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晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的表达
目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)对转化生长因子(TGF-β1)表达的影响及内源性活性氧(ROS)在此过程中的调节机制.方法 体外制备AOPP-HAS模型,原代培养人腹膜间皮细胞.采用ELISA法检测TGF-B,蛋白水平,采用RT-PCR半定量分析HPMCs中TGF-β1mRNA的基因表达水平,同时应用流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平.结果 AOPP-HAS能显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β,的分泌与基因表达,同时增加细胞内ROS的生成,呈时间与剂量依赖关系(P＜0.01),不同浓度的抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸预处理细胞,可明显地降低细胞内ROS的生成量,同时显著地抑制AOPP-HAS诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,呈剂量依赖关系(P＜0.01),其中维生素E(50 μ mol/L)组和NAC(10mmol/L)组抑制更加显著.结论 体外制备的AOPP可显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达,部分可能通过内源性ROS介导细胞内信号转导途径调节此过程,抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸可显著降低细胞ROS的生成量和显著抑制TGF-β1的分泌与基因表达.此研究揭示抗氧化剂在防治腹膜纤维化发生过程也许是一种可行的治疗策略.
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大肠癌明胶酶和TGF-β1及其受体的表达
目的 研究明胶酶(MMP-2,9)与转化生长因子(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TGF-β1R Ⅰ)在大肠癌组织中的蛋白表达及其相互关系.方法 应用免疫组织化学S-P法检测89例大肠癌组织中MMP-2、MMP-9与TGF-β1、TGF-β1R Ⅰ蛋白的表达.结果 大肠癌MMP-2、MMP-9、TGF-β1和TGF-β1R Ⅰ阳性率分别为67.4%、65.2%、85.4%和71.9%;MMP-2表达与肿瘤大小和淋巴结转移均呈正相关(均P＜0.01),MMP-9表达与淋巴结转移呈正相关(P＜0.01),TGFβ1R Ⅰ的表达与淋巴结转移呈负相关(P＜0.01);TGF-β1表达状况与MMP-2和MMP-9的表达均呈显著正相关(r=0.256和0.365,P＜0.05和0.001),TGF-β1R Ⅰ和MMP-9的表达呈显著正相关(r=0.225,P＜0.05).结论 MMP-2,9的表达情况与大肠癌侵袭转移有密切关系.MMP-2,9的表达与TGF-β1、TGF-β1R Ⅰ关系密切,可能在一定程度上受到TGF-β1及其受体的调控.
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TGFB1抑制A549细胞增殖的分子机制研究
①目的 构建并鉴定TGFB1真核表达载体pcDNA3.1/TGFB1,探讨TGFB1抑制A549细胞增殖的可能机制.②方法 采用基因重组技术将TGFB1 CDS 插入真核表达载体pcDNA3.1 (+),构建TGFB1真核表达质粒.脂质体介导转染肺癌细胞A549,分为正常对照、空质粒及转染组.MTT和集落形成实验检测各组细胞活性和细胞增殖能力.Real-time- PCR及Western blot方法 检测各组中TGFB1、p53、Bax和Fas的mRNA和蛋白的表达水平.③结果 酶切和测序结果 证实TGFB1真核表达质粒构建成功.MTT和集落形成实验结果 显示pcDNA3.1/TGFB1转染组、细胞活性和细胞增殖能力明显降低(P<0.01).pcDNA3.1/TGFB1转染组与正常对照组、空质粒组比较:TGFB1、p53、Bax和Fas mRNA表达显著增加(P<0.01);TGFB1、p53、Bax和Fas蛋白的表达水平显著增加(P<0.01).④结论 TGFB1可能通过上调p53、Bax和Fas蛋白的表达抑制肺癌细胞A549的增殖.TGFB1有可能成为肿瘤生物治疗的靶点.
