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针刺对大负荷运动大鼠骨骼肌线粒体结构和功能的影响
目的:研究针刺对大负荷运动大鼠骨骼肌线粒体结构与功能的影响,探讨针刺干预对运动性骨骼肌损伤的恢复和预防的作用.方法:128只成年雄性SD大鼠,随机分为4组:空白对照组(C组,n=8)、单纯运动组(E组,n=40)、单纯针刺组(A组,n=40)和运动针刺组(EA组,n=40).其中,E和EA组进行一次下坡跑运动,A组和EA组在运动后即刻施加针刺处理.各组根据干预后不同时相又分为0h、12h、24h、48h和72h组(n=8),分别于对应时间点分离比目鱼肌进行检测.使用透射电子显微镜观察骨骼肌线粒体超微结构变化,采用ELISA方法检测各组大鼠比目鱼肌线粒体定量酶CS的含量以及线粒体呼吸链复合体Ⅱ、Ⅳ的活性,应用Western Blot方法检测骨骼肌COX Ⅰ的蛋白表达.结果:单纯针刺后骨骼肌COX Ⅰ蛋白表达上调.大负荷运动后比目鱼肌线粒体出现明显肿胀、肌膜下积聚等超微结构异常变化,且伴有大量自噬体形成,同时柠檬酸合成酶(CS)的含量明显减少,呼吸链复合体Ⅱ、Ⅳ活性以及COX Ⅰ蛋白表达出现一过性的下调(P＜0.05).与运动组相比,运动针刺后明显改善了大负荷运动所致线粒体超微结构的异常变化,有自噬溶酶体的出现,CS含量有所增加,呼吸链复合体Ⅱ活性及COX Ⅰ蛋白表达上调.结论:针刺促进了大负荷运动后骨骼肌线粒体结构的恢复,有效增加了运动后线粒体的数量,减轻了大负荷运动对线粒体功能的损害.
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高强度间歇训练对大鼠心肌线粒体呼吸链复合体活性的影响
目的:探讨长期高强度间歇训练(HIIT)诱导大鼠心肌肥大过程中心功能以及线粒体呼吸链活性的变化.方法:将90只健康Wistar大鼠随机分为HIIT组、持续中等强度训练(MICT)组和安静对照组(RC),每组按照观察时间点(2周、6周和10周)再分为3个亚组,共9组,每组10只.实验结束后利用超声心动图检测大鼠心功能,称量体重和心脏重量,心肌匀浆后用差速离心法提取心肌线粒体,分别测定心肌和线粒体柠檬酸合酶(CS)活性、呼吸链复合体Ⅰ～Ⅳ(C Ⅰ～Ⅳ)活性以及心肌过氧化物酶体增生物激活受体1 α(PGC-1α)、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-MHC、心钠素(ANF)和脑钠素(BNP)蛋白表达量.结果:HIIT组、MICT组大鼠分别于第2～10周和第10周出现心肌肥大.第2周和10周时,各组心功能、呼吸链复合体活性以及各蛋白表达量均无显著性差异(P＞0.05).第6周时,HIIT组左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、心肌α-MHC蛋白表达量以及呼吸链复合体CⅠ、CⅢ、CⅣ活性低于RC组和MICT组(P＜0.05),心肌β-MHC和BNP表达量则高于RC组和MICT组(P＜0.05).结论:长期HIIT(而非MICT)能够诱导大鼠暂时性病理性心肌肥大以及心功能下降,其机制可能与心肌线粒体呼吸链复合体活性下调有关.
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黄精多糖对衰老小鼠肝线粒体呼吸链酶及DNA聚合酶γ表达的影响
目的 探讨黄精多糖对衰老小鼠肝线粒体呼吸链酶及DNA聚合酶γ表达的影响.方法 选用昆明小鼠,用D-半乳糖致成亚急性衰老模型,并观察药物对小鼠呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ+Ⅲ的活性及DNA聚合酶γmRNA的表达.通过RT-PCR法检测衰老小鼠肝线粒体中DNA 聚合酶γ基因在mRNA水平的变化.结果 黄精多糖可提高衰老小鼠呼吸链酶活性,降低DNA聚合酶γ mRNA的表达.结论 黄精多糖可以通过改善肝线粒体能量代谢,使DNA聚合酶γ mRNA表达减少,提高呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ+Ⅲ而起到延缓衰老的作用.
