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大麻素受体在成年大鼠脑组织中的分布特点
目的:研究大麻素CB1、CB2受体在成年大鼠脑组织的分布特点和规律,为进一步研究其功能打下基础.方法:用兔抗鼠CB1、CB2受体特异性抗体免疫组化染色,检测大鼠脑组织主要部位两种受体的表达分布情况.结果:CB1受体阳性细胞在脑组织有广泛大量的分布,大脑皮质、胼胝体、海马、基底核区及小脑浦肯野细胞层、脑桥等区域均有较明显表达.CB2受体阳性细胞的数量及分布部位与CB1受体表达基本一致,少数区域如胼胝体、小脑白质阳性细胞数相差较大,CB2受体明显多于CB1受体的表达.结论:大麻素CB1、CB2受体在成年大鼠脑组织均广泛分布,并在多数部位表达情况一致,少数部位存在表达程度差异,提示其在神经系统中参与了某些生理及病理作用.
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大鼠皮肤大麻CB2受体在mRNA及蛋白水平的表达和组织分布
目的:研究皮肤组织在mRNA及蛋白水平表达大麻CB2受体的情况.方法:RT-PCR和免疫印迹方法研究CB2受体在大鼠皮肤的表达,免疫组化方法示CB2受体的组织分布.结果:RT-PCR方法可检测到大鼠皮肤、脾脏组织中CB2受体在mRNA水平的表达;Western印迹示大鼠皮肤、脾脏组织匀浆中抗CB2抗体,可检测到41.6×103蛋白带,而同为实质脏器的肝脏无CB2受体表达;免疫组化方法证实CB2受体主要分布于皮肤的表皮组织和真皮毛囊组织.结论:CB2受体在皮肤组织mRNA和蛋白水平均有表达,主要分布于表皮和毛囊组织.CB2受体可能是神经系统调节皮肤功能的桥梁.
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不同浓度CB2受体激动剂预处理对大鼠海马神经元凋亡的保护作用及机制
目的 探讨CB2受体激动剂AM1241预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 离体培养的大鼠海马神经元,随机分成6组:对照组(Con组),细胞未做特殊处理.CoCl2组:300 μM CoCl2预处理4h后,正常培养基继续培养24h,然后用无血清培养基培养.AM1241 1μmol/L组、AM1241 3 μmol/L组、AM1241 5μmol/L组、AM1241 10 μmol/L组:培养孔中分别加入浓度为l、3、5、10 μM AM1241处理2h后,加入300μM的CoC12处理4h,然后更换正常的培养基培养24h,之后更换无血清的培养基培养.MTT法测定细胞增殖,RT-PCR技术检测bcl-2、caspase-3、iNOS mRNA的表达.结果 与AM1241 1μmol/L组和AM12413 μmol/L比较,AM1241 5μmol/L组和AM1241 10 μmoL/L组预处理明显增加海马神经元的增殖能力(P ＜0.05或P ＜0.01),上调bcl-2 mRNA的表达,下调促凋亡基因caspase-3和iNOS mRNA的表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 5μM和10μMAM1241预处理通过对凋亡相关基因的调控,对缺氧/复氧后的海马神经元有保护作用.
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大麻素受体在大鼠视网膜中的表达和分布
目的 研究大麻素CB1和CB2受体在幼年、成年和老龄大鼠视网膜组织的表达和分布.方法 研究采用免疫组织化学、Western印迹法和视网膜神经节细胞的上丘逆行追踪标记技术.结果 CB1和CB2受体在成年大鼠视网膜上均有较为丰富的表达,其中CB1受体的主要表达部位是外核层(ONL)、内核层(INL)和视神经节细胞层(GCL),以及外网状层(OPL)和内网状层(IPL);CB2的主要表达部位是GCL、INL、ONL的细胞膜和OPL,以及Müller胶质细胞的终足和突起上.免疫荧光双标结果显示,CB1和CB2受体在几乎所有的大鼠视网膜神经节细胞均有表达.CB1和CB2受体在幼年和老龄大鼠视网膜的表达分布与成年大鼠相似.结论 大麻素CB1和CB2受体在大鼠视网膜广泛分布和表达,从幼年到老龄,其表达和分布相似,提示在出生后早期这些受体的发育已经基本完成.大麻素受体系统在视网膜信息处理的调控和视网膜神经保护中可能发挥重要作用.