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氟影响成骨细胞转化生长因子超家族成员表达的传导通路
背景:氟中毒骨转换过程中转化生长因子β家族成员参与了骨转换过程,但是机制不清楚.目的:观察氟对体外培养成骨细胞中转化生长因子β1,骨形态发生蛋白2 和SMAD4 信号转导通路的影响.方法:体外培养人成骨细胞,按染氟(NaF)剂量将成骨细胞分为0(对照),0.625,1.25,2.5,5,10,20,40,80,160 mg/L组进行实验观察.结果与结论:氟对成骨细胞增殖影响与转化生长因子B1,骨形态发生蛋白2 表达有密切的关系.当氟质量浓度为0.625 mg/L时,氟化物产生的效应主要通过转化生长因子B1,骨形态发生蛋白2,SMAD4 信号转导通路调节.当低于或超过此剂量时,氟化物产生的效应与信号转导通路关系不大,可能存在转化生长因子β1 及骨形态发生蛋白2 其他传导通路的调节.
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骨形态发生蛋白7/Smads信号通路及其在肝纤维化进程中的作用
肝纤维化是由于各种病因导致肝损伤后,机体对损伤进行修复的过程.近年来研究发现骨形态发生蛋白(BMP)7及其下游的Smads蛋白可以通过不同的途径拮抗转化生长因子(TGF) β1的致肝纤维化作用,包括诱导细胞外基质降解,抑制细胞凋亡,减少多种促炎症因子的表达,促进肝细胞再生等,探讨了BMP-7/Smads信号通路在肝纤维化过程中的作用.
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冬连胶囊对STZ诱导糖尿病肾病大鼠P38mapk、CREB1及TGFβ1蛋白表达的影响
目的:探讨冬连胶囊对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及TGF-β1/p38 MAPK信号通路影响.方法:雄性SD大鼠60只,随机分为正常组10只,模型组50只.模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(45 mg/kg),造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、科素亚组、冬连胶囊低、中、高剂量组.分别于灌胃后第1、3、8周收集24 h尿液检测24 h尿蛋白定量.灌胃第8周,处死大鼠取肾组织,western-blotting法观察转化生长因子β1(TGF-β1)、p38MAPK、CREB1蛋白表达.结果:与模型组比较,各治疗组肾脏组织中TGF-β1、p-p38 MAPK、p-CREB1,蛋白表达明显减少(P<0.01);冬连胶囊各治疗组可不同程度降低模型大鼠的24 h尿蛋白量,减轻模型大鼠的肾比重,对糖尿病肾病模型大鼠具有肾脏保护作用.结论:冬连胶囊可能通过调控糖尿病肾病肾组织TGF-β1/p38 MAPK/CREB1信号表达,减轻肾脏细胞纤维化、减缓肾小球细胞硬化,进而降低24 h尿蛋白定量,减轻肾脏损害,对糖尿病肾病起到一定的保护及延缓病程进展的作用.
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止喘胶囊对哮喘大鼠气道重建转化生长因子β1和血小板源性生长因子蛋白及其mRNA表达的影响
目的 探讨止喘胶囊对哮喘大鼠肺组织TGF-β1、PDGF-B蛋白及其mRNA表达的影响.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、止喘胶囊组、地塞米松组、止喘胶囊加地塞米松组五组,每组8只.通过腹腔注射卵蛋白、右腿肌注氢氧化铝致敏及反复雾化吸入不同浓度(1%、2%、3%)卵蛋白溶液建立哮喘气道重建动物模型.在哮喘激发4周后检测肺组织TGF-β1、PDGF-B蛋白及其mRNA表达.计量资料用ANOVA进行分析.结果 哮喘模型组大鼠气道上皮TGF-β1、PDGF-B蛋白以及mRNA表达显著高于正常对照组大鼠(P＜0.01);止喘胶囊组、止喘胶囊加地塞米松组和地塞米松组大鼠TGF-β1、TGF-β1 mRNA表达显著低于哮喘模型组大鼠(P＜0.01或P＜0.05).结论 止喘胶囊通过减少气道上皮TGF-β1、PDGF-B mRNA表达从而减轻气道炎症及气道重建,降低气道高反应性,从而发挥固本防喘作用.