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鸡血藤总黄酮对酒精性肝损伤的保护作用及机制
目的 观察鸡血藤总黄酮对乙醇所致肝损伤小鼠的保护作用,并初步探讨其抗肝损伤作用机制.方法 健康昆明种小鼠60只,随机分组法分为5组:空白组,模型组、鸡血藤总黄酮低、中、高剂量组.除空白组给予生理盐水20 ml/kg,灌胃给药外,其余各组于实验首日开始,给予鸡血藤总黄酮低(0.1 g/kg)、中(0.2 g/kg)、高(0.4 g/kg),1次/d,连续7d,末次给药1h后,模型组和鸡血藤总黄酮低、中、高剂量组一次性给予56度红星二锅头10 ml/kg,空白组予等量生理盐水后,测定小鼠的耐受酒精时间和醉酒时间、脏器系数、肝功改善情况、氧化应激指标、肝组织病理改变及对肝线粒体膜电位(Aψm)和呼吸链的影响.结果 鸡血藤总黄酮可显著减轻小鼠醉酒症状;且高剂量组药物对肝脏保护作用效果高于低剂量组;高、中剂量组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TB)活性均明显低于模型组(P＜0.05);鸡血藤总黄酮高、中剂量组可明显提高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量,与模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),低剂量组作用则不明显;高剂量组还可明显减轻由乙醇所致肝组织病理学损伤;鸡血藤总黄酮高、中剂量组能肝脏线粒体膜电位,提高线粒体呼吸链酶的活性.结论 鸡血藤总黄酮能明显改善乙醇所致肝损伤,抑制氧化应激、减轻线粒体损伤是其抗肝损伤主要作用机制.
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右美托咪定改善老年患者全身麻醉术后认知功能障碍的分子机制研究
目的 探讨右美托咪定对老年患者全身麻醉术后认知功能障碍的改善作用及可能的分子机制.方法 择期全身麻醉下行手术治疗老年患者120例,随机分为观察组和对照组各60例.对照组常规方法麻醉;观察组在对照组基础上静脉泵注右美托咪定0.2 μg/(kg·h).比较2组术前1d及术后1、3、7d美国国立卫生研究院卒中量表(NationalInstitutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分、贝克抑郁量表(Beck Depression Inventory,BDI)评分、Rey听觉性语词学习测验(Auditory Speech Learning Test,AVLT)评分及白细胞线粒体膜电位;术前1d及术后1d采用ELISA法测定白细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性.结果 观察组术后1、3 d NIHSS评分[(8.67±1.32)、(9.62±1.14)分]、AVLT评分[(34.85±2.54)、(39.67±4.58)分]较术前1 d[(11.62±3.88)、(41.75±6.93)分]下降(P＜0.05),术后1、3、7 d BDI评分[(8.37±1.79)、(7.08±1.82)、(5.85±2.16)分]较术前1 d[(4.59±1.38)分]增高(P＜0.05);对照组术后1、3 d NIHSS评分[(6.39±1.01)、(7.83±0.93)分]、AVLT评分[(28.67±2.83)、(34.78±3.85)分]较术前1d[(11.45±4.23)、(41.25±7.21)分]下降(P＜0.05),术后1、3、7 d BDI评分[(12.85±1.48)、(10.17±2.09)、(7.78±2.84)分]较术前1 d[(4.61±1.27)分]增高(P＜0.05);观察组术后1、3 d NIHSS评分、AVLT评分高于对照组(P＜0.05),术后1、3、7 d BDI评分低于对照组(P＜0.05);术后1、3d线粒体膜电位在观察组(0.21±0.02、0.25±0.05)、对照组(0.17±0.01、0.19±0.04)均低于术前1 d(0.30±0.11、0.29±0.09)(P＜0.05),且观察组高于对照组(P＜0.05);术后1d,对照组线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(4.32±2.20、10.91±2.41、16.84±3.84、128.52±17.23)低于术前1d(5.81±2.72、15.63±3.90、3.42±5.13、151.30±11.74)(P＜0.05),观察组术后1d线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性与术前1d比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 全身麻醉下行手术治疗老年患者麻醉诱导期、维持期应用右美托咪定可减轻术后认知功能障碍,机制可能与降低线粒体膜电位,减少线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性损伤有关.
