.细胞划痕实验结果显示下调Ets2表达后,细胞迁移能力减弱(P＜0.01);Transwell实验中NC组穿膜细胞数为(43.80±3.99)个,而siR-NA1组为(23.30±4.24)个(P＜0.01),siRNA2组为(24.20±3.29)个(P＜0.01),细胞侵袭能力减弱.Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞中MMP-2及MMP-9的表达的同时上调了基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)和TIMP2的表达.结论:Ets2可通过调节MMPs及TIMPs的表达影响肾癌细胞的迁移及侵袭能力.
-
siRNA下调Ets2对肾癌786-0细胞增殖的影响
目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six2,Ets2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞786-0增殖的影响及机制.方法:Westem Blot检测各肾癌细胞内Ets2的表达,并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达,利用MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术检测其增殖能力的变化,通过Western Blot检测细胞周期相关分子表达水平变化.结果:Ets2在肾癌细胞内的表达比正常肾小管上皮细胞明显增高,siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.下调Ets2后786-0细胞增殖能力及克隆形成能力减弱(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期;Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞内CDK4与CyclinD1的表达,而上调了p21的表达.结论:Ets2可通过调节CDK4、CyclinD1及p21的表达影响肾癌细胞786-0的增殖能力.