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转化生长因子β1对自体移植肋软骨增殖及代谢的作用
目的 评估体内环境下转化生长因子β1 (TGF-β1)对自体移植肋软骨增殖及代谢的作用.方法 健康新西兰白兔18只(1月龄,体重1 kg),随机分为空白对照组、凝胶对照组、5 ng/mL TGF-β1凝胶组、10 ng/mL TGF-β1凝胶组、手术对照组、5 ng/mL TGF-β1溶液组、10 ng/mL TGF-β1溶液组,每组各3只.截取兔右侧第7、8、9根带软骨膜肋软骨共4段,按不同组别处理后移植于背部皮下.移植术后8周,取出移植或空白对照的肋软骨,行大体观察及软骨切片苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色,在光学显微镜下观察软骨显微结构变化情况,并检测软骨内糖胺多糖(GAG)含量.结果 在本实验条件下,10 ng/mL TGF-β1凝胶组软骨细胞的增殖活跃,GAG含量与空白对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05),但显著高于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在体内环境下,TGF-β1能有效抑制幼年兔移植后软骨基质的降解,促进细胞增殖及外周基质的分泌,能明显抑制幼年兔移植后软骨细胞的凋亡、坏死,抑制软骨退行性变.10 ng/mL浓度较5 ng/mL浓度作用明显.TGF-β1与凝胶复合,可提高其疗效,可能与其缓慢释放、作用持久相关.
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糖尿病大鼠肾组织VEGF和TGF-β1的动态表达及意义
目的 动态观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织中血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况.探讨它们在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用及其相互关系.方法 实验动物随机分为5组.依病程长短分为:(1)A 组(2周组);(2)B组(4周组);(3)C组(8周组);(4)D组(16周组);(5)E组(24周组),每组分别设有正常对照组(N组)和糖尿病组(DM组).注射STZ法复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学方法检测肾组织VEGF、TGF-β1及纤连蛋白(FN)的表达;PAS染色光镜观察肾小球系膜、肾小管基底膜变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变:生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量.结果 (1)正常对照组大鼠肾组织VEGF和TGF-β-1均有少量表达,而糖尿病大鼠肾组织两者的表达均显著高于正常对照组.(2)糖尿病16周时肾组织VEGF表达与TGF-β1呈正相关.(3)随糖尿病进展.细胞外基质纤连蛋白(FN)在肾小管及肾小球表达增多,24h 尿蛋白也增多.并且VEGF、TGF-β1两者都分别和FN、24h尿蛋白呈正相关性.结论 糖尿病肾病大鼠肾组织中 VEGF及TGF-β1参与了早晚期蛋白尿及肾脏肥大硬化的发生,并且 VEGF 和 TGF-β1 相互作用,共同促进了肾病的发生发展.
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转化生长因子β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在早产大鼠高氧肺损伤后肺组织中的表达变化和意义
目的探讨转化生长因子B(TGF B1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体(TBRⅠ、TBRⅡ)与高氧肺损伤发生、发展的关系.方法应用免疫组化法结合图象分析处理系统研究TGF B1、TBR I、TBR Ⅱ在早产大鼠高氧肺损伤肺组织中的免疫表达.结果TGF B1、TβRⅠ、TBRⅡ广泛分布于空气组早产大鼠肺组织,而在高氧组甲表达明显增加.早产大鼠高氧后病理改变呈轻～中度肺纤维化和明显的肺泡发育阻滞.结论TGF B1、TBRⅠ、TBRⅡ在早产大鼠高氧肺损伤中具有重要作用,过度表达的TGF B1可能通过其受体TBRⅠ、TBRⅡ参与调控肺纤维化和肺发育.