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大麻素受体系统对视网膜细胞离子通道和突触传递的调控
内源性大麻素系统在脊椎动物视网膜中广泛分布.大麻素受体(cannbinoidreceptor)主要有CB1和CB2两个亚型,与内源性配体N-花生四烯酸氨基乙醇(N-arachidonoylethanolamide,anandamine,AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-arachidonyl glycerol,2-AG)结合调控视网膜神经元和胶质细胞的功能,从而参与调控视网膜视觉信息的处理.本文结合我们研究组近年在视网膜大麻素受体系统的研究结果,综述了有关大麻素CB1和CB2受体对视网膜细胞离子通道和突触传递调控及其机制的研究进展.
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CB1 Cannabinoid Receptor-Dependent and -Independent Inhibition of Depolarization-Induced Calcium Influx in Oiigodendrocytes
Ca2+稳态平衡的调节在少突胶质细胞功能和存活中起重要作用.大麻素CB1和CB2受体在许多细胞中调节Ca2+水平和/或K+电流.本文利用培养的少突胶质细胞中,通过增高细胞外K+浓度(50 mM诱导膜去极化,研究大麻素复合物在此过程引发钙内流中的作用.CB2受体激动剂ACEA导致去极化诱导的少突胶质细胞胞浆的Ca2+瞬变表达浓度依赖性抑制,大效应为(94±3)%,半效应浓度(EC50)为(1.3±0.03)μM.这种作用可被CB2/CB2激动剂CP55、940、内源性大麻素类AEA和2-AG所模拟,但是CB2受体选择性激动剂JWH133没有作用.CB2受体拮抗剂AM251(1μM)也可减少细胞外高K+诱导的Ca2+反应.但不能防止ACEA(3 μM)诱发的抑制效应.然而,ACEA和AEA减少去极化诱导的Ca2+瞬变的能力在CB2受体敲除小鼠和经百日咳毒素预处理的少突胶质细胞中明显降低.内流性K2+通道阻断剂BaCI:(300 μM)和CsCl2(1 mM)降低电压诱导的Ca2+内流并部分阻断ACEA的抑制效应.本文表明,大麻素抑制少突胶质细胞中去极化诱导的Ca2+瞬变是通过包括PTX-敏感的Gi/o蛋白和阻断K2+内流通道的CB2受体依赖性和非依赖性机制.
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电针镇痛的外周机制与皮肤内源性大麻素系统
疼痛是与组织损伤相关联的不愉快的感觉和情绪体验.伤害性刺激引起外周组织释放多种炎性因子,免疫细胞释放各种细胞因子,参与激活和调制伤害性感受器,同时外周敏感化,致使神经-免疫微环路调节成为痛觉调制的关键环节.传统观念认为,针刺镇痛主要受中枢性镇痛机制以及内源性阿片肽系统调制;近的研究表明,外周镇痛机制(包括局部炎性因子、内源性阿片肽系统以及皮肤内源性大麻素系统)能更好地解释针刺镇痛取得的"气至病所"的功效.
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大麻素2型受体在免疫调节中的作用
大麻(Cannabis)是一种古老的药用植物,早在公元前3世纪,我国便有利用大麻缓解疼痛的记录,古印度对大麻的使用更是可以追溯到3 000年前.大麻的活性化合物是大麻素(Cannabinoids),又称大麻类物质,是从印度大麻(Cannabis sativa)里发现的一组萜酚类化合物.已鉴定的大麻类物质有80多种,其中以△9-四氢大麻酚(△9-tetrahydrocannabinol,△9-THC)为主.但直到20世纪90年代初,人们发现并克隆出了大麻素受体,才得以解释为什么人体可以对大麻提取物产生反应,并由此进一步发现内源性大麻素系统,包括内源性大麻素及其受体和代谢酶.