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肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响
目的:观察肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响.方法:将60只SD大鼠随机分为正常组12只和造模组48只,造模组48只大鼠予以高糖高脂饲料喂养3周后,采用小剂量链脲佐菌素加氢化可的松注射造模,观察2周制备2型糖尿病(阳虚证)大鼠,随机分为模型组、肾气丸组、补阳组、罗格列酮组.给药3周后处死大鼠,采用酶联免疫分析(ELISA)法分别测定大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶的活性.结果:模型组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性低于正常组(P＜0.01);肾气丸组、罗格列酮组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显高于模型组(P＜0.05),但组间差异无统计学意义(P＞0.05);补阳组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显低于肾气丸组(P＜0.01).结论:肾气丸能改善2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及ATP酶的活性.
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低氧调节大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体非协同性表达
目的 观察慢性低氧时大鼠线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ蛋白表达变化并讨论其病理生理学意义.方法 成年雄性 Wistax 大鼠随机分为慢性低氧(4500 m,30 d)组和对照组,取双侧腓肠肌,分离线粒体,用Clark氧电极法检测线粒体Ⅲ态呼吸( state 3,ST3)、Ⅳ态呼吸(state 4,ST4)和呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR),用 Western blot检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ蛋白的表达.结果 慢性低氧组大鼠腓肠肌线粒体ST3和RCR显著低于对照组(P<0.05).慢性低氧组大鼠腓肠肌线粒体复合体Ⅰ 30 × 103亚基、复合体Ⅱ70×103亚基、复合体Ⅴα亚基蛋白表达量显著低对照组(P<0.05).2 组线粒体ST4和复合体Ⅲ核心亚基2蛋白表达无显著性差异(P>0.05).结论 低氧可调节大鼠骨骼机线粒体复合体蛋白非协同性表达,导致线粒体氧化磷酸化功能下降.
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补中益气丸对急性运动疲劳大鼠脑组织线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响
目的:观察补中益气丸对急性运动疲劳大鼠脑组织线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响.方法:将24只SD大鼠进行随机分组,分为安静对照组、急性运动组和补中益气丸组,每天按3g/kg的剂量灌胃补中益气丸混合液一次,药物补充一周后进行实验.急性运动为大强度间歇性跑台运动,速度为27m/min,坡度为0,总运动时间90min,每运动10min间歇1min.采用双抗体夹心法酶联免疫分析(EUSA)测定大鼠脑组织中线粒体呼吸链复合物活性浓度,采用无机磷法测定大鼠脑组织中Na+-K+-AT-Pase和Ca2+-ATPase活性浓度.结果:大鼠脑组织呼吸链复合体Ⅰ和Ⅲ各组之间均无显著性变化.与安静对照组比较,急性运动组呼吸链复合体Ⅱ活性、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均显著降低;与急性运动组比较,补中益气丸组(3g/ks)呼吸链复合体Ⅱ、呼吸链复合体Ⅳ、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均显著提高.结论:补中益气丸能改善急性运动后大鼠脑组织呼吸链复合体Ⅱ、Ⅳ及ATP酶活性.
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大骨节病软骨细胞线粒体功能及其与患者年龄的相关性
目的：评估大骨节病患者软骨细胞的线粒体功能及其与年龄的关系。方法关节软骨细胞体外培养,分光光度法测定呼吸链复合体活性,化学发光法检测细胞内 ATP,流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞内活性氧含量,线性回归分析线粒体功能与年龄的相关性。结果大骨节病线粒体呼吸链复合体Ⅱ(P =0.001)、Ⅲ(P =0.005)和Ⅳ(P =0.005)活性降低,柠檬酸合酶活性升高(P =0.04),细胞内 ATP 含量减少(P =0.001),线粒体膜电位下降(P =0.001),细胞内活性氧含量增加(P <0.001)；线粒体功能与年龄在大骨节病和正常对照组均无显著相关性。结论大骨节病软骨细胞存在线粒体功能障碍,线粒体功能与年龄间无显著相关性。