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中药复方对糖尿病大鼠肾小管PKCα和ERK1/2表达的影响
目的 观察自拟的中药复方对糖尿病(DM)大鼠肾小管蛋白激酶Cα( PKCα)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的药理机制.方法 雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组(N组),糖尿病组(D组),中药复方1号治疗组(Y1组),中药复方2号治疗组(Y2组),依那普利治疗组(E组).尾静脉注射链脲佐菌素(55 mg/kg)复制DM动物模型.实验12周时处死大鼠,生化方法测血糖、24h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯、胆固醇；光镜观察肾组织的形态结构变化；免疫组化检测肾组织PKCα、TGF - 131、FN、ERK1/2蛋白表达情况；RT - PCR法检测大鼠肾皮质ERK2 mRNA水平.结果 D组大鼠血糖、24h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯和胆固醇较N组显著升高,药物治疗组的24h尿蛋白均较D组显著降低,Y1、Y2组的甘油三酯、胆固醇比D组显著降低,而Y1组和E组的血肌酐显著低于D组；D组大鼠出现明显的肾脏形态学异常改变,而Y1、Y2组和E组病变明显减轻；免疫组化结果显示,与N组相比,D组大鼠肾组织PKCα、ERK1/2 、TGF -β1、FN表达显著增高,Y1、Y2组和E组较D组明显降低；RT - PCR结果显示D组大鼠肾皮质ERK2mRNA表达较N组显著增多,Y1、Y2组和E组ERK2 mRNA的表达较D组均显著下调.结论 中药复方和依那普利可能通过抑制PKCα-ERK1/2信号通路而下调TGF -β1的过度表达,使FN的生成减少,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用.
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miR-663通过靶向TGFB1对肺癌细胞A549增殖的调控
目的 利用双荧光蛋白报告基因分析系统,验证miR-663的直接靶基因TGFB1,探讨miR-663促进肺癌细胞A549增殖的可能机制.方法 实时定量RT-PCR检测10对肺癌组织和正常肺组织中miR-663的表达水平;利用细胞计数和集落形成实验来验证细胞转染miR-663 ASO后的A549细胞增殖.选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将TGFB1 3'UTR的一段特异性序列插入该质粒中,并与miR-663及表达红色荧光蛋白质pDsRed2 -N1共同转染肺癌细胞系A549,转染后细胞提取的蛋白样品,荧光分光光度计进行定性和定量检测.结果 miR-663在肺癌组织中的表达高于在正常肺组织中的表达;miR-663表达明显促进了细胞A549的增殖;共转miR-663和pcDNA3/EGFP-TGFB13 UTR质粒后,绿色荧光蛋白的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP- TGFB 13'UTR共转组.结论 miR-663可能通过靶定靶基因TGFB1,促进了肺癌细胞A549的增殖.
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JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ在胆道闭锁肝纤维化中的作用研究
目的 研究c-Jun氨基末端激酶2(c-Jun N-terminal kinase,JNK2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)及Collagen Ⅲ在胆道闭锁(BA)肝组织中的表达情况及在肝纤维化进程中的作用. 方法 选取胆管扩张症肝活检病例10例,为胆扩组;BA肝活检病例15例,为BA组;BA晚期因肝功能衰竭而行肝移植患者自体肝活检10例,为肝移植组.采用HE染色观察并评价肝标本纤维化程度;免疫组化染色检测JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ在肝组织中的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝组织中JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ基因表达情况. 结果 ①HE染色:胆扩组偶可见少许纤维细胞增生;BA组汇管区增宽,纤维组织增生、桥接纤维化现象普遍,可见假小叶形成;肝移植组汇管区明显增宽,纤维组织增生较重,广泛桥接纤维组织形成,假小叶显著.②免疫组化:胆扩组JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ表达为弱阳性,BA组及肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白均在肝细胞、汇管区胆管上皮细胞及血管内皮细胞胞质中阳性表达.③半定量分析:三组JNK2(0.122±0.008、0.182±0.017和0.198±0.033),TIMP-1(0.123 ±0.009、0.185±0.012和0.201 ±0.017)和Collagen Ⅲ(0.126±0.012、0.194±0.008和0.208±0.033)表达比较,差异有显著统计学意义(P＜0.001);三组中,BA组及肝移植组JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ表达明显高于胆扩组(P＜0.05);肝移植组JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ蛋白含量与BA组比较,差异无统计学意义(P值均＞0.05).④qRT-PCR:三组JNK2、TIMP-1和Collagen Ⅲ mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(0.221(0.17)vs1.395(1.22)vs 1.095 (1.21),H=17.686,P=0.003;0.439(0.31)vs 1.404(0.85)vs 1.571(0.66),H=20.648,P =0.000;0.917(0.09)vs 1.802(1.35)vs 1.957(1.30),H=15.555,P =0.007),BA组及肝移植组肝内JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ mRNA表达含量比胆扩组高(P值均小于0.017). 结论 JNK2、TIMP-1及Collagen Ⅲ在BA患儿随着肝纤维化加重而表达升高,表明其可能参与并促进BA肝纤维化进程.