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大麻素CB2受体参与电针预处理诱导的延迟相脑保护作用
目的 探讨大麻素CB2受体在电针预处理诱导的脑缺血耐受中的作用. 方法 实验1:成年雄性SD大鼠40只按随机数字表法分为5组:大脑中动脉闭塞(MCAO)组、电针(EA)+MCAO组、CB2受体拮抗剂(AM630)+EA+MCAO组、AM630的溶剂(V)+EA+MCAO组和AM630+MCAO组(n=8),线拴法制作MCAO模型,EA预处理在模型前2 h给予,AM630或其溶剂在模型前5.5h给予,于模型后72h行神经功能评分和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死容积百分比的变化;实验2:成年雄性SD大鼠40只分组和处理同上,EA预处理在模型前24 h给予,AM630或其溶剂在模型前27.5 h给予,检测指标的时间和方法同实验1;实验3:成年雄性SD大鼠36只按照随机数字表法分为6组:对照组和EA后2、6、12、18、24 h组(n=6).后5组给予EA处理后在不同时间点应用RT-PCR和Western Blot检测各组大鼠右侧大脑中CB2受体的表达.结果 实验1:与MCAO组和AM630+MCAO组比较,EA+MCAO组、AM630+EA+MCAO组、V+EA+MCAO组大鼠神经功能评分增高.脑梗死容积百分比降低,差异有统计学意义(P<0.05);实验2:与MCAO组比较.EA+MCAO组和V+EA+MCAO组大鼠神经功能评分增高,脑梗死容积百分比降低.与EA+MCAO组比较,AM630+EA+MCAO组和AM630+MCAO组大鼠神经功能评分降低,脑梗死容积百分比增高,差异均有统计学意义(P<0.05);实验3:与对照组比较,EA后18 h组CB2受体mRNA水平增高,EA后24 h组CB2受体蛋白增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CB2受体参与了电针预处理诱导的延迟相脑保护作用.
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脊髓背角大麻素受体2介导CP55940对CCI大鼠的镇痛作用
目的 观察脊髓背角大麻素受体2(CB2R)是否参与大麻素类药物CP55940对慢性坐骨神经缩窄性损伤(CCI)所致神经病理性疼痛的镇痛作用,并初步探讨其机制.方法 成年SD大鼠随机分为4组:对照组、CCI组(鞘内注射DMSO生理盐水)、CP55940+ CCI组(鞘内注射0.05 mg/kg CP55940)、AM630+ CP55940+ CCI组(鞘内注射10-8 mol/L AM630,20 min后再给予0.05 mg/kg CP55940).各组大鼠均于鞘内置管5d后行CCI术,术后连续14 d鞘内注射给药,每天1次;于CCI术前1d,术后第1、3、5、7、10、14天鞘内给药1h后测定热缩足潜伏期(TWL).分别于CCI术后第7天和第14天处死大鼠,取术侧L4～L6脊髓背角,采用免疫印迹技术检测脊髓背角CB2R及丝裂原活化蛋白激酶家族中p38(p38 MAPK)表达情况.结果 大鼠CCI术后即形成稳定的热痛敏,TWL明显缩短;鞘内给予非选择性CB受体激动剂CP55940(0.05mg/kg)可明显延长CCI大鼠TWL(P ＜0.05);选择性CB2受体拮抗剂AM630(10-8 mol/L)可部分阻断CP55940的镇痛效果(P＜0.05).免疫印迹实验结果显示,CCI术可导致术侧脊髓背角CB2R、p38表达增加(P＜0.01);鞘内给予CP55940可诱导CCI所致的CB2R表达进一步增加(P＜0.01),但明显降低CCI所致的p38表达增加(P＜0.01);预先鞘内注射CB2R拮抗剂AM630可阻断CP55940对CB2R及p38表达的影响(P＜0.01).结论 鞘内给予大麻素类药物CP55940对CCI所致的神经痛具有良好的镇痛效应,CB2R通过可能抑制脊髓背角胶质细胞p38的活性参与了CP55940的镇痛作用.
关键词： 神经病理性疼痛 CB2受体 脊髓背角 大麻素 p38丝裂原活化蛋白激酶 -
脊髓背角P2X4、P2Y12和P2Y13受体参与AM1241对CCI大鼠的镇痛效应
目的 观察鞘内注射大麻素CB2受体激动剂AM1241对慢性坐骨神经结扎(CCI)大鼠机械痛阈、脊髓背角P2X4P2Y12和P2Y13受体表达变化的影响.方法 健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为5组(n=8):假手术组、CCI组(坐骨神经结扎+鞘内注射0.005％ DMSO生理盐水)、1 pmol/LAM1241处理组(坐骨神经结扎+鞘内注射AM1241 1pmol/L) 、10 pmol/LAM1241处理组(坐骨神经结扎+鞘内注射AM1241 10 pmol/L)、100 pmol/LAM1241处理组(坐骨神经结扎+鞘内注射AM1241 100 pmol/L).CCI组及不同浓度AM1241处理组大鼠均于鞘内置管7d之后行坐骨神经结扎,连续14 d鞘内注射,每天2次;分别在术前1d,术后第1、3、5、7、10、14天注射1h后测定机械痛阈(MWT),分别在术后第7,14天免疫印迹法(western blot)观察脊髓背角P2X4、P2Y12和P2Y13受体表达变化.结果 ①CCI组术后第1、3、5、7、10、14天MWT显著低于假手术组(P＜0.05),10 pmol/L AM1241和100 pmol/L AM1241处理组术后第1、3、5、7天MWT明显高于CCI组(P＜0.01);但10 pmol/L AM1241处理组术后第10、14天MWT与CCI组相比无明显差异(P＞0.05);100 pmol/LAM1241处理组术后第10、14天MWT仍高于CCI组(P＜0.05);②与假手术组相比,CCI组术后第7、14天脊髓背角P2X4、P2Y12和P2Y13受体表达显著上调(P＜0.01);与CCI组相比,100 mol/L AM1241处理组在术后第7天抑制脊髓背角P2Y12和P2Y13受体表达(P＜0.05),在术后第14天抑制背角P2X4受体表达(P＜0.05).结论 大麻素CB2受体激动剂AM1241的镇痛效应可能与抑制脊髓背角小胶质细胞P2X4、P2Y12和P2Y13受体表达有关.
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鞘内注射AM1241对慢性坐骨神经结扎大鼠热痛阈的影响
目的 观察鞘内注射大麻素CB2受体激动剂AM1241对慢性坐骨神经结扎(CCI)大鼠热痛阈和Iba1表达的影响,探讨CB2受体在大鼠神经病理性疼痛中的作用.方法 成年SD大鼠24只,随机分:sham组(假手术组)、CCI组(坐骨神经结扎+鞘内注射生理盐水)、AM1241处理组(慢性坐骨神经结扎+鞘内注射AM 124110-3M)；连续14d鞘内注射,在术后第1,3,5,7,10,14天测定给药0.5h后热缩足潜伏期(TWL).在第7,14天免疫组化观察背角Iba1表达变化.结果 大鼠CCI术后1d即可形成稳定的热痛敏；与sham组相比,CCI组第7,14天背角Iba1表达明显上调(P＜0.05)；与CCI组相比,鞘内注射CB2受体激动剂AM1241(10-3 M)明显延长CCI大鼠TWL(P ＜0.01),但鞘内注射AM1241对CCI大鼠第7,14天背角Iba1表达上调没有明显影响.结论 鞘内注射大麻素CB2受体激动剂AM1241可以发挥良好的镇痛效应,但AM1241不影响CCI大鼠脊髓背角Iba1表达的上调.
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人二型大麻受体激动剂高通量筛选模型的建立
目的:基于二型大麻受体( CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型.方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[ luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表达水平变化来筛选人CB2受体的激动剂.并对加入激动剂的浓度和作用时间进行优化及考察模型的稳定性.结果:给予10 μmol/L JWH-015 6 h后能取得大相对诱导率.成功建立CB2受体激动剂的高通量筛选模型,筛选模型Z'因子为0.81,表现为良好的稳定性.结论:成功地建立了CB2受体激动剂的筛选模型,为从中药中高通量筛选有效物质奠定了良好的基础.