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香叶醇对人肝癌细胞株Huh7增殖及TGF-b1/Smad 2信号通路影响研究
目的:探讨香叶醇对肝癌细胞株Huh7增殖及TGF-b1/Smad 2信号通路的影响.方法:不同浓度香叶醇干预体外培养肝癌细胞株Huh7不同时间.MTT检测香叶醇对Huh7细胞生长情况的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞内TGF-b1和Smad 2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况.结果:MTT结果显示香叶醇显著抑制了肝癌细胞的生长.流式细胞结果表明香叶醇明显降低了肝癌细胞S期含量而增加了G0/G1期含量.而TGF-b1和其下游因子Smad2的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到香叶醇的抑制,且这种抑制作用呈浓度一时间依赖性.结论:香叶醇可能够通过阻断TGF-b1/Smad 2信号通路抑制肝癌细胞生长.
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灯盏细辛抑制外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变TGFβ1的表达
目的:探讨灯盏细辛(EBHM)对外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变眼玻璃体腔TGFβ1和视网膜TGFβ1mRNA表达的影响.方法:大鼠48只随机分为rrVEGF164,rrVEGF164+EBHM,rrVEGF164+NS和正常对照4组.rrVEGF164+EBHM组每天60g/L的灯盏细辛浸膏ip.分别于不同时问收集玻璃体液后采用ELISA检测TGFβ1的浓度,并提取视网膜总的RNA后行RT-PCR检测TGFB 1mRNA的表达.结果:在2wk或6wk时VEGF、VEGF+NS和VEGF+EBHM组实验眼玻璃体内TGFβ1的浓度均高于正常对照组(P＜0.05).VEGF+EBHM组低于VEGF组和VEGF+NS组(P＜0.05).各组TGFβ1mRNA/GAPDHmRNA的差异与玻璃体内的TGFβ1浓度变化一致.结论:rrVEGF164作用大鼠玻璃体内TGFβ1浓度升高,视网膜TGFβ1mRNA表达增强.灯盏细辛能部分抑制rrVEGF164诱导的大鼠视网膜血管病变玻璃体内TGFβ1浓度的升高和视网膜TGFβ1mRNA表达的增强.
关键词： 重组大鼠血管内皮生长因子 灯盏细辛 转化生长因子B1 -
酒精性肝病大鼠模型中TGFβ1的表达及抗纤复方Ⅰ号对TGFβ1表达的影响
目的了解转化生长因子(TGF B1)与酒精性肝病的关系,观察中药抗纤复方Ⅰ号(KX Ⅰ)对TGFB的影响.方法把大鼠分为正常对照、酒精对照和中药预防等三组,用酒精灌胃的方法建立酒精性肝病模型.分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学方法测定血清及肝脏中的TGF B1含量.结果①在8周末及12周末,酒精组血清TGF B1水平分别为(15.52±0.42)ngg/l,(17.77±0.25)ng/ml,明显高于对照组(P＜0.01),而且随选模时间延长,酒精组TGF β的含量进行性增加.②中药组血清TGFβ1水平在8周末及12周末分别为(13.21±0.21)ng/ml,(14.69±0.16)ng/ml,它们均高于对照组而低于相对应的酒精组(P＜0.01).③肝组织内TGF B1的改变与血清中的结果相平行.结论血清及肝脏中TGF B1浓度随选模时间延长而增加.中药能减少TGF β1生成,有防止肝纤维化的作用.
